一种检测人心力衰竭新型标志物ST2的快速诊断试剂盒制造技术

本实用新型专利技术提供一种同时检测人全血、血清或血浆中人心力衰竭标志物ST2的免疫胶体金试剂盒，包括塑料盒体、衬垫、附着在衬垫上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层和吸收垫。衬垫的两端分别设有样品垫和吸收垫，衬垫中部设有硝酸纤维素膜检测层。检测层与样品垫交界处，设有包被金标记的抗人可溶性ST2抗体的金标垫，金标垫一端设置在样品垫之下，另一端设置在检测层之上。检测层上设有检测线和质控线，检测线包被有抗人可溶性ST2抗体，质控线包被有羊抗鼠IgG。本实用新型专利技术试剂盒灵敏度高、操作简捷、结果判断方便，可结合仪器使用；和其他心力衰竭标志物无交叉反应；检测样品范围广，具有良好的经济效益和社会效益。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种同时检测人全血、血清或血浆中人心力衰竭标志物ST2的试剂盒，具体涉及一种检测人心力衰竭标志物ST2的免疫胶体金快速检测试剂盒。
技术介绍
心力衰竭(heartfailure)HF简称心衰)是一种以心室功能不全、神经内分泌激活和外周血流分布异常为特征的复杂的临床综合征，是各种心血管疾病的终末阶段。心力衰竭的患病率随着年龄的增加而迅速增加，其发病率和死亡率均较高，五年存活率与恶性肿瘤相仿。在我国50家医院住院病例调查中发现，心衰住院率占同期心血管病的20%，死亡率却占40%。而在欧洲普通人群中，症状性心衰的发病率达O. 1% 2.0%。在美国，患有心力衰竭的病人大约有500万人，每年新增20万人，心力衰竭已成为美国主要的公共卫生 问题。ST2蛋白是白介素-I (IL-I)受体家族成员之一，有血清可溶性ST2蛋白(sST2)和跨膜性ST2蛋白(ST2L)两种。ST2L通过与其特异性配体白介素-33IL-33结合，抑制血管紧张素II和苯肾上腺素诱导的抑制酶的磷酸化，在心脏压力失代偿的情况下，起到对心肌细胞的保护作用。研究表明，当心肌细胞和纤维原细胞受到机械牵张后，ST2和IL-33的表达率明显增加。心力衰竭患者可溶性ST2水平有显著升高。由此可见，ST2作为生物标志物，在心力衰竭诊断中具有重要的临床应用价值。临床上心衰时的症状和体征特异性较差，常可因症状轻微、老龄、肺部疾病及肥胖等而难以鉴别。超声心动图、X线及有创血流动力学等辅助检查也有局限性，且受客观条件限制。其他生物标志物如脑利钠肤(BNP和NT-proBNP)，具有半衰期长、血浆浓度高、体外稳定性好等优点，是早期发现并治疗心衰患者的良好指标。但其预测价值会受到年龄、肾功能损害和体重指数的影响。CRP最早也被认可在高危人群中早期发现症状不典型的心力衰竭患者，但是，CRP缺乏特异性，在各种急慢性感染、急性冠脉综合征、吸烟、以及风湿免疫性等疾病中均有升高。相比前述几种方法，可溶性ST2作为诊断指标，具有特异性强、个体变异低、不受生理节律影响、不受标本采集条件限制、不受标本类型(血浆或血清)影响等优势。另外，胶体金免疫层析技术将反应时间大大缩短，结果客观可靠，操作简便、不需要配备复杂仪器设备，结果直观肉眼可判断。
技术实现思路
本技术的目的在于提供一种特异性强，操作简便、快速、高效、准确，检测时间短的检测人心力衰竭标志物ST2的试剂盒。本技术提供的检测人心力衰竭标志物ST2的免疫胶体金快速检测试剂盒，包括塑料盒体、衬垫、附着在衬垫上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层和吸收垫。衬垫的两端，分别设有样品垫和吸收垫；衬垫中部设有硝酸纤维素膜检测层。硝酸纤维素膜检测层与样品垫交界处，设有包被金标记的抗人可溶性ST2抗体的金标垫。金标垫一端部分设置在样品垫之下，另一端部分设置在硝酸纤维素膜检测层之上。在与样品垫延续的检测层上设有检测线T和质控线C，检测线上包被有抗人可溶性ST2抗体，质控线上包被有羊抗鼠IgG。所述金标垫设置在样品垫之下，与样品垫设有5_的重叠区；所述金标垫设置在硝酸纤维素膜检测层之上，与硝酸纤维素膜检测层设有2mm的重叠区，重叠区保证样品在样品垫、金标垫和检测层上无阻碍地流动。所述塑料盒体用于固定盒体内衬垫，盒体上设置加样区和检测观察区，用于滴加样品、观测检测结果。所述衬垫为PVC板，也可以代之以不吸水的硬质材料，用于固定盒内各组建。所述金标垫上抗人可溶性ST2抗体的金标记为胶体金颗粒，也可以代之以荧光颗粒、乳胶颗粒、磁性颗粒或其他有色颗粒。 本技术试剂盒具有如下有益效果(I)检测速度快。全过程只需10分钟，可以实现单个样品或大量样品的检测；(2)灵敏度高。最低检测单位为ng/ml ；(3)特异性强。和其他心力衰竭标志物无交叉反应；(4)操作简捷。检测过程无需其他试剂，样品无需特殊处理，可肉眼观测也可结合仪器使用。(5)结果判断方便。快速检测试剂盒以肉眼可见的红色印记作为结果判断标准，即检测层上只有质控线(C线)显示红色，表示样品不含人可溶性ST2，检测线(T线)和控制线(C线)上均显示红色，表示样品含有人可溶性ST2。结果判断明确、直观。(6)检测样品范围广。全血、血清或血浆均可用作试验样本，尤其是外周血，所需试剂和样品量少，样品量最低可至50-100 μ L。附图说明图I为本技术的结构示意图，其中I为样品垫、和吸收垫，2为金标垫、，3为硝酸纤维素膜检测层，4为检测线Τ，5为质控线C，6为吸收垫，7为衬垫。图2为本技术的检测结果判读示意图，图2. a为阳性结果，图2. b为阴性结果，图2. c结果无效，图2. d结果无效。其中8为观察区，9为加样区，10为塑料盒体，T为检测线，C为质控线。具体实施方式以下结合附图详细描述本技术试剂盒的结构和使用方法。如图I显示的本技术试剂盒的结构示意图衬垫7由PVC板制成，衬垫7的两端，分别设有样品垫I和吸收垫6，衬垫7中部设有硝酸纤维素膜检测层3。硝酸纤维素膜检测层3与样品垫I交界处，设有包被金标记的抗人可溶性ST2抗体的金标垫2，金标垫2一端部分设置在样品垫I之下，另一端部分设置在硝酸纤维素膜检测层3之上。在与样品垫I延续的检测层3上设有检测线T4和质控线C5，检测线4上包被有抗人可溶性ST2抗体，质控线5上包被有羊抗鼠IgG。金标垫2设置在样品垫I之下，与样品垫设有5mm的重叠区；金标垫2设置在硝酸纤维素膜检测层3之上，与硝酸纤维素膜检测层设有2_的重叠区。使用本技术试剂盒检测人心力衰竭标志物ST2实施例样本采集于晨起7 10时对20例心力衰竭患者进行空腹抽前臂血，立即加入EDTA和/或肝素等抗凝剂，离心后取血清置于-20°C备检。检测方法 将试剂盒平放，取待测样品缓慢滴加4-5滴于试剂盒的加样区中(尽量滴加于加样区中部，以保证测试结果准确)，静置等待10分钟。在吸水材料的作用下，待检样品缓慢移动到检测区和质控区，膜反应体系启动。无论待检样本中有无人可溶性ST2，质控区处都应显现一条颜色条带，这是重要的判断标准，可以确定是否加入足够量的外周血，层析过程是否正常，同时也可以作为判断检测盒是否合格的一个内在标准。结果判定(I)若待检样品中人可溶性ST2的浓度高于检测阈值时，即样品中的人特异性ST2与固定在膜上的检测区内的单抗结合，因而检测区内会出现一条红色检测带，表示阳性(+)结果，即在质控区内和检测区内内均出现一条颜色条带，如图2.a所示。(注意由于待检样品中人可溶性ST2的浓度有所不同，因而测试区内的颜色条带可能出现颜色深浅的现象。但是，在一定时间内，不论测试区内的颜色条带颜色深浅，都可判定为阳性。)(2)在层析过程中，若待测的外周血样品中不含有人可溶性ST2或其浓度低于检测灵敏度时，即样本中没有特异性抗原与膜上的检测带内的单抗发生免疫反应，因而检测区内不会出现一条颜色检测带，表示阴性(_)结果，即仅在质控区内出现一条颜色带，如图2.b所示。(3)若质控区未出现颜色条带，则检测过程失败。可能的原因为操作过程不正确、试剂盒已变质损坏或出现质量问题，如图2. c和2. d所示。14例心力衰竭确诊患者和6例健康实验人员随机采集外周血标本，盲检结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测人全血、血清或血浆中人心力衰竭标志物ST2的免疫胶体金试剂盒，包括塑料盒体、衬垫、附着在衬垫上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层和吸收垫，其特征在于：衬垫的两端，分别设有样品垫和吸收垫，衬垫中部设有硝酸纤维素膜检测层3，硝酸纤维素膜检测层与样品垫交界处，设有包被金标记的抗人可溶性ST2抗体的金标垫，金标垫一端部分设置在样品垫之下，另一端部分设置在硝酸纤维素膜检测层之上，在与样品垫延续的检测层上设有检测线T和质控线C，检测线4上包被有抗人可溶性ST2抗体，质控线上包被有羊抗鼠IgG。

【技术特征摘要】
1.一种同时检测人全血、血清或血浆中人心力衰竭标志物ST2的免疫胶体金试剂盒，包括塑料盒体、衬垫、附着在衬垫上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层和吸收垫，其特征在于衬垫的两端，分别设有样品垫和吸收垫，衬垫中部设有硝酸纤维素膜检测层3，硝酸纤维素膜检测层与样品垫交界处，设有包被金标记的抗人可溶性ST2抗体的金标垫，金标垫一端部分设置在样品垫之下，另一端部分设置在硝酸纤维素膜检测层之上，在与样品垫延续的检测层上设有检测线T和质控线C，检测线4上包被有抗人可溶性ST2抗体，质控线上包被有羊抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：张开山，苏广宇，高阳，
申请(专利权)人：杭州华得森生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：