一种测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法制造技术

本发明专利技术公开了一种测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法，其中反向高效液相色谱采用的流动相采用极性有机溶剂、水、冰乙酸体积比为40-60：40-60：0.05-0.5的混合液。本发明专利技术涉及的反向高效液相色谱法简便快捷，灵敏度高，准确性好，样品检测专一性强，各项方法学指标均可满足罗氟司特原料或制剂的检测需要。

【技术实现步骤摘要】
一种测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱
本专利技术属于药物分析
，涉及一种测定罗氟司特原料及其杂质的方法，特别涉及一种测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法。
技术介绍
罗氟司特(Roflumilast)，化学名为3_环丙基甲氧基_N_(3，5_ 二氯吡 P定-4-基)-4- 二氟甲氧基苯甲酸胺(3_cyclopropyImethoxy-N- (3, 5-dichloropydin-4-yl )-4- (difluoromethoxy)benzamide),是德国 Altana 公司开发的憐酸二酯酶 4(PDE4)抑制剂，2010年7月经欧盟批准首次于德国上市，临床用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD)，商品名 Daxas，2011年3月经美国FDA批准上市。慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种严重的致残、致死性疾病，已造成沉重的社会经济负担，本品通过抑制TOE4减少炎症介质的释放，进而抑制如COPD和哮喘等呼吸道疾病对肺组织造成的损伤[韩伟，周新.慢性阻塞性肺疾病的治疗新选择——罗氟司特.《世界临床药物》2011，32 (7):396-399 ;马培奇.慢性阻塞性肺病治疗新药罗氟司特.《上海医药》2011，32 (4) 201-202;封宇飞.磷酸二酯酶_4抑制剂罗氟司特的药理与临床研究新进展·《中国新药杂志》2011，20 (14)1257-1260, 1265 页]。因此，合成罗氟司特原料，制成相应的制剂具有重大的医学意义。目前，国内对罗氟司特含量和有关物质的测定方法未见报道，国外对罗氟司特含量和有关物质的测定主要是高效液相色谱法[V. D. Barhate and P. C. Deosthalee. Validation of Rapid liquid Chromatographic Method for the Determination of Roflumilast. J. Chem. Pharm. Res. , 2011,3(2): 770-775 ；V. D. Barhate and P. C. Deosthalee. Indian Journal of Pharmaceutical Sciences, 2010,72 (3)，401-404.], 其色谱条件如下色谱柱为Z0RBAX，SB-C18, 1.8ym, 50mmX4. 6mm(ID);流动相采用的是乙腈和甲酸铵缓冲盐(PH3. 5)梯度洗脱程序，其中流动相比例变化为5个；流速为0. 5 mL/min ;柱温25°C;检测波长为UV210nm ;进样量为3 μ I。但其所用液相方法分离的杂质不多，而色谱条件却较苛刻，不利于一般实验室或药厂推广应用。
技术实现思路
鉴于现有技术的不足，本专利技术的目的在于通过大量试验对罗氟司特原料及制剂的分析方法进行研究，从而提供一种测定罗氟司特原料及其杂质含量、罗氟司特制剂及其有关物质含量、罗氟司特制剂溶出度的反向高效液相色谱法。本专利技术的目的是这样实现的一种测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法，其中反向高效液相色谱采用的流动相采用极性有机溶剂、水、冰乙酸体积比为40-60 40-60 0. 05-0. 5的混合液。优选地，所述测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法，其中反向高效液相色谱采用的流动相采用极性有机溶剂、水、冰乙酸体积比为52 48 0. I的混合液。进一步优选地，所述测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法，其中所述极性有机溶剂为甲醇或/和乙腈。进一步优选地，所述测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法，其中所述极性有机溶剂为乙腈。再进一步优选地，所述测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法， 其中反向高效液相色谱条件为色谱柱Z0RBAX,SB-C18, 5 μ m, 250X4. 6mm (ID);流动相乙腈7jC :冰乙酸=52:48:0. I ；流速:1·OmL/min ；柱温40°C;检测波长UV210nm;进样量20-100μ I。与现有技术相比，本专利技术涉及的反向高效液相色谱法具有如下优点和显著的进步简便快捷，灵敏度高，准确性好。经试验，相关系数均在O. 999以上。样品检测专一性强，各项方法学指标均可满足罗氟司特原料或制剂的检测需要。附图说明图I为罗氟司特各中间体及其混合物的色谱分离图。图I A中a为4-氨基-3，5-二氯吡啶；b为罗氟司特氮氧化物；(为3-环丙基甲氧基_ 二氟甲氧基苯甲酸；d为3-环丙基甲氧基-二氟甲氧基苯甲醛；e为罗氟司特。图I B为色谱分离的3D图。图2为罗氟司特及各中间体低浓度标准曲线图；其中A为4-氨基-3，5- 二氯吡啶，B为罗氟司特氮氧化物，C为3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯甲酸，D为3-环丙基甲氧基-4- 二氟甲氧基苯甲醛，E为罗氟司特。图3为罗氟司特含量测定标准曲线图。图4为罗氟司特在不同介质中的溶出标准曲线图；其中A为O. lmol/L盐酸，B为水，C为pH4. 5醋酸盐缓冲液，D为pH6. 8磷酸盐缓冲液。具体实施方式罗氟司特已被开发上市的剂型只有片剂，本专利技术所用的罗氟司特也是作为罗氟司特片剂的原料。本专利技术所用的分析方法对罗氟司特原料和制剂的含量和有关物质均能获得满意的分析结果，满足分析方法的各项验证结果。具体地，根据不同的测定目的，本专利技术所述高效液相色谱法的色谱条件如下(I)罗氟司特原料及其杂质的高效液相色谱法色谱柱Z0RBAX,SB-C18, 5 μ m, 250X4. 6mm (ID);流动相乙腈7jC :冰乙酸=52:48:0. I ；流速1·Oml/min ；柱温40°C;检测波长uv21Onm ；进样量20μ I。(2)罗氟司特制剂含量和有关物质的反相高效液相色谱法色谱柱Z0RBAX,SB-C18, 5 μ m, 250X4. 6mm (ID);流动相乙腈7jC :冰乙酸=52:48:0. I ；流速1·Oml/min ；柱温40°C;检测波长uv21Onm ；进样量20μ I。(3)罗氟司特制剂溶出度的高效液相色谱法，溶出介质为O. 1%的月桂醚，色谱条件为 色谱柱ZORBAX,SB-C18, 5 μ m, 250X4. 6mm (ID);流动相乙腈7jC :冰乙酸=52:48:0. I ；流速1·Oml/min ；柱温40°C；检测波长uv21Onm ；进样量100μ I。本专利技术实施例所采用的实验仪器如下岛津高效液相色谱仪，配备LC-20AT，SH)-M20A。色谱分离系统的控制和记录有 LCSolution 15C色谱工作站完成。色谱柱选用的是Zorbax SB C18 (安捷伦公司)5 μ m， 250 X 4. 6mm (ID)。本专利技术实施例所采用的试剂与药品如下罗氟司特片剂市售品由公司提供(Forest res inst inc公司)，罗氟司特原料为自制，经过结构确认；罗氟司特氮氧化物(N- (3，5- 二氯吡啶-4-基)-3-环丙基甲氧基-4- 二氟甲氧基本甲酰胺)由剀试上海科技有限公司提供；4_氨基-3，5- 二氯吡啶，罗氟司特中间体B (3-(环丙基甲氧基)-4- (二氟甲氧基)苯甲酸)，罗氟司特中间体B前体 (3-(环丙基甲氧基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法，其特征在于：反向高效液相色谱采用的流动相采用极性有机溶剂、水、冰乙酸体积比为40？60：40？60：0.05？0.5的混合液。

【技术特征摘要】
1.一种测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法，其特征在于反向高效液相色谱采用的流动相采用极性有机溶剂、水、冰乙酸体积比为40-60 :40-60 :0. 05-0. 5的混合液。2.根据权利要求I所述测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法，其特征在于反向高效液相色谱采用的流动相采用极性有机溶剂、水、冰乙酸体积比为52 48 O.I的混合液。3.根据权利要求I或2所述测定罗氟司特原料及其杂质含量的反向高效液相色谱法，其特征在于所述极性有机溶剂为甲醇或/...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雪根，何凌云，何凤琴，罗晶，周磊，秦妮，纪慧敏，
申请(专利权)人：南京艾德凯腾生物医药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：