本发明专利技术涉及酶解法制备鹿胎活性多肽。采用的技术方案是：取新鲜鹿胎盘除去筋、膜，剪碎；研磨机中研磨、充分匀浆；-40～-20℃冷冻，室温下融化，反复冷冻和融化3～5次，离心，上清液为鹿胎盘提取液，沉淀物备用；取鹿胎盘提取液，于30～35℃下预热10～15min，调节pH值为1.5-7.5，于35～50℃下，加入酶，酶解反应5～8h后，于65℃下加热灭菌30min，离心，取上清液，即为鹿胎活性多肽提取液；所得鹿胎活性多肽提取液经冷冻干燥制得鹿胎盘活性多肽干粉。本发明专利技术可从鹿胎中提取更多活性多肽物质，不仅使废弃多糖与脂类资源得到充分利用，又可降低其处理成本，同时避免造成环境污染。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品科学和生物工程领域，具体地涉及利用生物蛋白酶制备鹿胎盘活性多肽的方法，以获得具有生物学活性的新产品。
技术介绍
鹿胎系指母鹿腹中的带胎衣、胎水的胎儿，或体表无毛、空腹、体内各器官已经发育完整，但是由于机械等原因造成流产的胎儿或产后因缺乳、母鹿拒哺、恶癖等原因死亡的幼鹿。鹿胎的药理作用首载《本草纲目》，言其有益肾阳、补精血之功效。胎盘在免疫学上有增强抵抗力和免疫力的作用。现代生物学及医学研究证明，胎盘中均含有多种免疫球蛋白、活性肽、激素等生物活性物质及氨基酸、矿物质等成分，是一种较为理想的免疫调节剂和营 养美容保健品。虽然，我国在利用动物组织器官及代谢产物进行治病、防病方面有着悠久的历史。但是，国内外对于羊胎、牛胎、猪胎等的研究较为深入，而对于鹿胎的研究较少。我国对于鹿胎的应用非常原始，鹿胎产品加工粗糙，产品初级、种类单一，疗效不显著，造成鹿胎资源的极大浪费。虽然也有研究鹿胎深加工的方法已经公开，其采用的是丙酮提取法，而利用现代生物酶工程技术，以酶解法从鹿胎中提取活性多肽的方法还未有报道。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术通过生物酶工程技术，提供一种节约资源，可从鹿胎中提取出更多的鹿胎活性多肽的酶解方法。本专利技术改变以往的鹿胎蛋白的提取方式，通过生物酶工程技术，科学合理地制备鹿胎活性多肽，实现鹿产品的工业化生产和新产品开发。为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是酶解法制备鹿胎活性多肽，包括如下步骤 1)取新鲜鹿胎盘除去筋、膜，剪碎；研磨机中研磨、充分匀浆；-40 -20°c冷冻，室温下融化，反复冷冻和融化3 5次，离心，上清液为鹿胎盘提取液，沉淀物备用； 2)取鹿胎盘提取液，于30 35°C下预热10 15min，调节pH值为1.5-8.0，于35 50°C下，加入酶，酶解反应5 8h后，于65°C下加热灭菌30min，离心，取上清液，即为鹿胎活性多肽提取液； 3)所得鹿胎活性多肽提取液经冷冻干燥制得鹿胎盘活性多肽干粉； 4)称取沉淀物,加入2.5倍重量的乙醇，浸泡4次，每次24小时，离心过滤，合并过滤后的上清液，在通风橱中静置5-6小时，使乙醇充分挥发，得到鹿胎盘脂溶性提取液。上述的酶解法制备鹿胎活性多肽，所述的酶是胃蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶或胰凝乳蛋白酶。本专利技术的有益效果是本专利技术解决了以往鹿胎产品多肽提取量少、产品初级、种类单一等问题。本专利技术充分利用了鹿胎，达到了最大限度地获得鹿胎中的活性多肽，可一次生产出鹿胎活性多肽和鹿胎脂溶性提取液两种活性成分产品，产品种类多样化。本专利技术利用鹿胎下脚料制备鹿胎脂溶性提取液，不仅节省了工业成本，还大大提高了原料的利用率，使废弃资源得到充分利用，而且也降低了其处理成本，避免造成环境污染。本专利技术制得的鹿胎活性多肽液具有非常好的抗炎、抗衰老、增强机体免疫力，预防肿瘤、美容、养颜等多种功效，对大肠癌、肺癌、乳腺癌等具有非常好的抑制活性。鹿胎脂溶性提取液中含有丰富的糖类和脂类物质。这些糖类和脂类物质可作为添加剂与引诱剂应用在饲料加工领域。通过本专利技术实现了对鹿胎活性多肽的最大限度的利用，为进一步新产品开发奠定基础。具体实施例方式实施例I酶解法制备鹿胎活性多肽 1)取新鲜鹿胎盘除去筋、膜，剪碎；研磨机中研磨、充分匀浆；-40 -20°c冷冻，室温下融化，反复冷冻和融化3 5次，离心，上清液为鹿胎盘提取液，沉淀物备用； 2)取鹿胎盘提取液，于30°C下预热lOmin，调节pH值为1.5，于35°C下，加入胃蛋白酶，加入量为1600u/ml，酶解反应5h，反应过程中维持酶解液的pH为I. 5，温度为35°C，反应后于65°C下加热灭菌30min,8000 r/min离心15min,取上清液，即为鹿胎活性多肽提取液； 3)所得鹿胎活性多肽提取液经冷冻干燥制得鹿胎盘活性多肽干粉，其产率为每公斤鹿胎可以得到15 g鹿胎活性多肽纯品。实施例2酶解法制备鹿胎活性多肽 1)取新鲜鹿胎盘除去筋、膜，剪碎；研磨机中研磨、充分匀浆；_40 -20°C冷冻，室温下融化，反复冷冻和融化3 5次，离心，上清液为鹿胎盘提取液，沉淀物备用； 2)取鹿胎盘提取液，于35°C下预热lOmin，调节pH值为7.5，于50°C下，加入菠萝蛋白酶，加入量为1600u/ml，酶解反应8h，反应过程中维持酶解液的pH为7. 5，温度为50°C，反应后于65°C下加热灭菌30min,8000 r/min离心15min,取上清液，即为鹿胎活性多肽提取液； 3)所得鹿胎活性多肽提取液经冷冻干燥制得鹿胎活性多肽干粉，其产率为每公斤鹿胎可以得到17 g鹿胎活性多肽纯品； 4)称取沉淀物,加入2.5倍重量的乙醇，浸泡4次，每次24小时，离心过滤，合并过滤后的上清液，在通风橱中静置5-6小时，使乙醇充分挥发，得到鹿胎盘脂溶性提取液。实施例3酶解法制备鹿胎活性多肽 1)取新鲜鹿胎盘除去筋、膜，剪碎；研磨机中研磨、充分匀浆；-40 -20°c冷冻，室温下融化，反复冷冻和融化3 5次，离心，上清液为鹿胎盘提取液，沉淀物备用； 2)取鹿胎盘提取液，于35°C下预热lOmin，调节pH值为8.O，于45°C下，加入木瓜蛋白酶，加入量为1600u/ml，酶解反应8h，反应过程中维持酶解液的pH为8. O，温度为45°C，反·应后于65°C下加热灭菌30min,8000 r/min离心15min,取上清液，即为鹿胎活性多肽提取液； 3)所得鹿胎活性多肽提取液经冷冻干燥制得鹿胎盘活性多肽干粉，其产率为每公斤鹿胎可以得到17 g鹿胎活性多肽纯品； 4)称取沉淀物,加入2.5倍重量的乙醇，浸泡4次每次24小时，离心过滤，合并过滤后的上清液，在通风橱中静置5-6小时，使乙醇充分挥发，得到鹿胎盘脂溶性提取液。 实施例4酶解法制备鹿胎活性多肽(一)鹿胎活性多肽的制备 1)取新鲜鹿胎盘除去筋、膜，剪碎；研磨机中研磨、充分匀浆；-40 -20°c冷冻，室温下融化，反复冷冻和融化3 5次，离心，上清液为鹿胎盘提取液，沉淀物备用； 2)取鹿胎盘提取液，于30°C下预热lOmin，调节pH值为7.O，于40°C下，加入胰凝乳蛋白酶，加入量为1600u/ml，酶解反应6h，反应过程中维持酶解液的pH为7. O，温度为40°C，反应后于65°C下加热灭菌30min,8000 r/min离心15min,取上清液，即为鹿胎活性多肽提取液； 3)所得鹿胎活性多肽提取液经冷冻干燥制得鹿胎盘活性多肽干粉，其产率为每公斤鹿胎可以得到18 g鹿胎活性多肽纯品； 检测结果 用MTT法测定鹿胎盘活性多肽提取液的抑瘤活性和淋巴细胞增殖活性。通过体外淋巴细胞增殖实验发现，鹿胎盘活性多肽提取液具有显著促淋巴细胞增殖的功能，并表现出一定的剂量效应，平均淋转率为20 %，E-玫瑰花结试验结果显示，花结恢复率达到95 %。随着浓度升高其免疫生物学活性逐渐增强，至40ng/ ml浓度附近时免疫生物活性达到最高峰，之后逐渐减弱。抑瘤实验的结果表明，鹿胎活性多肽提取液具有抑制肿瘤细胞生长的作用，有剂量依赖性，随着浓度升高其免疫生物学活性逐渐增强，在40ng/ ml达到最佳效果，抑瘤率为72. 43%，之后逐渐减弱。采用平板法，检测了鹿胎本文档来自技高网...
【技术保护点】
酶解法制备鹿胎活性多肽，其特征在于包括如下步骤：1）取新鲜鹿胎盘除去筋、膜，剪碎；研磨机中研磨、充分匀浆；？40～？20℃冷冻，室温下融化，反复冷冻和融化3～5次，离心，上清液为鹿胎盘提取液，沉淀物备用；2）取鹿胎盘提取液，于30～35℃下预热10～15min，调节pH值为1.5？8.0，于35～50℃下，加入酶，酶解反应5～8h后，于65℃下加热灭菌30min，离心，取上清液，即为鹿胎活性多肽提取液；？3）所得鹿胎活性多肽提取液经冷冻干燥制得鹿胎活性多肽干粉。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡风庆，倪裴，回晶，
申请(专利权)人：辽宁大学，
类型：发明
国别省市：
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