本发明专利技术公开了具有阻断H5N1禽流感病毒进入的L-亮氨酸衍生物，为3,4-二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯和3,4-二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯。3,4-二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯由3,4-二羟基苯甲酸与L-亮氨酸甲酯经缩合制得；3,4-二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯是以3,4-二羟基苯乙酸为起始原料，先后采用硫酸二甲酯、二氯亚砜处理后与L-亮氨酸甲酯缩合，再经去甲基化反应制得。本发明专利技术化合物3,4-二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯和3,4-二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯对Influenza?strain?A/VietNam/1194/2004禽流感病毒有较强的抑制活性，而且其机制是作用于H5N1病毒感染细胞的进入阶段，是一种新的抗禽流感病毒进入抑制剂，可作为药物预防或治疗H5N1禽流感。
【技术实现步骤摘要】
阻断H5N1禽流感病毒进入的L-亮氨酸衍生物及其制备方法
本专利技术属于药物化学领域，涉及可阻断H5N1禽流感病毒进入的L-亮氨酸衍生物及其制备方法。
技术介绍
自人类第一例禽流感感染H5N1死亡病例于1997年中国香港报道以来，至2006年 3月该病毒已在中国、越南、泰国等7个国家流行，176例感染H5N1型禽流感病毒患者中至少 97人死亡，死亡率为55%，具有高致病性和高死亡率的特点。目前在我国流行的A型高致病禽流感病毒为H5N1亚型。如今，全世界正面临着禽流感大流行的危险。要警惕禽流感病毒可能发生抗原性变异，或它与当前人群中流行的A型流感病毒发生基因重配，形成重配株， 而造成人间流感暴发，甚至大流行，引起严重的公共卫生问题。疫苗接种一直占据着流感预防的首要地位，但由于流感病毒的抗原变异能力强， 个体免疫力的差异，疫·苗的保护率并不高，而且疫苗只对已知的流感病毒亚型有预防作用， 由于抗原性漂移或抗原性转换产生后对新型流感病毒无效，生产的疫苗难以与将要流行的病毒株抗原型一致。禽流感大面积发生，而抗流感病毒药物发展缓慢，有效药物品种较少。 过去曾对A型高致病禽流感病有效的金刚烷胺已产生耐药性，而进口的达菲是目前国内外唯一有效的药物，国内外也有耐药性报道，因此寻找结构新颖，新靶点和高效低毒的抗禽流感病毒药物是摆在药物工作者面前的重大课题。在抗病毒筛选实验中，我们发现3，4-二羟基苯甲酸和3，4-二羟基苯乙酸无明显抗H5N1活性，但分别用L-亮氨酸甲酯修饰后，具有一定的抗H5N1作用，而且 Time-of-addition assay实验结果表明新化合物作用于H5N1病毒对细胞感染的进入阶段； 血凝素抑制实验则进一步表明新化合物并非作用于血凝蛋白HAl亚基上，而有可能作用于 HA2亚基，这些结果表明新化合物可能是一种新的抗H5N1进入抑制剂，可作为先导化合物开展进一步研究，目前还无相关研究报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的及技术问题是提供一种具有抗H5N1病毒活性且毒性小的L-亮氨酸衍生物及其制备方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案。首先，本专利技术提供了一种具有抗H5N1病毒活性的L-亮氨酸衍生物，为3，4- 二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯或3，4- 二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯，结构式分别为权利要求1.一种具有抗H5N1病毒活性的L-亮氨酸衍生物，为3，4- 二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯或3，4- 二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯，结构式分别为2.权利要求I所述的3，4-二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯的制备方法，其特征在于 (1)将乙基替-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺的无水二氯甲烷溶液和I-羟基苯并三氮唑的无水二氯甲烷溶液分别加入到3，4-二羟基苯甲酸的无水二氯甲烷溶液中，滴加三乙胺溶液，控制反应温度在0°C，搅拌反应半小时； (2)另取L-亮氨酸甲酯盐酸盐溶于无水二氯甲烷中，滴加三乙胺溶液并抽滤，再将滤液L-亮氨酸甲酯的二氯甲烷溶液加入到步骤(I)反应液中，缓慢升温至30°C反应6小时； (3)反应完成后，蒸去二氯甲烷，残余物用乙酸乙酯溶解，再先后用lwt%盐酸溶液、4wt%碳酸氢钠水溶液和蒸馏水洗涤乙酸乙酯层至中性，干燥，并经柱层析得3，4- 二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯。3.根据权利要求2所述的3，4-二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯制备方法，其特征在于，3，4-二羟基苯甲酸与乙基替-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺摩尔比为I :1 10 ;3，4_ 二羟基苯甲酸与I-羟基苯并三氮唑摩尔比为I :1 10 ;3，4-二羟基苯甲酸与三乙胺摩尔比为I :1 10 ;3，4-二羟基苯甲酸与L-亮氨酸甲酯盐酸盐摩尔比为I :1飞。4.权利要求I所述的3，4-二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯的制备方法，其特征在于 步骤一，合成3，4- 二甲氧基苯乙酸甲酯 向3，4- 二羟基苯乙酸的无水丙酮溶液中加入适量碳酸钾固体，再缓慢滴加硫酸二甲酯无水丙酮溶液，加热回流6小时，反应结束后，抽滤除去碳酸钾颗粒，蒸去丙酮后，残余物用乙酸乙酯溶解，洗涤，干燥，柱层析得3，4-二甲氧基苯乙酸甲酯； 步骤二，合成3，4- 二甲氧基苯乙酰亮氨酸甲酯 称取3，4- 二甲氧基苯乙酸甲酯于三口瓶中，加入二氯甲烷及30wt%的氢氧化钠水溶液，室温剧烈搅拌40分钟，停止反应，分离得到水层，调节水层pH值为2-3，萃取，干燥，蒸去乙酸乙酯得到白色粉末状固体；将其加入到二氯亚砜中，并滴加I滴DMF，加热回流3小时制得3，4-二甲氧基苯乙酰氯，用无水二氯甲烷溶解待用； 向L-亮氨酸甲酯盐酸盐无水二氯甲烷溶液中，滴加三乙胺溶液，搅拌反应后抽滤除去不溶盐，得L-亮氨酸甲酯的二氯甲烷滤液，再加入三乙胺溶液，在-20°C条件下，滴加新制的3，4-二甲氧基苯乙酰氯的二氯甲烷溶液，搅拌反应8小时；反应结束后，抽滤除去盐酸盐固体，滤液洗涤，干燥，蒸发二氯甲烷得残余物，用乙醚与二氯甲烷重结晶，制得3，4- 二甲氧基苯乙酰亮氨酸甲酯； 步骤三，合成3，4- 二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯 在-30°C氮气保护条件下，向3，4_ 二甲氧基苯乙酰亮氨酸甲酯的无水二氯甲烷溶液中，缓慢滴加三溴化硼的二氯甲烷溶液，搅拌反应4小时；反应结束后，将溶液倒入冰水混合物中，剧烈搅拌，静置，用乙酸乙酯萃取，洗涤，干燥，柱层析得3，4- 二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯。5.根据权利要求5所述的3，4-二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯制备方法，其特征在于 步骤一中，所述的3，4-二羟基苯甲酸与所述硫酸二甲酯的摩尔比为I :1 10 ; 步骤二中，每克3，4-二甲氧基苯乙酸甲酯采用IOml 30%氢氧化钠水溶液；每克3，4-二甲氧基苯乙酸甲酯采用2毫升二氯亚砜；3，4-二甲氧基苯乙酸甲酯与L-亮氨酸甲酯盐酸盐的摩尔比为I :1飞； 步骤三中，3，4_ 二甲氧基苯乙酰亮氨酸甲酯与三溴化硼的摩尔比为I :1 10。6.权利要求I所述的L-亮氨酸衍生物在制备预防或治疗H5N1禽流感药物中的应用。7.权利要求I所述的L-亮氨酸衍生物作为H5N1病毒进入抑制剂上的用途。全文摘要本专利技术公开了具有阻断H5N1禽流感病毒进入的L-亮氨酸衍生物，为3,4-二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯和3,4-二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯。3,4-二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯由3,4-二羟基苯甲酸与L-亮氨酸甲酯经缩合制得；3,4-二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯是以3,4-二羟基苯乙酸为起始原料，先后采用硫酸二甲酯、二氯亚砜处理后与L-亮氨酸甲酯缩合，再经去甲基化反应制得。本专利技术化合物3,4-二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯和3,4-二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯对Influenza strain A/VietNam/1194/2004禽流感病毒有较强的抑制活性，而且其机制是作用于H5N1病毒感染细胞的进入阶段，是一种新的抗禽流感病毒进入抑制剂，可作为药物预防或治疗H5N1禽流感。文档编号A61P31/16GK102924318SQ20121048827公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月26日 优先权日2012年11月26日专利技术者杨健, 吴叔文, 田波, 张芳, 陈刚, 潘薇, 杨靖翔 申请人:武汉大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有抗H5N1病毒活性的L？亮氨酸衍生物，为3,4？二羟基苯甲酰亮氨酸甲酯或3,4？二羟基苯乙酰亮氨酸甲酯，结构式分别为：FDA00002468868400011.jpg
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨健，吴叔文，田波，张芳，陈刚，潘薇，杨靖翔，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：
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