本发明专利技术涉及一种用于自HLA库鉴别出会与化合物特异性结合的HLA复合物的方法。此方法可用于评估化合物是否可能诱发不良药物反应，且若诱发不良药物反应，在哪一人类群体中诱发。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用人类白血球抗原(HLA)筛检预测药物不良反应的方法相关申请的交叉引用本申请主张于2010年4月12日递交的美国临时申请No. 61/323，067的优先权。在此通过整体引用该在先申请将其内容结合到本申请中。
技术介绍
不良药物反应(ADR)仍为临床上及制药工业的主要问题。在许多ADR类型中，以史蒂生-琼森症候群(Stevens-Johnson syndrome, SJS)、中毒性表皮坏死溶解(TEN)及过敏症候群(HSS)最严重且危及生命，其中，SJS及TEN有10-50%的死亡率。参看Roujeau等人，New Engl. J. Med. 333:1600-1607(1995)。尽管 SJS/TEN/HSS 的发病率低，但这些病状可能会造成个死亡或导致严重残疾。对于制药工业而言，发生严重药物过敏是非常不利的；目前有部分的新药因为会造成严重药物不良反应，而招致药品退市的命运。参看画· fda.gov/safety/recalls/default, htm。已发现某些I型人类白血球抗原(HLA)对偶基因(例如HLA-A及HLA-B对偶基因)及某些II型HLA对偶基因(例如HLA-DR对偶基因)与ADR有关。参看Hung等人，Proc.Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102:4134-4139(2005) ;Daly 等人，Nat. Genet. 41:816-819 (2009)；Hautekeete, Gastroenterology 117 (5) : 1181-6 (1999) ^Dettling M, PharmacogenomicsJ. 7 (5) : 325-32 (2007)。所有这些ADR-HLA对偶基因的关联性，是在测定罹患核准上市药物诱发ADR的患者后被发现。目前，尚没有可用于预测开发中的候选药物是否会在人类中产生这些危及生命的病状(诸如SJS/TEN/HSS)的方法。因为新药物开发可能平均耗费10亿元及10年时间，所以开发适用于在药物开发早期阶段预测候选药物的安全性概况的筛选方法将具有重大价值。
技术实现思路
本专利技术涉及自HLA库中鉴别出会与化合物结合的HLA复合物(若存在)的方法。此方法可依用于预测化合物是否将诱发不良药物反应，且若诱发不良药物反应，在哪一人类群体中诱发。本专利技术方法包括至少4个步骤⑴提供HLA库(例如I型或II型HLA库)，其包括位于支撑构件上的多个地址处的多种HLA复合物(例如可溶性HLA复合物)，各HLA复合物指定于一独特地址，( )使化合物与HLA复合物接触，(iii)判定该化合物是否会与库中的HLA复合物结合，且，若结合，(iv)则基于HLA复合物的地址鉴别与化合物结合的HLA复合物。本文所用的术语“独特地址〃是指支撑构件上一种且仅一种类型的HLA复合物所位于的点。在一个实例中，HLA库为以微芯片为基础的库，其包括连接于支撑构件的多种HLA复合物。在此情形中，判定步骤可通过表面等离子共振(SPR)来执行。在另一实例中，HLA库为以细胞为基础的库，其包括各自表达特定HLA复合物的多个细胞株。各细胞株可通过表达HLA复合物的亲本细胞来制备，该亲本细胞优选地缺乏至少一种类型的HLA (例如I型HLA)。在此情形下，判定步骤可通过收集自各地址的HLA复合物，且通过质谱法判定HLA复4合物是否与化合物结合来执行。或者，化合物可经同位素标记且通过检验各地址处的放射性来执行判定步骤。以下说明书中阐述本专利技术一个或多个实施例的细节。本专利技术的其它特征或优点将自以下附图及实施方式、以及随附权利要求书中显而易知。附图说明图I为说明获得能够与HLA-Β-β 2微球蛋白复合物结合的肽的方法的流程图，其中该复合物是由稳定表达可溶性HLA-B分子的ClR细胞中产生。图2为说明表面等离子共振检定的流程图。图3为显示在37°C过夜下未脉冲自体性B-LCL细胞(敞开条)或以25 μ g/ml CBZ,0XC、GAB或媒剂对照脉冲的自体性B-LCL细胞(封闭框)的特异性溶解图表。分析三名患者的资料以获得平均值土SD。* p<0. 05 (未脉冲B-LCL细胞相对于经脉冲B-LCL细胞)。** p<0. 001 (药物处理组相对于媒剂处理组)。图4显示在固定(封闭条)及未固定(敞开条)B-LCL存在下自体性T细胞增殖的图表。通过习知胸苷掺入检定测定T细胞增殖。* :p〈0.05(药物处理组相对于媒剂处理组)。图5为显示各种浓度下的CBZ及其类似物(62. 5至1000 μ Μ)与涂布于CM5芯片上的可溶性HLA-B*1502结合的图表。通过标准DMSO溶剂校正曲线使用TlOO评估软件自4至7个独立实验计算相对反应(R. U.)。图6为显示CBZ及其类似物与各种HLA-B分子结合的图表。图表中显示的数据表示4至11个独立实验的平均值土平均值的标准误差(SEM)。具体实施例方式本文描述使用HLA库筛选会与化合物(例如小分子药物或药物候选物)特异性相互作用的HLA复合物(若存在)的方法。此方法可用于评估化合物诱发不良药物反应的机率，并可用于鉴别会对测试化合物产生药物过敏的高风险人类群体(亦即，带有此方法中鉴别出的HLA复合物的人类群体)。因此，此在新药物开发中尤其重要，因为其帮助预测药物候选物是否可能引起不良药物反应，且若引起不良药物反应，会在哪一患者群体中引起。本专利技术方法中使用的HLA库可为I型库，其包括一个或多个HLA复合物子群(例如HLA B库)。HLA-B对偶基因为最具多形性的基因之一，其具有超过800个变异体。参看Marsh, Marsh, Hum. Immunol. 71(4) :432_6;2010。必要时，HLA-B 库可包括所有已知的 800种以上不同HLA-B复合物。HLA库亦可为II型库，其包括一个或多个II型HLA复合物子群(例如HLA-DR库)。或者，HLA库可含有I型及II型HLA复合物两者。必要时，任何上述库均可扩展以包括新HLA复合物。I型及II型HLA对偶基因是本领域公知的。举例而言，这些对偶基因可自GenBank 或由 HUGO 基因命名委员会(HUGO Gene Nomenclature Committee)、EMBL 茵格斯顿分部(EMBL Outstation-Hinxton)、欧洲生物信息研究所(European BioinformaticsInstitute)、英国茵格斯顿剑桥 Wellcome Trust 基因体科学园 CBlO ISD (Wellcome TrustGenome Campus Hinxton Cambridge CBlO 1SD, UK)(参看http://www. genenames. org/)提供的数据库撷取。本专利技术方法可使用以细胞为基础或以微芯片为基础的HLA库执行。以细胞为基础的HLA库以细胞为基础的HLA库含有多个细胞株，其各自产生独特的HLA复合物。各细胞株可经由已知的重组技术，将亲本细胞(优选为哺乳动物细胞)进行遗传修饰以表达(a)I型HLAa链及视情况选用的β 2-微球蛋白(若亲本细胞不表达内源性β 2-微球蛋白)，或(b)II型HLAa链及II型HLAii链来制备。用于构建库的亲本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈垣崇，洪舜郁，魏淳郁，
申请(专利权)人：中央研究院，
类型：
国别省市：
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