抗LRP6抗体制造技术

本发明专利技术提供了抗LRP6抗体及其使用方法。本发明专利技术的一个特别方面提供了抑制多种Wnt同等型的信号传导的双特异性抗LRP6抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗LRP6抗体对相关申请的交叉引用本申请要求2010年3月24日提交的美国临时申请No. 61/317，137和2010年10月20日提交的美国临时申请No. 61/394，836的权益，通过提及而将其完整公开内容收入本文。专利
本专利技术涉及抗LRP6抗体及使用抗LRP6抗体治疗癌症或骨骼病症的方法。专利技术背景 与大多数其它形态发生素和生长因子信号传导途径相似，哺乳动物Wnt信号传导在发育和组织稳态期间被调动多次，这经由使用19种不同配体、10种受体和多种共同受体，包括 LRP5/6、Ror 1/2 和 Ryk 来进行(van Amerongen 和 Nusse, 2009)。另外，结合 Wnt(诸如SFRP1/2/3/4/5和WIF1)或LRP5/6 (包括DKK1/2/4和S0ST)的不同分泌性拮抗剂调控配体和受体之间的相互作用。这些膜和细胞外蛋白质及其多种同等型在表达水平和组合蛋白质相互作用方面提供差异调节。大多数fct同等型表现出能够结合共同受体LRP5/6，而LRP5/6的参与细化了规范的或β -联蛋白依赖性的Wnt信号传导。Wnt将LRP5/6和FZD异二聚化以介导LRP5/6胞内域磷酸化和轴蛋白结合(Tamai等,2000 ；Semenov等,2001 ；Tamai等，2004)。DVL通过直接结合轴蛋白和FZD 二者被带入复合物中，而DVL寡聚化很可能扩大膜的胞质面上的这些蛋白质复合物，隔绝GSK3并抑制其磷酸化和β -联蛋白脱稳定化(Mi 等，2006 ；Bilic 等，2007 ；Schwarz-Romond 等，2007 ；Cselenyi 等，2008 ；Piao 等，2008 ;WilliamsonZeng 等，2008 ;Wu 等，2009)。极大数目的展示可观的一级序列分歧，介导哺乳动物规范Wnt信号传导的配体同等型与高度同源的共同受体对形成对比。LRP6和LRP5胞外域主要由四个同源区组成，从N端到C端称作El到E4，每个含有一个YWTD型β -螺旋桨和EGF样域(Jeon等，2001 )。LRP6和LRP5中相似位置处的每个重复是高度保守的，而同一蛋白内的不同重复是相当更加趋异的。有趣地，Bourhis等(2010)证明了 Wnt9b在体外专门在Ε1-Ε2区内结合,而Wnt3a只结合含有E3-E4的片段，提示每个重复或两个相邻重复的组合结合Wnt同等型的不同子集。这种安排可适应fct蛋白的多样性，而且可能还容许LRP5/6拮抗性配体对它们的差异调节。在其胞外区分别含有重复的EGF样和Ig域的Notch和VEGF受体中，多种配体同等型的结合定位于一个或两个重复的同一区，尽管其它重复的存在能增强结合(Rebay等，1991 ;Davis_Smyth 等，1996 ;Cunningham 等，1997)。对于受体酪氨酸激酶，配体诱导的二聚化启动对激酶活性和信号传导的刺激。虽然配体诱导的受体-共同受体异二聚化是规范fct信号传导所必需的，但是LRP5/6或FZD同二聚化的作用尚未清楚限定。不同重组LRP6蛋白的被迫二聚化能激活或抑制Wnt信号传导。β-联蛋白依赖性Wnt信号传导由Wnt同等型结合受体FZD和共同受体LRP5/6 二者启动，它们然后在胞质膜面装配多聚体复合物以募集和灭活激酶GSK3。Wnt同等型和受体之间的不同相互作用是否及如何机械地调控这个过程仍然有待确定。专利技术概述本专利技术的一个方面提供一种结合LRP6的分离的抗体，其中该抗体抑制由第一 Wnt同等型诱导的信号传导且强化由第二 fct同等型诱导的信号传导。在一个实施方案中，所述第一 fct同等型选自下组Wnt3和Wnt3a。在一个实施方案中，所述第二 Wnt同等型选自下组Wnt l、2、2b、4、6、7a、7b、8a、9a、9b、10a 和 10b。在另一个实施方案中，所述第一 Wnt同等型选自下组Wnts l、2、2b、6、8a、9a、9b和IOb且所述第二 Wnt同等型选自下组Wnt3和 Wnt3a。本专利技术的一个方面提供一种结合LRP6的E3-E4区的抗体。本专利技术的另一个方面提供一种结合LRP6的E1-E2区的抗体。还有另一个方面提供一种结合LRP6的两个不同区，诸如LRP6的E1-E2区和E3-E4区的抗体。一方面，这些抗体抑制由Wntl和Wnt3a的组合诱导的fct信号传导。一方面，这些抗体抑制自分泌Wnt信号传导。本专利技术的一个方面提供一种治疗具有癌症的个体的方法，包括对个体施用有效量的一种结合LRP6且抑制由选自Wnt3和Wnt3a的Wnt同等型诱导的信号传导的分离的抗体 和一种结合LRP6且抑制由选自Wnt l、2、2b、6、8a、9a、9b和IOb的Wnt同等型诱导的信号传导的分离的抗体。本专利技术的另一个方面提供一种治疗具有癌症的个体的方法，包括对个体施用有效量的一种结合LRP6且抑制由Wnt3和Wnt3a诱导的信号传导的分离的抗体和一种结合LRP6且抑制由Wnt l、2、2b、6、8a、9a、9b和IOb诱导的信号传导的分尚的抗体。本专利技术的另一个方面提供一种治疗具有癌症的个体的方法，包括对个体施用有效量的一种结合LRP6且抑制由Wnt3和Wnt3a诱导的信号传导的分离的抗体和一种结合LRP6且抑制由Wnt l、2、2b、4、6、7a、7b、8a、9a、9b、IOa和IOb诱导的信号传导的分离的抗体。本专利技术的一个方面提供一种治疗具有骨骼病症，诸如骨质疏松、骨关节炎、骨折和骨损伤的个体的方法，包括对个体施用有效量的本文所述抗LRP6抗体。本专利技术的另一个方面提供一种在个体中强化由一种Wnt同等型诱导的Wnt信号传导，包括对个体施用有效量的本文所述抗LRP6抗体和该Wnt同等型以强化由该Wnt同等型诱导的fct信号传导。还提供特异性抗LRP6抗体，包括双特异性抗LRP6抗体。在一个实施方案中，结合LRP6的分离的抗体包含VH，该VH包含选自下组的氨基酸序列SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 11、SEQ ID N0:13和SEQ ID NO: 15。在一个实施方案中，该抗体进一步包含VL，该VL包含选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12。在一个实施方案中，结合LRP6的分离的抗体包含VH，该VH包含与氨基酸序列SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: IUSEQ ID NO: 13和SEQID NO: 15具有至少90%同源性的氨基酸序列。在一个实施方案中，结合LRP6的分离的抗体进一步包含VL，该VL包含与选自下组的氨基酸序列具有至少90%同源性的氨基酸序列SEQ ID NO:10 和 SEQ ID NO:12。在一个实施方案中，抗体是一种结合LRP6的两个不同区的分离的双特异性抗体，其中该抗体包含VH，该VH包含选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: IU SEQID N0:13和SEQ ID NO: 15。在一个实施方案中，双特异性抗体包含第一 VH和第二 VH，该第一 VH包含氨基酸序列SEQ ID NO: 15，该第二 VH包含选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO: 9，SEQ ID N0:11和SEQ I本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：E博里斯，R卡拉诺，A科克伦，M科斯塔，V德阿尔梅达，J厄恩斯特，巩岩，R汉努什，P波拉基斯，B鲁宾菲尔德，M索罗韦，吴雁，TC曹，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：
国别省市：