禽流感免疫鸡蛋生产的方法技术

一种禽流感免疫鸡蛋生产的方法，特别是将取得的禽流感病毒解冻加入抗生素直接打入受精蛋(11日龄鸡胚胎或13日龄鸭胚胎)中，再抽取尿囊液作病毒培殖、疫苗的制备及对鸡只施打并于第二周及第三周后追加一剂，与届满12周补强一剂。蛋鸡施打疫苗(H5及H7亚型病毒)使鸡只体内产生抗体，经蛋母鸡卵巢上及细胞的特异性受体(Receptor)接受后将血清中的抗体移行至蛋黄中(IgY)，于第四周其产蛋的蛋黄即含有高力价的H5及H7亚型禽流感病毒的免疫抗体(Immunoglobulin?of?yolk：IgY)。本发明专利技术食用禽流感的免疫鸡蛋，可减低H5及H7亚型的禽流感病毒的入侵，避免禽流感大流行。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种，其是将禽流感H5及H7亚型病毒纯化减毒作为抗原打入鸡只(蛋鸡)体内，并于第二及第三周后追补疫苗及届满第十二周龄补强一剂，使其产生抗体，经血清移转至蛋黄中。
技术介绍
( 一 ) 2009年5月4日，日本神户大学传染病研究所指出该所自2005年开始与印度尼西亚阿伊尔朗卡大学热带研究所合作进行402头猪试验，结果发现有52头猪感染H5N1禽流感病毒，显示「禽流感可能已在猪只身上产生变种」，而「变种的禽流感」将造成下一波人类的大流行，其致死率与目前的新型H1N1将有过而无不及，人类实不可忽视。又世界卫生 组织(WHO)公布数据，全球自2003年至2010年，人类感染H5N1确定病例为516例，其中306例死亡(死亡率为59. 3% )，而2010年则有48例确定病例，报告国家及地区包括印度尼西亚、越南、埃及、中国、香港及柬埔寨等，其中24例死亡，致死率50%，确定病例中有相当高的比例曾有禽鸟接触史。又疾病管制中心OIE证实2010年共有22个国家，共发生135例家禽感染H5N1高病原性禽流感疫情。(二)又自2003年 2011年全球亦发生多起高病原性及低病原性的H7亚型的禽流感，损害惨重，尤以2003年美国纽约发现一男子感染H7N2，美国疾病管制中心(CDC)以雪貂进行试验，亦证实H7N2病株能在雪貂(哺乳动物)之间传染，已引起世界卫生组织(WHO)的高度重视。又美国疾病管制中心(CDC)微生物学家汤培博士研究中心，发现禽流感H7N2病毒产生变异(在哺乳动物呼吸道进行复制变异)，不仅较能存活于哺乳动物体内，而且还能在动物间传染，警告该变异病毒恐有引发人传人的流行。(三)今专利技术人在中国台湾省取得的专利技术专利「禽流感免疫鸡蛋之生产方法」(专利技术第1309563号)，仅局限于H5亚型的禽流感未包含H7亚型的禽流感在内，且其抗体力价亦呈不稳定，实为美中不足，基上所述，将禽流感免疫鸡蛋的免疫球蛋白(IgY)抗体含括H5及H7亚型及抗体力价稳定性的方法，仍为专利技术人急需突破研究的课题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的主要技术问题在于，克服现有技术存在的上述缺陷，而提供一种，本专利技术食用禽流感的免疫鸡蛋，可减低H5及H7亚型的禽流感病毒的入侵，避免禽流感大流行。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是一种，是以可能产生变异，可感染人类的禽流感H5及H7亚型病毒株，经去杂菌后，直接打入受精胚胎蛋中增殖，再抽取尿囊液制备成不活化疫苗(抗原)后，施打于产蛋中的母鸡，蛋鸡施打疫苗后，其体内产生的抗体，经蛋母鸡卵巢上皮细胞的特异性受体(Receptor)接受后将血液中的抗体移行至蛋黄中(IgY)，即得含禽流感H5及H7亚型病毒免疫抗体的免疫鸡蛋。所述，其中，该疫苗(抗原)制备的方法是将H5及H7亚型病毒接种于11日龄鸡胚胎蛋(或13日龄鸭胚胎蛋)。所述，其中，该疫苗施行的方法是施打疫苗第一剂后，于第二周及第三周后各追加一剂，并于届满十二周龄再补强一剂。所述，其中，该血清及蛋黄中H5及H7亚型亚型禽流感病毒抗体力价的测定方法为血球凝集试验(HA)。本专利技术是利用生物科技免疫原理，即是利用生物科技的方法，将禽流感病毒(H5及H7亚型)，经纯化减毒后，当做抗原施行，蛋鸡体内，并于第二周及第三周后各追打二剂，再于届满十二周利用长效性基剂的慢慢释放，蛋鸡体内会产生对禽流感病毒(H5及H7亚型)的抗体，由血清中移转到蛋黄中(称IgY)后，即可获得被动免疫(passive immunization),而立即获得抗体，食用禽流感的免疫鸡蛋，可减低H5及H7亚型的禽流感病毒的入侵，避免禽流感大流行。 本专利技术的有益效果是，本专利技术食用禽流感的免疫鸡蛋，可减低H5及H7亚型的禽流感病毒的入侵，避免禽流感大流行。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术进一步说明。图I为本专利技术的方法流程方块图。图2为本专利技术白壳蛋鸡血清及其蛋黄各周龄H5亚型病毒抗体力价测定变化图。图3为本专利技术白壳蛋鸡血清及其蛋黄各周龄H7亚型病毒抗体力价测定变化图。图中标号说明IH5 及 H7 病毒2抗原(疫苗)制备接种于11日龄鸡胚胎或13日龄鸭胚胎3打入鸡只体内4第二周及第三周后各追加一剂及届满12周补强一剂5施打疫苗后第四周其产蛋蛋黄中即含有H5及H7亚型病毒免疫抗体(IgY)具体实施例方式本专利技术的，敬请参阅图I所示，为本专利技术的方法的流程方块图，其主要是以禽流感的病毒I后(H5及H7亚型)制成的抗原(疫苗)制备接种于11日龄鸡胚胎或13日龄鸭胚胎2打入鸡只体内3 (蛋鸡)，于第二周及第三周后各追加一齐U，并于届满十二周补强一剂4，免疫后第三周鸡只体内血清，即呈现有禽流感病毒免疫抗体，而第四周其产蛋蛋黄中，即含有H5及H7亚型病毒免疫抗体(IgY) 5。至于免疫鸡蛋生产的方法，其先准备(一 )材料选取30 60周龄产蛋中的白来亨蛋鸡(白壳蛋优于红壳蛋)。(二)病毒培植、疫苗制作与抗原施打I.病毒H5及H7亚型培殖(I)将取得的病毒解冻后，加入抗生素。(5)直接打入受精蛋中，步骤同2.疫苗(抗原)的制备。(3)抽出的尿囊液测定病毒力价稳定后便为为第一代病毒液。(4)再以第一代病毒液进行增殖。2.疫苗(病毒)制备首先 (I)加入抗生素 penicillin streptomycin 200-300 μ L。(2)经测试得知禽流感病毒病毒(H5及H7亚型)接种于11日龄鸡胚胎较9 10日龄鸡胚胎(或接种于13日鸭胚胎较14鸭胚胎)可得较高的成功率，此为本案的新发现。病毒接蛋(受精11日鸡胚胎或受精13日鸭胚胎)步骤说明如下A.接蛋前先照蛋，将气室划出。B.受精蛋放置操作台前需先经酒精消毒(器具包括锥子、注射针都需经酒精灯消毒)。C.锥子经酒精灯过火，在划线上方刺一小孔。D.注射针抽取病毒液，每颗蛋注入O. 2mL病毒液。此时需注意针头后方不可以碰触到鸡蛋，以免污染。E.注入病毒液后，使用矿物油封住孔洞。F.接蛋后隔日照蛋，将胚胎死亡鸡蛋丢掉。G.第2天照蛋，将胚胎死亡鸡蛋置入4°C冰箱冷藏。H.第3天，不管胚胎有无死亡，均置入4°C冰箱冷藏。经放置半天或隔日准备抽取尿囊液。3.抗原(疫苗)施打第一次每只施打疫苗ImL于胸部肌肉，二周及三周后各追加一剂，第三周关始，每周采血及捡蛋一次，测定血清中抗体及蛋黄中抗体(IgY)的力价。(三)抗体力价判定方法I.血清力价测定(I)血球液制作A.约取总采血液量1/2-1/4的抗凝固剂(Alsver)于针筒中。B.采鸡血后经细纱网过滤，以去除血液中大的凝块，再加适量的灭菌生理盐水，充份混合。C. IOOOrpm离心10分钟，倒掉上清液,再加入适量灭菌生理盐水，轻轻悬浮红血球。D.重复前述步骤，IOOOrpm离心10分钟，倒掉上清液，再加入适量灭菌生理盐水，轻轻悬浮红血球。E.经1500rpm离心15分钟，倒掉上清液，将血球调成I %鸡红血球悬浮液。F.将制备好的I %鸡红血球悬浮液放置于4°C冰箱中。sSol.配制1.Dextrose2. 5 rag 2.Nacl4.2 mg 3.Citric acid (GftO7)0. 55 mg 4.Sodium citrate (Na:!CA0. 2H:.:0)8. 0 rag5.Distilled本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种禽流感免疫鸡蛋生产的方法，其特征在于，是以可能产生变异，可感染人类的禽流感H5及H7亚型病毒株，经去杂菌后，直接打入受精胚胎蛋中增殖，再抽取尿囊液制备成不活化疫苗(抗原)后，施打于产蛋中的母鸡，蛋鸡施打疫苗后，其体内产生的抗体，经蛋母鸡卵巢上皮细胞的特异性受体(Receptor)接受后将血液中的抗体移行至蛋黄中(IgY)，即得含禽流感H5及H7亚型病毒免疫抗体的免疫鸡蛋。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑长义，
申请(专利权)人：郑长义，
类型：发明
国别省市：