家蝇对DDVP抗药性快速检测的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种家蝇对DDVP抗药性快速检测的试剂盒，包括盒体和取液器，其中盒体中设置有含0.1%曲通-100的25mmol/L磷酸缓冲液的PB缓冲液试剂瓶、含乙酰胆碱ATCh的底物试剂瓶、含二硫双对硝基苯甲酸的PB溶液显色剂试剂瓶、含0.04mg/mL的DDVP丙酮溶液的抑制剂试剂瓶、含0.05mg/mL乙酰胆碱脂酶AChE的阳性对照试剂瓶、含丙酮溶液的阴性对照试剂瓶。本实用新型专利技术结构简单，能够在检测现场，快速、准确的检测家蝇对DDVP抗药性，其具有使用方便、操作简单等优点。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种快速检测家蝇对有机磷杀虫剂DDVP抗药性的试剂盒。
技术介绍
目前，敌敌畏DDVP、杀螟硫磷、辛硫磷等有机磷杀虫剂及各种复配剂被广泛应用于防治林业和农业害虫中；城市中园林绿地的害虫防治及卫生害虫防治的空间喷洒也是有机磷类杀虫剂使用较多。家蝇是城市主要卫生害虫，在DDVP等有机磷杀虫剂长期的选择压力下，大部分地区的家蝇对其产生了抗药性，所以虽然用药剂量逐渐加大，但防治效果普遍降低且对环境污染严重。了解某地区家蝇的抗药性情况可以规范杀虫剂的使用，对抗药性的治理和防治效率的提高有重要的指导作用和理论意义。对于家蝇抗药性的检测，有生物测定方法、生物化学方法、免疫学方法、分子生物学方法等多种方法，然而受技术水平和实验仪器等限制，我国长期以来使用最多的还是传统的点滴法、药膜法等生物测定方法，具有较大的局限性。目前不论哪种测定方法，都需要花费较长时间，而且基本无法在现场进行快速检测，对杀虫剂使用的指导作用不够及时。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种可在现场进行快速检测的家蝇对DDVP抗药性快速检测的试剂盒。为实现上述目的，本技术一种家蝇对DDVP抗药性快速检测的试剂盒，包括盒体和取液器，其中盒体中设置有含O. 1%曲通-100的25mmol/L磷酸缓冲液的PB缓冲液试剂瓶、含乙酰胆碱ATCh的底物试剂瓶、含二硫双对硝基苯甲酸的PB溶液显色剂试剂瓶、含O.04mg/mL的DDVP丙酮溶液的抑制剂试剂瓶、含O. 05mg/mL乙酰胆碱脂酶AChE的阳性对照试剂瓶、含丙酮溶液的阴性对照试剂瓶。本技术结构简单，能够在检测现场，快速、准确的检测家蝇对DDVP抗药性，其具有使用方便、操作简单等优点。附图说明图I为本技术结构示意图。具体实施方式下面，参考附图，对本技术进行更全面的说明，附图中示出了本技术的示例性实施例。然而，本技术可以体现为多种不同形式，并不应理解为局限于这里叙述的示例性实施例。而是，提供这些实施例，从而使本技术全面和完整，并将本技术的范围完全地传达给本领域的普通技术人员。为了易于说明，在这里可以使用诸如“上”、“下” “左” “右”等空间相对术语，用于说明图中示出的一个元件或特征相对于另一个元件或特征的关系。应该理解的是，除了图中示出的方位之外，空间术语意在于包括装置在使用或操作中的不同方位。例如，如果图中的装置被倒置，被叙述为位于其他元件或特征“下”的元件将定位在其他元件或特征“上”。因此，示例性术语“下”可以包含上和下方位两者。装置可以以其他方式定位(旋转90度或位于其他方位)，这里所用的空间相对说明可相应地解释。如图I所示，本技术一种家蝇对DDVP抗药性快速检测的试剂盒，包括盒体I和取液器2，其中盒体I中设置有若干个试剂瓶3，若干个试剂瓶3包括含O. 1%曲通-100的25mmol/L磷酸缓冲液的PB缓冲液试剂瓶、含乙酰胆碱ATCh的底物试剂瓶、含二硫双对硝基苯甲酸的PB溶液显色剂试剂瓶、含O. 04mg/mL的DDVP丙酮溶液的抑制剂试剂瓶、含O.05mg/mL乙酰胆碱脂酶AChE的阳 性对照试剂瓶、含丙酮溶液的阴性对照试剂瓶。其中，I、试剂盒内容研磨棒、缓冲液、抑制剂、底物、显色剂、阳性对照、阴性对照、说明书(图I)。缓冲液25mmol/L磷酸缓冲液(PB)，pH=7.4，含O. 1%曲通-100。先用去离子水配制出 O. 2mol/L 的 NaH2PO4 和 Na2HPO4 · 12H20,取 19ml 配制好的 NaH2PO4和 81mL Na2HPO4 · 12H20充分混合，将混合液定容至800mL后加入O. 8ml曲通-100，配制出含O. 1%曲通-100的25mmol/L 磷酸缓冲液，pH=7. 4。底物ATCh(乙酰胆碱)2. 892mg。显色剂称取二硫双对硝基苯甲酸(5，5’ -dithio-bis (2-nitrobenzoicacid), DNTB) 18. 2mg，溶于 IOOmL ρΗ7· 4,25mmol/L 的 PB 中，再加入碳酸氢钠 7. 5mg，用 PB定容至200mL。抑制剂0. 04mg/mL的DDVP丙酮溶液。阳性对照0. 05mg/mL乙酰胆碱脂酶AChE PB溶液。阴性对照丙酮溶液。2、检测的灵敏度及动态范围本技术是定性检测家蝇种群是否对DDVP产生抗药性，不能定量检测对DDVP的抗性系数。检测范围以DDVP对家蝇种群的LD50 (95%置信限)(O. 0470(0. 0287-0. 0769)μ g/只为敏感种群，DDVP的LD50 (95%置信限)彡O. 1228(0. 1190-0. 1266) μ g/只为抗性种群。3、方法的特异性本技术能够检测对DDVP产生抗药性的家蝇种群，对其它种类杀虫剂,如有机氯类及拟除虫菊酯类杀虫剂产生抗药性的种群不产生交叉反应。4、样品的检测能力本技术只对家蝇种群DDVP的抗药性检测有实用性，不应用于其它类医学昆虫及其它类杀虫剂抗药性检测。检测时I、待测样品制备将8头家蝇成虫置于_20°C或_40°C冰箱内30分钟，用镊子取其头部放入I. 5mL离心管中，加入2 O O μ L冰冷缓冲液，用研磨棒匀浆，整个操作在冰上进行。匀浆液于40C IOOOOXg离心24分钟，取上清液为待测样品，4°C下保存备用。2、样品的检测取I只底物管，少许离心使药聚集到管底，取ImL显色剂加到底物管中配成显色液。取3只O. 5mL离心管，I号管为阳性对照管，2号管为检测管，3号管为阴性对照管。每管加入70 μ L待测样品，然后I号管加入10 μ L阳性对照，2号管加入10 μ L抑制剂，3号管加入10 μ L阴性对照，静置2min。向各管中分别加入630 μ L显色液，均匀混合后放置15min，直至出现颜色反应。3、检测结果判定阳性对照管为黄色，阴性对照管为无色，说明实验有效。检测管为黄色时，说明检测的家蝇种群对DDVP存在抗药性；检测管为无色时，说明检测的家蝇种群对DDVP敏感。·4、抑制剂易挥发，用完后立刻盖紧，剩余的回收处理。权利要求1.家蝇对DDVP抗药性快速检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括盒体和取液器，其中盒体中设置有含曲通-100的磷酸缓冲液的PB缓冲液试剂瓶、含乙酰胆碱ATCh的底物试剂瓶、含二硫双对硝基苯甲酸的PB溶液显色剂试剂瓶、含DDVP丙酮溶液的抑制剂试剂瓶、含乙酰胆碱脂酶AChE的阳性对照试剂瓶、含丙酮溶液的阴性对照试剂瓶。专利摘要本技术公开了一种家蝇对DDVP抗药性快速检测的试剂盒，包括盒体和取液器，其中盒体中设置有含0.1%曲通-100的25mmol/L磷酸缓冲液的PB缓冲液试剂瓶、含乙酰胆碱ATCh的底物试剂瓶、含二硫双对硝基苯甲酸的PB溶液显色剂试剂瓶、含0.04mg/mL的DDVP丙酮溶液的抑制剂试剂瓶、含0.05mg/mL乙酰胆碱脂酶AChE的阳性对照试剂瓶、含丙酮溶液的阴性对照试剂瓶。本技术结构简单，能够在检测现场，快速、准确的检测家蝇对DDVP抗药性，其具有使用方便、操作简单等优点。文档编号G01N21/78GK202693477SQ201120509529公开日2013年1月2本文档来自技高网...

【技术保护点】
家蝇对DDVP抗药性快速检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括盒体和取液器，其中盒体中设置有含曲通？100的磷酸缓冲液的PB缓冲液试剂瓶、含乙酰胆碱ATCh的底物试剂瓶、含二硫双对硝基苯甲酸的PB溶液显色剂试剂瓶、含DDVP丙酮溶液的抑制剂试剂瓶、含乙酰胆碱脂酶AChE的阳性对照试剂瓶、含丙酮溶液的阴性对照试剂瓶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曹晓梅，杨振洲，张晓龙，陈拓，房健慧，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：实用新型
国别省市：