一种快速定量检测HCG的试纸条及检测方法技术

本发明专利技术涉及一种快速定量检测HCG的试纸条及检测方法，该试纸条包括上样垫、标记物垫、NC膜、吸样垫和塑料板，所述的上样垫、标记物垫、NC膜和吸样垫依次粘附于塑料板，标记物垫上包被有胶体金标记的鼠抗HCG-β单克隆抗体，NC膜上分别包被有鼠抗HCG-α抗体构成的检测线T线和羊抗鼠IgG抗体构成的质控线C线，同时在NC膜上检测线T线靠近标记物垫一侧划有用于标示加样位置的加样指示线。本发明专利技术的试纸条通过膜上加样方式不但能够克服现有检测试剂因HCG含量过高而产生的钩状效应，且通过配套的免疫层析判读仪能够对血液或尿液中的HCG定量监测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物应用
，特别涉及一种快速定量检测HCG的试纸条及检测方法。
技术介绍
当受精卵植入子宫后，孕妇体内就会分泌一种新激素，称为人绒毛膜促性腺激素(Human Chorionic Gonadotrophin,简称 HCG)。HCG 于 1927 年被 Aschheim 和 zondek 在孕妇尿中首次发现。HCG是细胞滋养层及合体滋养层分泌的一种激素，它首先存在于胎盘中，通过血液循环而排泄到尿中。在胎盘、血液和尿中均存在HCG及其代谢产物。在受孕后10天左右，就可以在孕妇的晨尿中检测到HCG。正常妊娠妇女血清中，HCG浓度在黄体达到峰值后的7 10天或受精卵植入子宫后的4 7天后开始增加，并以指数形式增长，平均每I. 5 2天浓度就翻倍，不过增加速率也因人而异。妊娠7 10周后HCG浓度就可达 20，000 100，000IU/L，在妊娠13 15周时浓度有所降低，之后又开始缓慢增加直至妊娠30 33周，接着又缓慢降低直至妊娠结束。异位妊娠HCG上升则较缓慢，或怀孕的3 6周，HCG不能持续翻倍增加，应考虑异位妊娠或先兆流产的可能。HCG是早期妊娠中的主要信号，特异性标志，已成为临床上诊断早期妊娠的常用指标。定量动态监测HCG量也作为异位妊娠的监控指标。早期检测妊娠的方法主要有三种超声检测、基础体温测定和免疫层析检测。超声检测由于只能检测妊娠6周后子宫的情况，而通常被用于临床上胎儿的监测。基础体温测定虽然简单易行却又比较繁琐。免疫层析检测由于它的操作简便、具有直观、快速、检测效率高、方法简便、无污染、费用低廉、灵敏度高、特异性强等优点，被广泛应用于临床诊断、野外现场及家庭自我检测。免疫层析检测HCG的试剂运用双抗体夹心法。当测试液浸泡或滴入试纸条的样品垫后，通过吸水纤维的毛细作用，测试液迅速湿透金标结合垫，金标结合垫上的胶体金结合物被溶解，并随测试液一起沿层析材料向前移动。若测试液中存在待测抗原Ag，则它就会和胶体金结合物中的抗体发生特异性免疫反应，形成胶体金结合物-待测抗原的免疫复合物。然后随测试液一起流经固定在Ne膜上T线的捕获试剂。T线的捕获试剂捕获胶体金结合物-待测抗原免疫复合物，即与该免疫复合物发生特异性免疫反应，形成胶体金结合物-待测抗原-捕获试剂的免疫复合物，从而使胶体金结合物-待测抗原免疫复合物滞留在T线处。测试液继续前移，在流经Ne膜上固定有羊抗鼠IgG抗体的C线时，未与待测抗原Ag发生反应的胶体金结合物与C线上羊抗鼠抗体发生免疫反应，从而使得游离的胶体金结合物滞留在C线处。此时T线和C线处均有胶体金结合物滞留，即T线和C线处均能观察到颜色(红色或紫色)，则表示检测结果为阳性结果，即测试液中有待测抗原；若仅C线处观察到颜色，而T线处未观察到颜色，则表示检测结果为阴性结果，即测试液中无待测抗原；待测液中HCG含量不同，所产生的T线颜色深浅也不相同，随着HCG含量的增加，T线颜色就会越深。然而，在一些样品中高浓度HCG则可导致高水平的“钩状效应(hook effect)”，即HCG浓度远远大于胶体金试纸条的检测上限时，HCG测得结果反而随浓度的增加而下降，T线颜色反而变浅，在临床诊断中造成HCG低水平的假象，使诊断结果出现不真实的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种快速定量检测HCG的试纸条及检测方法，尤其是提供一种能快速定量检测尿液或血液中HCG的试纸条。实现本专利技术的技术方案为，一种快速定量检测HCG的试纸条及检测方法，包括上样垫、标记物垫、NC膜、吸样垫和塑料板，所述试纸条与免疫层析判读仪配套使用进行HCG的定量检测，对待测样品进行稀释后定量检测范围为10 15000mIU/ml。所述的上样垫(I)、标记物垫(2)、NC膜(3)和吸样垫(4)依次粘附于塑料板(8)，标记物垫(2)上包被有胶体金标记的鼠抗HCG-β单克隆抗体，NC膜(3)上分别包被有鼠抗 HCG- α抗体构成的检测线T线(6)和羊抗鼠IgG抗体构成的质控线C线(7)，同时在NC膜(3)上检测线T线(6)靠近标记物垫(2) —侧划有用于标示加样位置的加样指示线(5)。所述的试剂条通过以下的步骤进行制备(I)胶体金标记鼠抗HCG-β单克隆抗体标记物垫的制备用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为40nm的胶体金溶液，制备完成后取三份胶体金溶液，分别用O. 2MK2C03将溶液PH调到pH7. 5、pH8. 5、pH9. 5、然后将溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，按每IOOml溶液O. 5mg、I. Omg, I. 5mg鼠抗HCG- β单克隆抗体缓慢滴加到胶体金溶液中，继续搅拌I小时，再加入终浓度为O. 2% BSA, O. I %聚乙二醇20000进行封闭30分钟，12000转离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至76. 5ml，按Iml溶液铺16cm2的比例均匀地铺在无纺布上，再置于温度20 25°C、湿度小于30%的干燥间干燥2 4小时，制成标记物垫，备用； (2)鼠抗HCG- α抗体包被用O. OlM pH7. 2PBS将鼠抗HCG- α抗体分别稀释成1.011^/1111、1.51^/1111、2.01^/1111，然后用喷膜仪将鼠抗!^-(1抗体包被液在NC膜上按I. 3ul/cm划线包被，构成检测线T线；同时包被羊抗鼠IgG抗体作为C线，同时在NC膜上检测线T线靠近标记物垫一侧划有用于标示加样位置的加样指示线，包被完成后将NC膜置于干燥间干燥3 4小时，备用；(3)试纸条的装配在温度20 25°C、湿度小于30%的干燥室内，取塑料支撑板，将已包被的NC膜放置在塑料支撑板的中部粘贴，在NC膜T线一侧搭接标记物垫，在标记物垫另一侧搭接粘贴上样垫，在NC膜C线一侧距边缘搭接吸样垫；然后用裁剪机将贴好的塑料板切成适当宽度的试纸条。一种定量检测HCG的方法，所述方法包括以下步骤(I)仪器内存标准曲线的绘制以国家参考品为参比，将HCG标准品溶液用正常人尿液(阴性)或牛血清稀释成浓度为 OmIU/ml、10mIU/ml、50mIU/ml、250mIU/ml、IOOOmIU/ml、2500mIU/ml、5000mIU/ml、lOOOOmlU/ml、15000mIU/ml 系列标准品，平衡至室温，将制备好的试剂条平放，在NC膜标示线上加入3 5ul待检标准品，然后向上样垫上加入60 80ml样本稀释液，静止10分钟后放入配套的免疫层析判读仪中进行读数，以测得GOD值(X)作为横坐标，以HCG含量(y)作为纵坐标，绘制仪器内存标准曲线；(2)按照步骤(I)的方法检测待测样品，并通过标准曲线获得所述待测样品的HCG浓度。所述的免疫层析判读仪综合应用机械、电子、光学、微机以及心理物理学的原理和方法，达到智能人眼识别判读功能，对免疫层析试剂反应线的视觉信号自动定位，背景剔除，颜色分辨，量化处理，通过一个量化的GOD值表现出来。即在一定的范围内，线条颜色的深浅与被测物的浓度可以呈现出一定的关系，在测试反应过程中只要做一条标准曲线储存在仪器自带IC卡中，就能够对免疫层析试剂条进行定量测试。所述试纸条不但能够克服现有检测试剂因HCG含量过高而产生的钩状效应，而且能够对血液或尿液中的HCG定量监测，避免了样本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速定量检测HCG的试纸条，包括上样垫(1)、标记物垫(2)、NC膜(3)、吸样垫(4)和塑料板(8)，其特征在于，所述试纸条与免疫层析判读仪配套使用进行HCG的定量检测，对待测样品进行稀释后定量检测范围为10～15000mIU/ml。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李洲，许俊艳，
申请(专利权)人：天津中新科炬生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：