一种NGAL纳米磁珠免疫快速定量检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种NGAL纳米磁珠免疫快速定量检测试剂盒，包括底衬、吸水垫，底衬上从左到右依次粘贴样品垫、免疫纳米磁珠结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述免疫纳米磁珠结合垫上包被有NGAL单克隆抗体相偶联的纳米磁珠，所述硝酸纤维素膜上包被有NGAL抗体作为检测线和兔抗鼠IgG抗体作为质控线。本实用新型专利技术实现了快速检测，同时具有操作方便、准确率和灵敏度高的优点。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属于临床医学诊断领域，具体涉及一种NGAL纳米磁珠免疫快速定量检测试剂盒。
技术介绍
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associatedlipocalin, NGAL)是1993年在中性粒细胞内首次被发现的，与炎症、胚胎发育、免疫应答、趋化作用、信号转导以及多种肿瘤的发生于发展等过程相关。近年来国内外研究表明，NGAL蛋白在多种疾病发生过程中具有特异性表达变化的特点，使得NGAL成为检测疾病的生物标志物。近年美国临床化学协会(AACC)年度会议的研究结果发表得知检测尿中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白可能有助于临床医生检测心脏移植患者环孢霉素诱导的毒性，以及调节环孢霉素剂量以预防其对肾脏造成的不可逆伤害。中国专利CN101163971研究在急性肾衰竭(ARF)、急性肾小管坏死(ATN)和急性肾小管间质性肾病(ATIN)发病的早期，尿液和血液中NGAL水平显著增加，因此NGAL是早期检测肾脏对缺血性损伤的标志物。目前，检测NGAL方法主要有酶联免疫法(中国专利CN101650369)、基于抗体免疫的微型柱测试法(中国专利CN101163971)和胶乳免疫比浊法(中国专利CN102072960A)。酶联免疫法操作容易受到酶活性变化的影响，结果不太准确；胶乳比浊法反应特异性不好，所需试剂比较复杂。磁性纳米颗粒技术通过借助小型仪器对试纸条上免疫磁珠微量信号的检测从而对样品实行定量检测，大大提高了检测的灵敏度，使得这一技术得到快速发展。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种NGAL纳米磁珠免疫快速定量检测试剂盒，将超顺磁性纳米颗粒作为标记物，具有简便快速、定量准确的优点。本技术通过以下技术方案实现一种NGAL纳米磁珠免疫快速定量检测试剂盒，包括底衬、吸水垫，底衬上从左到右依次粘贴样品垫、免疫纳米磁珠结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，免疫纳米磁珠结合垫上包被有NGAL单克隆抗体相偶联的纳米磁珠，硝酸纤维素膜上包被有NGAL抗体作为检测线和兔抗鼠IgG抗体作为质控线。所述纳米磁珠为直径50_200nm的超顺纳米磁珠。所述硝酸纤维素膜上包被的NGAL抗体为NGAL单克隆抗体或多克隆抗体。 所述免疫纳米磁珠结合垫材质为玻璃纤维素膜或聚酯膜。本技术所述一种NGAL纳米磁珠免疫快速定量检测试剂盒的检测原理如下利用纳米磁珠标记NGAL抗体，在硝酸纤维素膜上包被NGAL相应的配对的抗体，检测时当样品中含有NGAL时，标记纳米磁珠的NGAL抗体和样品中NGAL结合形成复合物，然后层析在硝酸纤维素膜上于检测线上NGAL配对抗体结合，聚集在检测线上，数分钟后，再通过MICT磁信号检测仪测定检测线上捕获磁珠的含量，从而得知样品中NGAL的含量。与现有技术相比，本技术具有以下有益技术效果本技术通过超顺纳米磁珠与抗体结合测定样品中NGAL含量，所用超顺磁性纳米磁珠不受其他有色杂质干扰，通过高灵敏度磁性检测仪测量结合在免疫磁性复合物上的微粒所产生的局部磁场效应，进而得出所测分析物的定量结果，并高于同类目测法。附图说明图I NGAL纳米磁珠免疫快速定量检测试剂盒结构示意图。其中，I、底衬；2、样品垫；3、免疫纳米磁珠结合垫；4、硝酸纤维素膜；5、吸水垫；6、检测线；7、质控线。 具体实施方式以下结合附图对本技术做进一步详细描述如图I所示，一种NGAL纳米磁珠免疫快速定量检测试剂盒，包括底衬I、吸水垫5，底衬I上从左到右依次粘贴样品垫2、免疫纳米磁珠结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水垫5，免疫纳米磁珠结合垫3上包被有NGAL单克隆抗体相偶联的纳米磁珠，硝酸纤维素膜4上包被有NGAL抗体作为检测线6和兔抗鼠IgG抗体作为质控线7。所述纳米磁珠为直径50_200nm的超顺纳米磁珠。所述硝酸纤维素膜4上包被的NGAL抗体为NGAL单克隆抗体或多克隆抗体。所述免疫纳米磁珠结合垫3材质为玻璃纤维素膜或聚酯膜。实施例I本技术NGAL纳米磁珠免疫快速定量检测试剂盒制备方法，包括如下步骤I)抗NGAL免疫磁珠的制备取适量50nm的超顺纳米磁珠(购自上海奥润微纳新材料科技有限公司)悬浮于含有20 μ g/ml NGAL单克隆抗体3B1的20mmol/L pH7. 5的PBS缓冲液，37°C下孵化致敏1-1. 5h，再于4°C下包被过夜。加O. lmol/L的甘氨酸溶液终止反应，再用O. 5%小牛血清封闭磁珠。包被好的磁珠经过多次洗涤后，加入10%硫酸铵于4°C保存。所述NGAL单克隆抗体3B1是由杂交瘤细胞株3B1产生的，所述杂交瘤细胞株3B1保藏单位为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏编号为CCTCC NO :C201249，保藏日期为2012年5月9号。2)包被免疫纳米磁珠结合垫3的制备将步骤I)制备好的免疫磁珠以Bio-Dot仪器喷涂到免疫纳米磁珠结合垫3上，喷量I. 0ul/cm，25°C干燥4 8小时，密封干燥保存，所述免疫纳米磁珠结合垫3材质是玻璃纤维素膜。3)检测线6的制备将NGAL单克隆抗体4C2使用20mmol/L的PBS (pH7. 2)稀释到4mg/ml的浓度，O. 8ul/cm在硝酸纤维素膜4上划线，在硝酸纤维素膜4上划线，在干燥箱内20°C鼓风干燥12h。所述NGAL单克隆抗体4C2是由杂交瘤细胞株4C2产生的，所述杂交瘤细胞株3B1保藏单位为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏编号为CCTCC NO :C201250，保藏日期为2012年5月9号。4)质控线7的制备将兔抗鼠IgG抗体按4mg/ml的浓度，O. 8ul/cm在硝酸纤维素膜4上划控制线，该线与检测线6平行，然后在干燥箱内20°C鼓风干燥12h，密封干燥保存。5)样品垫2的制备将样品垫2用PBS缓冲液浸泡2 4小时，取出后25°C干燥8小时。6)试纸条组装在底衬I上顺次相互搭接地粘贴样品垫2、免疫纳米磁珠结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水垫5得到试纸板，按照要求切割成适当宽度的试纸条。 实施例2本技术NGAL纳米磁珠免疫快速定量检测试剂盒另一种制备方法，包括如下步骤I)抗NGAL免疫磁珠的制备取适量ISOnm的超顺纳米磁珠(购自上海奥润微纳新材料科技有限公司)悬浮于含有20 μ g/ml单克隆抗体3B1的20mmol/L ρΗ7· 5的PBS缓冲液，37°C下孵化致敏1-1. 5h，再于4°C下包被过夜。加O. lmol/L的甘氨酸溶液终止反应，再用O. 5%小牛血清封闭磁珠。包被好的磁珠经过多次洗涤后，加入10%硫酸铵于4°C保存。2)包被免疫纳米磁珠结合垫3的制备将步骤I)制备好的免疫磁珠以Bio-Dot仪器喷涂到免疫纳米磁珠结合垫3上，喷量I. 0ul/cm，25°C干燥4 8小时，密封干燥保存，所述免疫纳米磁珠结合垫3材质是聚酯膜。3)检测线6的制备将NGAL多克隆抗体使用20mmol/L的PBS (pH7. 2)稀释到4mg/ml的浓度，O. 8ul/cm在硝酸纤维素膜4上划线，在硝酸纤维素膜4上划线，在干燥箱内20°C鼓风干燥12h。所述多克隆抗体是采用本领域熟练技术人员熟知的常规方法免疫鼠获得抗血清制备而得。4)质控线7的制备将兔抗鼠IgG抗体按4mg/ml本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种NGAL纳米磁珠免疫快速定量检测试剂盒，包括底衬、吸水垫，其特征在于底衬上从左到右依次粘贴样品垫、免疫纳米磁珠结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述免疫纳米磁珠结合垫上包被有NGAL单克隆抗体相偶联的纳米磁珠，所述硝酸纤维素膜上包被有NGAL抗体作为检测线和兔抗鼠IgG抗体作为质控线。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：苏恩本，颜彬，黄力，王勇，李靖，沈小娟，
申请(专利权)人：南京基蛋生物科技有限公司，
类型：实用新型
国别省市：