本发明专利技术公开了一种娄彻氏链霉菌（Streptomyces?rochei）42561，2012年9月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC?No.6556。通过管碟法、抑制菌丝生长速率法、抑制孢子萌发法、温室盆栽和田间试验综合测定了生防菌42561抑菌防病作用，试验结果表明，该菌株对棉花枯萎病和棉花黄萎病防效显著，可以作为有效的生物农药制剂，具有很好的应用开发前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物防治领域,具体涉及娄彻氏链霉菌iStreptomyces rochei )及其生防用途。
技术介绍
棉花枯萎病和棉花黄萎病是危害棉花生产的最主要病害，近年来棉花枯萎病和棉花黄萎病在我国棉区发生日趋严重。然而，目前还没有防治棉花枯萎病和棉花黄萎病的有效药剂。从微生物资源中寻找生物农药是有效途径之一，放线菌所产生的农用抗生素是其中的最重要来源。井R霉素、阿维菌素和秦岭霉素等生物农药的研制并推广充分证明了从放线菌的代谢产物中筛选经济高效农用抗生素的合理性和优越性。目前登记注册的防治棉花枯黄萎菌的生防菌还未见报道，但已有防治其他作物枯黄萎病的生防制剂商品。例如，1993年Harman等登记注册的商品名为F-stop的哈茨木霉，用于蔬菜镰刀根腐病的防治； 德国的生防制剂PR0PHYTA，为黄蓝状菌耶cm fIavus),主要用于蔬菜黄萎病的防治。因此，通过从放线菌中筛选防治棉花枯萎病和棉花黄萎病的高效生防菌是本专利技术的目的。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种有效的生防菌，具体而言是娄彻氏链霉MiStreptomyces rocAei), 2012年9月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 6556。本专利技术提供的技术方案是一种娄彻氏链霉菌iStreptomyces rochei ),于2012年9月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(保藏地址是北京市朝阳区北辰西路I号院3号)，保藏号为CGMCC No. 6556，经检测存活。本专利技术还提供所述的娄彻氏链霉菌作为生防菌的用途，特别是用于防治棉花枯萎病和棉花黄萎病。本专利技术具有以下有益效果结果表明娄彻氏链霉菌(生防菌42561)发酵液对棉花枯萎病菌(尖孢镰刀菌)和棉花黄萎病菌(大丽轮枝菌)抑菌圈直径分别为23. 96mm和32. 67mm，对其菌丝生长抑制率分别为89. 41%和83. 75%，孢子萌发抑制率分别为73. 56%和68. 75% ;盆栽试验结果表明，生防菌42561发酵液对棉花枯萎病和棉花黄萎病均表现出很好的防治作用，防治效果分别为36. 73%和44. 82% ;田间试验表明生防菌42561发酵液对棉花枯黄萎病的田间防治有一定的效果，在第三次施药后的第15和30天，其防治效果分别达到33. 06%和41. 65%。因此，生防菌42561对棉花枯萎病和棉花黄萎病防效显著，可以作为有效的生物农药制剂，具有很好的应用开发前景。附图说明图I生防菌42561的分类学地位。图2生防菌42561平板对峙法抑菌效果。其中，左大丽轮枝菌为靶标菌；右尖孢镰刀菌为靶标菌。A :42561 ；B :培养基块。图3生防菌42561发酵液管碟法抑菌效果，左大丽轮枝菌为靶标菌；右尖孢镰刀菌为靶标菌。A 42561发酵液；B :液体培养基。图4生防菌42561发酵液对大丽轮枝菌菌丝生长的抑制效果。A :生防菌42561发酵液处理组；B :液体培养基对照组。图5生防菌42561发酵液对尖孢镰刀菌菌丝生长的抑制效果。A :生防菌42561发酵液处理组；B :液体培养基对照组。图6生防菌42561发酵液对2种植物病原真菌孢子萌发的抑制作用。A :大丽轮枝菌一42561发酵液处理组；B :大丽轮枝菌一液体培养基对照组)；C :尖孢镰刀菌一 42561发酵液处理组；D :尖孢镰刀菌——液体培养基对照组。图7生防菌42561发酵液对棉花枯萎病的盆栽试验结果。A :42561发酵液处理组；B:多菌灵处理组C :清水对照组。图8生防菌42561发酵液对棉花黄萎病的盆栽试验结果。A :42561发酵液处理组；B:多菌灵处理组C :清水对照组。图9田间防效试验棉花茎杆剖面图。A :发病田42561发酵液处理组；B :发病田空白对照组；C :发病田多菌灵处理组；D :健康棉株。具体实施例方式下面通过具体实施方式的详细描述来进一步阐明本专利技术，但并不是对本专利技术的限制，仅仅作示例说明。实施例一生防菌的分离 采用新疆七角井盐湖(海拔1584. 49m，北纬43. 48°、东经91. 48° ) O 30cm的土壤样品，用含5%、10%、15%、20%和25%氯化钠的8种常规培养基(GWl培养基、GPY培养基、壳聚糖天冬酰胺培养基、甘油精氨酸培养基、甘油无机盐培养基，甘露醇无机盐培养基、ISP-4培养基和PY培养基)，采用稀释平板法(称取I g 土壤样品放入9 mL的无菌水溶液中，充分振荡，做成KT1悬浊液。吸取O. I mL悬浊液，均匀涂布于预先配制好的分离培养基平板上，37°C倒置培养。培养皿采用保鲜膜封口，减少培养基水分散失，延长培养时间。)，共分离出7个属共35株放线菌，多分布于链霉菌属和拟诺卡氏菌属，放线菌42561分离自含5%氯化钠的甘油精氨酸培养基，其培养基配方为甘油5 g/L，精氨酸I g/L，磷酸氢二钾I g/L，硫酸镁O. 5 g/L，碳酸钙O. 5 g/L，氯化钠50 g/L,琼脂粉17 g/L, pH 7.5。通过平板对峙法初筛和管碟法复筛，最终分离和筛选出了抑菌效果最好的生防菌42561。实施例二生防菌的鉴定 为进一步确定生防菌42561的分类学地位，本专利技术采用传统分类方法和分子分类方法对该菌株进行了分类鉴定。I形态观察用培养基 无机盐淀粉琼脂(ISP-4)培养基淀粉 10.00 g、(NH4)2SO4 4. 00 g、MgSO4 2. 00 g、K2HPO4 2. 00 g、CaCO3 I. 00 g、Nacl 40.00 g、琼脂 18.00 g、蒸馏水定溶至 1000ml，pH7. 2-7. 4，121 °C 高压湿热灭菌 30min。2弓丨物 采用放线菌通用引物由赛音生物技术(上海)有限公司合成。其序列分别为27F(5， -AGAGTTTGATCCTGGCTC-3，)和 1492R (5， -CGGCTACCTTGTTACGACTT-3，) 3试验方法 3.I形态学观察 普通显微镜观察采用插片法，37 °C培养生防菌42561。用光学显微镜观察记录菌丝形态、气生菌丝和基内菌丝生长情况，菌丝体是否产生孢子丝及孢子丝的排列方式、形状；孢子形状和大小；孢子的有无、形状、大小及形成方式等。3. 2生防菌42561的分子生物学鉴定 (A)生防菌42561基因组DNA的提取 收集培养平板上的42561菌体放入I. 5 mL的无菌离心管中，加入480 μ L的I X TE缓冲液。加入20 μ L溶菌酶(50 mg/mL)，放入37°C摇床中，200rpm振荡过夜。每管加入50 μ L 20%的SDS，加入5μ L 20 mg/mL的蛋白酶K，放入60°C摇床中，200 r/min振荡I h。加入55(^1^的酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)，12000印111离心10 min，取上清移入另一离心管中，反复抽提2-3次。取上清，加入等体积的无水乙醇，加入O. I倍体积的乙酸钠(3mol/L),放入4°C冰箱中沉淀DNA约O. 5h。12000rpm离心IOmin,弃上清。用200 μ L的70%乙醇清洗离心产物2次，12000rpm离心5 min,弃上清，将乙醇挥发完全本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种娄彻氏链霉菌（Streptomyces？rochei），于2012年9月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC？No.6556。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张利莉，柳成宾，贾晓宇，李艳宾，范瑛阁，曾红，张飞，万传星，
申请(专利权)人：塔里木大学，
类型：发明
国别省市：
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