本发明专利技术涉及一种胸腺体液因子THF-γ2及其衍生物Z，胸腺体液因子THF-γ2衍生物Z具有如SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列。本发明专利技术中的胸腺体液因子THF-γ2及其衍生物Z采用化学合成方法进行制备，而后进行分离纯化后得到。本发明专利技术还涉及其化学合成方法及分离方法。经动物实验验证，本发明专利技术的胸腺体液因子THF-γ2衍生物Z具有可促进T淋巴细胞增殖活性，并具有显著的抑瘤作用及抗辐射作用，本发明专利技术还涉及了该衍生物在制备抗肿瘤药物、肿瘤物理治疗及化学治疗药物、抗辐射药物中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种胸腺体液因子THF-Y 2的衍生物，具体讲，涉及该胸腺体液因子THF- Y 2的衍生物的合成、纯化方法及其应用。
技术介绍
胸腺是免疫系统中重要的中枢免疫器官，负责T细胞的分化和成熟。其功能的正常与否和直接影响着机体的健康状态。人类在胚胎期间，胸腺是第一个出现的淋巴器官。婴儿初生时期胸腺约重10 15克，是一生中胸腺相对重量最大的时期。随着年龄的增长，胸腺逐步成熟，至青春期成长为30 40克，此后，胸腺重量随年龄老化而逐渐减退。到老年时，胸腺仅重15克左右。胸腺的免疫功能在抗感染、抗肿瘤和自身免疫性疾病中起着重要作用。所以，研究胸腺，尤其是它所分泌的胸腺素对了解某些疾病的发病机理及其治疗极为 重要。胸腺(Thymus) —词来源于古希腊的Herb和Heart。因此,人们将胸腺看作是机体健康的“心脏”。1901年Laquer等报告了一名重症肌无力患者伴有胸腺肿瘤。1911年Sauerbruch给患有重症肌无力的病人做了首例胸腺切除术。自1936年开始,Blalock接连做了几十例胸腺切除术，成功地治愈了大部分患有重症肌无力的病人。虽然如此，由于那时人们尚不了解胸腺的功能，仍将它看作是一个多余的器官。此后，越来越多的科学家和医生投入到胸腺的研究领域中来，但大都集中于研究胸腺形态学，直到1966年Goldstein等报告了从小牛胸腺中提纯出具有生物活性的物质，并命名为胸腺素(Thymosin)，引起免疫学家及科学家的极大兴趣，对胸腺深入的研究才广泛开始。现已认识到胸腺对于淋巴系统的发育和维持免疫系统的平衡起着重要作用，它在抗肿瘤免疫，移植免疫及抗微生物感染等作用中地位十分重要。最近的研究显示，胸腺及胸腺因子通过表达高密度的T细胞受体而促进T细胞的增殖。胸腺与中枢神经系统也存在相互调节作用，其机理是目前研究的热点之一 O如今我们所熟知的胸腺因子主要有以下几类胸腺肽、胸腺素、胸腺喷丁、胸腺刺激素和胸腺体液因子等。THF为从胸腺组织中得到的一种粗制品，具有免疫学活性。在T淋巴细胞亚群的分化、成熟，⑶4+/⑶8+正常比率的维持及在加强脾细胞对有丝分裂原PHA、ConA的反应、对切除胸腺的新尘小鼠的移植排斥反应的恢复等方面起重要作用。同时，THF还可促进T淋巴细胞产生IL-2和TNFa。Burstein等从THF中纯化得到了活性组分，命名为THF- Y 2，它含有8个氨基酸，其氨基酸序列为 NH2-Leu-Glu-Asp-Gly-Pro-Lys-Phe-Leu。胸腺体液因子的粗品(THF)是从胸腺组织中提取得到的混合物，先后通过离心、匀浆并在中性PH状态下透析等步骤，最终将分子量控制在IOkDa左右。低分子量的透析液被命名为CT0(calf thymus outer fraction)。在体内实验中，切除胸腺的小鼠给予CTO后能够减轻其消瘦程度，还能够促使其恢复正常体重。另有实验证明，CTO还能在一定程度上通过修复脾细胞的免疫能力，使异源性皮肤或肿瘤移植的排斥反应增强，并且在T细胞对绵阳红细胞的反应中也能起到辅助作用。Burstein等人又对CTO进行了一系列步骤的纯化，他们首先使用凝胶层析方法进行分离，材料为SephadexG-IO和G_25,随后使用DEAE-Sephadex离子交换色谱在pH 8. O条件下进行氯化钠梯度洗脱，整个过程都通过一系列的活性实验对收集到的各成分进行活性测定，得到了活性成分命名为THF-1。该活性成分又经由一系列反向色谱的分离步骤，得到了七个中间产物，依次命名为THF-2至THF-8。制备获得的这些中间产物注射到NTx小鼠体内能够恢复其脾细胞IL-2的活性，在体外实验中发现它们能够在ConA刺激下增强健康小鼠脾细胞IL-2的产量。在分离出THF- Y 2的最终阶段，一共得到了九个主要组分，分别命名为 THF-α ,THF-β、THF-Y 2、THF-Y 3、THF-Y 4、THF-Y 5、THF-8、THF- ε 和 THF-Φ。然而在接下来的实验中发现，只有THF-Y 2在体内和体外实验中均表现出活性。经测定，THF- Y 2是一个八肽，分子量为918Da,其氨基酸序列为NH2/Leu-Glu-Asp-Gly-Pro-Lys-Phe_Leu。这一序列和其它发表的胸腺因子没有同源性。 一、THF- Y 2具有免疫促进活性。纯品THF-Y 2在体外实验中能够提高低IL-2产量的小鼠脾细胞株的IL-Y 2产量，在NTx小鼠的体内活性实验中，THF-Y 2能够恢复小鼠的脾细胞IL-2产量。对老年免疫低下小鼠使用THF- Y 2治疗后，小鼠胸腺T细胞对丝裂原的响应增强，脾细胞的辅助细胞活性增加。研究证明，THF-Y2治疗的效果要优于胸腺素。在集落刺激因子不足的情况下，将THF- Y 2和普通小鼠的骨髓细胞一起培养，THF- Y 2能够使骨髓细胞数量增加。一项研究显示，THF- Y 2与人脐带血淋巴细胞在体外培养，THF- Y 2能够增加细胞⑶4和⑶8分子的表达，在PHA不能充分刺激的条件下THF- Y 2还能增加IL-2的表达。在rGM或rEpo分别存在时，THF- Y 2可以促进骨髓，外周髓和红细胞祖细胞克隆的增加。患有慢性乙肝的患者的淋巴细胞功能会表现出异常，THF- Y 2能够提高这些患者的IL-2和TNF- α的产量，但是IFN-Y 2的产量不受影响。因此，胸腺体液因子THF-Y 2能够调节骨髓中定向干细胞的功能，还能够重建和活化T细胞的各项功能。二、THF- Y 2的抗肿瘤活性早期的研究结果显示，当THF与小鼠脾细胞和Lewis肺癌细胞混合培养时，THF能够显著提高T细胞对肿瘤细胞的细胞毒作用。有研究用荷瘤小鼠来评价THF-Y 2的免疫治疗作用，分别使用了四种不同的瘤种，两种为浆细胞瘤(M0PC-15和RPC-5)，另外两种为鼠源Lewis肺癌和B16黑素瘤。实验过程中THF-Y 2治疗与化疗同时进行。Ben-Efraim及其同事发现，若仅用5-氟尿嘧啶治疗M0PC-315肿瘤只能暂时使肿瘤消退，并不能提升抗肿瘤应答。而用THF- Y 2和5-氟尿嘧啶同时使用时则能延长M0PC-315荷瘤小鼠的存活时间，使CD4+数量恢复到正常水平，可以增强脾细胞体外对SRBC的抗体应答。但是对于M0PC-315肿瘤的荷瘤小鼠单独使用THF- Y 2治疗没有上述效果。接受美法兰治疗的M0PC-315荷瘤小鼠具备抗肿瘤反应，但是仍然表现为免疫缺陷。用THF- Y 2继续治疗这些小鼠能够改善其免疫缺陷的状态，提升细胞的和体液的应答。Ophir和其同事发现，用免疫接种法和THF- Y 2共同治疗RPC-5荷瘤小鼠后，小鼠脾细胞对RPC-5肿瘤细胞的细胞毒作用增加，并且可以增强小鼠脾细胞对抗RPC-5肿瘤的能力。从实验数据得出与单独使用化疗相比，在治疗中添加THF-Y 2后在阻止肿瘤发展和转移方面效果更优；使用THF- Y 2对于化疗后免疫活性的恢复能起到很好的作用。三、THF- Y 2抗感染活性由于一般的病毒感染都伴随着免疫系统的损伤，因此也有人做了实验来探讨THF-Y 2是否能在病毒感染的状态下提升胸腺的功能，增强机体抵御病毒感染的能力。该项研究的第一个实验是THF对S本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种胸腺体液因子THF？γ2及其衍生物，其特征在于，胸腺体液因子THF？γ2的衍生物Z具有如SEQ？ID？NO：1所示的氨基酸序列，胸腺体液因子THF？γ2具有如SEQ？ID？NO：2所示的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐康森，王悦，乐嘉静，李湛军，
申请(专利权)人：中国生化制药工业协会，
类型：发明
国别省市：
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