枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用技术

本发明专利技术公开了一株枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用。本发明专利技术的菌株分类命名为枯草芽孢杆菌（BaciLLussubtiLis）723，保藏号为CCTCCNO：M2012285。枯草芽孢杆菌（BaciLLussubtiLis）723具有产量高、发酵周期短的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物领域，具体而言，涉及一株枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用。
技术介绍
生物表面活性剂是由微生物产生的天然表面活性化合物。生物表面活性剂与化学合成表面活性剂性能相似，具有降低表面张力、稳定乳化液和发泡等功能。但相比之下，生物表面活性剂还有其自身的许多优势可生物降解，不会造成再污染；无毒或低毒；一般不致敏、可消化，因此可用于化妆品和食品的添加剂；可以从工业废物中生产，用于生物环境 治理；具有更好的环境相容性，更高的起泡性，在极端温度、PH、盐浓度下的更好选择性和专一性；结构多样，有可能适用于特殊领域。生物表面活性剂主要分为糖脂类，脂肽类，脂肪酸，磷脂，多聚表面活性剂等。目前，脂肽类表面活性剂的产量比较低，国内外脂肽类表面活性剂通过批次发酵的产量均低于 5g/L。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株可以产生生物表面活性剂的枯草芽孢杆菌。为了实现本专利技术的技术目的，本专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌，其分类命名为枯草芽孢杆菌UaciZZw1S subtiLiS、723，其保藏编号为CCTCC NO M 2012285。本专利技术还提供了枯草芽孢杆菌OfeciZZm的培养方法，所述培养方法包括将所述枯草芽孢杆菌接种于活化培养基中培养以得到种子培养液；和将所述种子培养液接种于发酵培养基中以得到脂肽类表面活性剂。进一步地，所述培养方法包括将经斜面培养12小时-24小时的所述枯草芽孢杆菌接种于活化培养基中，并在30摄氏度-37摄氏度的条件下培养12小时-24小时以得到所述种子培养液；和将所述种子培养液按照2%-4%的接种量接种于所述发酵培养基中，并在30摄氏度-37摄氏度的条件下培养24小时-48小时以得到脂肽类表面活性剂。所述发酵培养基配方为葡萄糖15_25g/L，油15_25g/L，尿素3_5g/L，硫酸铵3-5g/L,磷酸二氢钾3g/L,无机离子O. 01g/Lo所述油包括食用油、甘油、石蜡、煤油和正己烷中的一种或多种。所述食用油为豆油。本专利技术还提供了枯草芽孢杆菌OfeCiZZM SUbtiLiS) 723在发酵生产脂肽类表面活性剂中的应用。本专利技术的有益效果在于 枯草芽孢杆菌723的发酵液CMC值仅为25mg/L,远远低于一般化学表面活性剂的CMC值。枯草芽孢杆菌723发酵24h后脂肽类表面活性剂的产量即可以达到15g/L。因此，枯草芽孢杆菌723具有产量高、发酵周期短的优点。枯草芽孢杆菌723可以利用食用油、甘油、石蜡、煤油、正己烷、废弃油来生产生物表面活性剂，因此不但可以应用于石油开采工业，而且可以用来分解环境中的废弃油以避免污染，具有多种功效。本专利技术的生物材料枯草芽孢杆菌subtILisMTi的保藏日期为2012年7月13日，保藏单位全称为中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，地址为中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO: M 2012285。具体实施例方式本专利技术的生物材料枯草芽孢杆菌(MaciLLus subtILisMTi的保藏日期为2012年7月13日，保藏单位全称为中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，其保藏编号为CCTCC NO:M 2012285。本专利技术的枯草芽孢杆菌723为高产脂肽类表面活性剂的菌株。本专利技术的枯草芽孢杆菌723具有如下生理学特征 I、菌株的形态特征菌株是革兰氏染色阳性杆菌，形成芽孢，芽孢较大，圆柱形，居中。半固体穿刺运动，有鞭毛，无荚膜。平板生长茁落形状不规则，边缘不整齐，菌落表面皱褶、粗糙、较干燥等，是典型的芽孢杆菌菌落特征。2、菌株的生理生化特征对接触酶，可溶性淀粉水解，V-P，柠檬酸盐利用，丙二酸盐利用，葡萄糖，反硝化试验呈阳性反应。对氧化酶，吲哚，苯丙氨酸脱氨酶呈阴性反应。可以在55°C的高温下下生长。该菌在最佳条件下发酵表面张力可以由72mN/m降至26mN/m，临界胶束浓度(CMC)值为25mg/L，远远低于一般的化学表面活性剂的CMC值。在24小时发酵产物的产量最高，达到15g/L。本专利技术的枯草芽孢杆菌723可以利用下述的筛选方法进行筛选，所述筛选方法可以包括如下步骤 (I)取Ig胜利油田的土样放入50mL的生理盐水中，在30-37°C，100_200rpm条件下振荡 3_5h。(2)将上述步骤(I)中获得的土样静置10-20min，取上清液2-4mL放入50mL富集培养基中，30-37°C，100-200rpm 下培养 12_24h。⑶取步骤(2)获得的富集培养液2_3mL，梯度稀释成10_5_10_9，涂布于血平板，30-37 °C 下培养 12-24h。⑷选择步骤(3)中溶血圈大的菌株进行排油圈试验。排油圈最大的菌株就是枯草芽抱杆菌subtiLis) 723。其中，步骤(2)中所用的富集培养基组成为葡糖糖10_20g/L，酵母粉3_5g/L，蛋白胨3-5g/L，七水合硫酸镁2-4g/L。步骤(3)中所用的血平板的配方为酵母粉5-10g/L，蛋白胨10_12g/L，氯化钠10-12g/L，脱纤维除菌绵羊血8%，琼脂2%。步骤(4)中所用的排油圈试验的具体步骤是取直径为9cm的培养皿，加入20mL的蒸馏水，在水中央加入200 μ L的用苏丹红! 11染色的煤油形成一薄层油膜，在煤油中间慢慢加入一滴发酵上清液，测定排油圈的直径。煤油是经过苏丹红II〖染色的，煤油苏丹红I Π的比例是200: I。步骤(4)中所用的乳化值测定的具体步骤是取一个刻度试管，加入5mL发酵上清液和5mL煤油，在高速下振荡2min，然后在室温下静置24h，测定乳化值。乳化值=乳化层的高度/总高度X 100%。步骤(4)中所用的表面张力的测定的具体方法是取20mL左右的发酵上清液于小烧杯中，用BZY-3B表面张力仪测定表面张力。本专利技术还提供了枯草芽孢杆菌723的培养方法将枯草芽孢杆菌723接种于活化培养基中培养以得到种子培养液，然后将种子培养液接种于发酵培养基中以得到脂肽类表面活性剂。具体地，挑一环经斜面培养12_24h的枯草芽孢杆菌723接种于活化培养基中， 30-37°C, 100-200rpm下培养12_24h以得到种子培养液。然后按2%_4%的接种量将种子培养液接种于发酵培养基中，30-37°C，100-200rpm下培养24-48h以得到脂肽类表面活性剂。本专利技术的有益效果在于 枯草芽孢杆菌UaciZZ心subtiLis) 723的CMC值仅为25mg/L，远远低于一般化学表面活性剂的CMC值。枯草芽孢杆菌723发酵24h后生物表面活性剂的产量即可以达到15g/L。因此，枯草芽孢杆菌723具有产量高、发酵周期短的优点。枯草芽孢杆菌723可以利用食用油、甘油、石蜡、煤油、正己烷、废弃油来生产生物表面活性剂，因此不但可以应用于石油开采工业，而且可以用来分解环境中的废弃油以避免污染，具有多种功效。实施例I :菌株筛选 初筛 取Ig胜利油田的土样放入50mL的生理盐水中，在30-37°C，100_200rpm条件下振荡3_5h。静置10-20min，取上清液2_4mL放入50mL富集培养基中，30_37°C，100-200rpm下培养12-24h。将获得的富集培养液2-3mL，梯度稀释成10_5_10_9，涂布于血平板，30_37°C下培养12-2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株枯草芽孢杆菌,？其分类命名为枯草芽孢杆菌（BaciLLus？subtiLis）723,？其保藏编号为：CCTCC？NO：M？2012285。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄和，朱玲燕，韩毓旺，徐晴，卢圣国，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：