不含白蛋白的肉毒杆菌毒素制剂制造技术

本发明专利技术涉及经稳定而不使用任何蛋白质性质的赋形剂的肉毒杆菌毒素制剂。本发明专利技术还涉及制备和使用此类肉毒杆菌毒素制剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】不含白蛋白的肉毒杆菌毒素制剂本申请要求对2009年6月25日提交的美国临时专利申请第61/220,433号(将该申请的内容通过引用全文并入本文)的优先权。专利
本专利技术涉及包含肉毒杆菌毒素(botulinumtoxin)的药物制剂。具体地，本专利技术涉及通过非蛋白质性质的赋形剂稳定的肉毒杆菌毒素制剂。专利技术背景肉毒杆菌毒素(也称为肉毒毒素或肉毒杆菌神经毒素)是由肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)产生的神经毒素。肉毒杆菌毒素通过阻止乙酰胆碱穿过神经肌肉接头(neuromuscularjunction)的突触传递或释放来产生肌肉麻痹。肉毒杆菌毒素的作用基本上阻断了通常可引起肌肉痉挛或收缩的信号，从而导致麻痹。存在8种天然存在的血清学相关的肉毒杆菌毒素，已知其中的7种引起麻痹(即，肉毒杆菌神经毒素血清型A、B、C、D、E、F和G)。这些血清型的每一种通过利用类型特异性抗体的中和作用来区别。然而，对于所有7种活性肉毒杆菌毒素，肉毒杆菌毒素蛋白分子的分子量为约150kD。当由肉毒梭菌释放时，肉毒杆菌毒素存在于包含150kD肉毒杆菌毒素蛋白分子和结合的非毒素蛋白的复合物中。复合物的总大小可发生变化。例如，肉毒杆菌毒素A型复合物可由肉毒梭菌产生为900kD、500kD和300kD复合物。肉毒杆菌毒素B型和C型复合物只产生为700kD或500kD复合物。肉毒杆菌毒素D型复合物产生为300kD和500kD复合物。肉毒杆菌毒素E型和F型复合物只产生为300kD复合物。所述复合物据认为包含非毒素血凝素蛋白以及非毒素和非毒性非血凝素蛋白。这两种非毒素蛋白(其和肉毒杆菌毒素分子一起构成相关神经毒素复合物)据认为为肉毒杆菌毒素分子提供抗变性的稳定性和当毒素被摄入时提供抗消化性酸的保护作用。虽然肉毒杆菌毒素是已知对于人最致命的天然存在的毒素，但其已广泛地用作治疗剂和美容剂。例如，在1986年，使用A型肉毒杆菌毒素来治疗眉间区域的运动相关的皱纹的可行性首次得到Schantz和Scott，inLewisGE(Ed)BiomedicalAspectsofBotulinum，N.Y.：AcademicPress，143-150(1981)的证实。A型肉毒杆菌毒素用于治疗皱纹的用途公布于1992年(Schantz和Scott，inLewisG.E.(Ed)BiomedicalAspectsofBotulinum，N.Y.：AcademicPress，143-150(1981))，并且到了1994年，脸上其他运动相关的皱纹可用A型肉毒杆菌毒素来治疗(Scott，Ophthalmol，87：1044-1049(1980))。多年来，对美容肉毒杆菌毒素治疗的需要稳定地增加，在美国目前肉毒杆菌毒素的年销售额每年超过10亿美元。制造商业肉毒杆菌毒素制剂的一个挑战是稳定肉毒杆菌毒素。像许多蛋白质一样，肉毒杆菌毒素可被许多环境因素例如热、碱性条件、机械剪切力或与反应表面或物质的接触降解或变性。此外，稳定商业制剂中的肉毒杆菌毒素的困难因毒素的极端毒性而加大，所述极端毒性只允许极少量毒素用于治疗目的。如果肉毒杆菌毒素制剂未被适当地稳定，那么极少量的肉毒杆菌毒素可能经历不想要的反应和/或粘附至其贮存容器的内表面，从而导致不可接受的肉毒杆菌毒素或活性的损失。通常以冻干的(即冷冻干燥的)或真空干燥的粉剂分配商业肉毒杆菌毒素制剂，以防止降解和使肉毒杆菌毒素制剂更易于操作和降低运输费用。在使用之前，用液体载体例如水或盐水溶液重建肉毒杆菌毒素粉末制剂。例如，一种商购可得的肉毒杆菌毒素制剂在商标BOTOX(Allergan，Inc.，Irvine，Calif.)下出售。以贮存在单独的小瓶中的真空干燥的粉剂分配BOTOX制剂，每一个小瓶装有约100个单位(U)的肉毒梭菌毒素A型复合物、0.5毫克人血清白蛋白和0.9毫克氯化钠。已报导，必须在-10℃或更低的温度下贮存商业肉毒杆菌毒素制剂以在一年贮存期限内维持标记的效力。在肉毒杆菌毒素的商业制剂中，通常加入人血清白蛋白作为填充载体(bulkcarrier)和稳定剂。通常，白蛋白可通过一个或多个下列机制稳定治疗性蛋白质(例如，肉毒杆菌毒素)：(1)减少治疗性蛋白质至贮存或分配容器的内表面的粘附，所述容器包括玻璃器具、贮存瓶以及用于注射药物组合物的注射器；和(2)减少治疗性蛋白质的变性，特别是在重建以制备治疗性蛋白质的溶液后。人血清白蛋白具有呈现最小的免疫原性的额外有利方面，这减少了人患者产生抗肉毒杆菌毒素制剂的抗体的可能性。虽然人血清白蛋白已被采用为商业肉毒杆菌毒素制剂的稳定剂，但仍然存在与该方法相关的重大问题。一个严重的问题是，白蛋白来源于血液，从而易于携带血液传播的病原体或感染剂。例如，人血清白蛋白可携带人免疫缺陷病毒(HIV)。白蛋白也可携带朊病毒，其为负责引起称为克-雅二氏病(Creutzfeldt-Jacobdisease)的神经退行性障碍的蛋白质性质的感染剂。朊病毒在脑中引起蛋白质的错误折叠，从而通常在症状开始发作后数月的时间跨度内导致痴呆、记忆丧失、说话障碍、运动协调的丧失以及死亡。用非蛋白质性质的稳定剂替代人血清白蛋白的尝试通常遭遇困难。非蛋白质性质的聚合物可对肉毒杆菌毒素起反应或可包含降解和/或使肉毒杆菌毒素变性的反应性杂质。例如，一些研究已使用泊洛沙姆作为肉毒杆菌毒素的非蛋白质性质的稳定化合物。然而，这些研究报导，重建的泊洛沙姆稳定的肉毒杆菌毒素制剂显示低肉毒杆菌毒素活性，这表明泊洛沙姆赋形剂不能适当地稳定肉毒杆菌毒素，和/或诱导了不想要的降解反应发生。因此，高度期望具有稳定的、但无蛋白质性质的赋形剂，特别是无任何基于动物蛋白质的赋形剂的肉毒杆菌毒素制剂。此外，高度期望具有本身不与肉毒杆菌毒素反应的非蛋白质性质的稳定赋形剂。专利技术概述在一个方面，本专利技术涉及通过非蛋白质性质的赋形剂稳定的肉毒杆菌毒素制剂。具体地，在优选实施方案中，本专利技术涉及经稳定的但无白蛋白或其他动物蛋白质来源的赋形剂的肉毒杆菌毒素制剂。本专利技术的一个方面提供包含肉毒杆菌毒素、非还原性二糖或非还原性三糖、非离子型表面活性剂和能够使pH维持在4.5至6.5之间的生理上相容的缓冲剂的液体组合物。液体组合物中的非还原性糖的浓度在10％至40％(w/v)的范围内并且非离子型表面活性剂的浓度在0.005％至0.5％(w/v)的范围内。本专利技术的另一个方面通过干燥上述液体组合物而提供粉末组合物。本专利技术还提供了用于稳定肉毒杆菌毒素制剂的方法。所述方法包括组合肉毒杆菌毒素、非还原性二糖或非还原性三糖、非离子型表面活性剂和能够使pH维持在4.5至6.5的生理上相容的缓冲剂成分以形成液体组合物。液体组合物中的非还原性糖的浓度在10％至40％(w/v)的范围内并且非离子型表面活性剂的浓度在0.005％至0.5％(w/v)的范围内。任选地，所述方法还包括干燥液体组合物以产生稳定的粉末组合物。本专利技术的另一个方面提供包含肉毒杆菌毒素、非还原性二糖或非还原性三糖、非离子型表面活性剂、填充剂(bulkingagent)和生理上相容的缓冲剂的液体组合物。在这些实施方案中，非还原性二糖成分的浓度在0.50至3.0％(w/v)的范围内，填充剂的浓度在1.5％至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.06.25 US 61/220,4331.一种液体组合物，其包含肉毒杆菌毒素；非还原性二糖或非还原性三糖；非离子型表面活性剂；和生理上相容的缓冲剂；其中所述非还原性二糖或非还原性三糖的量为10％至40％(w/v)；其中所述非离子型表面活性剂的量为0.005％至0.5％(w/v)；和其中所述液体组合物的pH在4.5至6.5的范围内；并且其中在以排除晶体形成的方式干燥所述的液体组合物时，所述非还原性二糖或非还原性三糖的量和所述非离子型表面活性剂的量提供了不定形的、非结晶的固体组合物。2.权利要求1的液体组合物，其中用于制备所述组合物的所述非还原性二糖或非还原性三糖选自海藻糖二水合物、无水海藻糖、蔗糖及其组合。3.权利要求2的液体组合物，其中用于制备所述组合物的所述非离子型表面活性剂选自聚山梨醇酯、山梨聚糖酯、TritonX-100、NP-40、泊洛沙姆及其组合。4.权利要求3的液体组合物，其中使用选自下列的盐来制备所述缓冲剂：柠檬酸的盐、醋酸的盐、琥珀酸的盐、酒石酸的盐、马来酸的盐和组氨酸的盐。5.权利要求4的液体组合物，其还包含带正电荷的主链，所述主链具有与之连接的带正电荷的效应基团。6.权利要求5的液体组合物，其中具有带正电荷的效应基团的带正电荷的主链是具有选自下列的氨基酸序列的肽：RKKRRQRRR-G-(K)15-G-RKKRRQRRR、RGRDDRRQRRR-G-(K)15-G-RGRDDRRQRRR和YGRKKRRQRRR-G-(K)15-G-YGRKKRRQRRR。7.权利要求6的液体组合物，其中所述肉毒杆菌毒素以治疗量存在。8.权利要求7的液体组合物，其中所述肉毒杆菌毒素是肉毒杆菌毒素血清型A型。9.一种通过以避免晶体形成的方式干燥权利要求8的液体组合物而制备的固体组合物。10.一种试剂盒，其包括根据权利要求9的固体组合物，和注射器。11.用于稳定肉毒杆菌毒素制剂的方法，所述方法包括组合肉毒杆菌毒素、非还原性二糖或非还原性三糖、非离子型表面活性剂和生理上相容的缓冲剂以形成液体组合物；其中所述非还原性二糖或非还原性三糖的量为10％至40％(w/v)；其中所述非离子型表面活性剂的量为0.005％至0.5％(w/v)；以及其中所述液体组合物的pH在4.5至6.5的范围内；并且其中在以排除晶体形成的方式干燥所述的液体组合物时，所述非还原性二糖或非还原性三糖的量和所述非离子型表面活性剂的量提供了不定形的、非结晶的固体组合物。12.权利要求11的方法，其还包括通过冷冻干燥来干燥所述液体组合物的步骤。13.一种液体组合物，其包含肉毒杆菌毒素；以10％至40％(w/v)的量存在的非还原性糖；以0.005％至0.5％(w/v)的量存在的非离子型表面活性剂；具有选自下列的氨基酸序列的带正电荷的肽：RKKRRQRRR-G-(K)15-G-RKKRRQRRR、RGRDDRRQRRR-G-(K)15-G-RGRDDRRQRRR和YGRKKRRQRRR-G-(K)15-G-YGRKKRRQRRR；和生理上相容的缓冲剂；其中所述组合物的pH在4.5至6.5的范围内；并且其中在以排除晶体形成的方式干燥所述的液体组合物时，所述非还原性糖的量和所述非离子型表面活性剂的量提供了不定形的、非结晶的固体组合物。14.权利要求13的液体组合物，其中所述带正电荷的肽的氨基酸序列为RKKRRQRRR-G-(K)15-G-RKKRRQRRR。15.权利要求13的液体组合物，其中所述带正电荷的肽的氨基酸序列为RGRDDRRQRRR-G-(K)15-G-RGRDDRRQRRR。16.权利要求13的液体组合物，其中所述带正电荷的肽的氨基酸为YGRKKRRQRRR-G-(K)15-G-YGRKKRRQRRR。17.权利要求14、15或16的液体组合物，其中所述非还原性糖选自海藻糖二水合物、无水海藻糖、蔗糖和棉子糖。18.权利要求17的液体组合物，其中所述非离子型表面活性剂选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、Span20、Span60、Span65和Span80。19.权利要求18的液体组合物，其中所述生理上相容的缓冲剂选自柠檬酸、醋酸、琥珀酸、酒石酸、马来酸、组氨酸、柠檬酸盐/醋酸盐、柠檬酸盐/组氨酸、柠檬酸盐/酒石酸盐、马来酸盐/组氨酸、琥珀酸盐/组氨酸和磷酸盐缓冲剂。20.权利要求19的液体组合物，其中所述肉毒杆菌毒素是血清型A的150kD肉毒杆菌毒素蛋白。21.权利要求8的液体组合物，其还包括胶凝剂、粘度调节剂或其组合。22.权利要求20的液体组合物，其还包括胶凝剂、粘度调节剂或其组合。23.权利要求21的液体组合物，其中所述胶凝剂是基于纤维素的胶凝剂，和/或，所述粘度调节剂选自聚乙二醇、泊洛沙姆、聚丙烯酸、聚酰胺或植物胶中的一种或多种。24.权利要求22的液体组合物，其中所述胶凝剂是基于纤维素的胶凝剂，和/或，所述粘度调节剂选自聚乙二醇、泊洛沙姆、聚丙烯酸、聚酰胺或植物胶中的一种或多种。25.权利要求9的固体组合物，其中所述液体组合物的干燥是通过冷冻干燥进行的。26.权利要求8或权利要求20的液体组合物，其中所述组合物不包含动物来源的蛋白质性质的赋形剂。27.权利要求9或权利要求25的固体组合物，其中所述组合物不包含动物来源的蛋白质性质的赋形剂。28.权利要求10的试剂盒，其中所述固体组合物不包含动物来源的蛋白质性质的赋形剂。29.权利要求11的方法，其中所述组合步骤在未添加动物来源的蛋白质性质的赋形剂的情况下进行。30.一种通过以避免晶体形成的方式干燥权利要求13的液体组合物而制备的固体组合物。31.权利要求30的固体组合物，其中液体组合物的干燥是通过冷冻干燥进行的。32.权利要求30或权利要求31的固体组合物，其中干燥的组合物包含治疗量的肉毒杆菌毒素。33.权利要求32的固体组合物，其中所述固体组合物不包含动物来源的蛋白质性质的赋形剂。34.权利要求26的液...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·A·汤普森，C·L·鲁伊格，J·M·沃，
申请(专利权)人：雷文斯治疗公司，
类型：
国别省市：