黄麻链霉菌NF0919菌株代谢产物在防治草莓病害上的应用制造技术

一种黄麻链霉菌NF0919菌株代谢产物在防治草莓病害上的应用。本发明专利技术为黄麻链霉菌NF0919菌株（其在CGMCC的保藏编号为CGMCCNo.3968，菌种专利号为ZL201010236886.1）发酵液中活性代谢产物的提取方法，及代谢产物能有效防治由植物病原真菌围小丛壳菌（Glomerellacingulata）侵染引发的草莓炭疽病、灰葡萄孢菌（Botrytiscinerea）侵染引发的草莓灰霉病、尖孢镰刀菌草莓专化型（FusarumoxysporiumSchl.f.sp.fragariaeWinksetWillams）侵染引发的草莓枯病和由大丽花轮枝孢菌（Verticilliumalboatrum和Verticilliumdahliae）侵染引发的草莓黄萎病等多种草莓病害。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种微生物及用途,更具体地说涉及一种黄麻链霉菌iStreptomycescorchorusii )NF0919菌株代谢产物及其在防治草莓病害上应用，属于生物农药

技术介绍
由植物病原真菌围小丛壳菌(67o 6 ri 77a侵染引发的草莓炭疽病、灰葡萄孢菌cinerea)侵染引发的草莓灰霉病、尖孢镰刀菌草莓专化型oxysporium Schl. f. sp. fragariae Winks et Wiliams)侵染引发的草莓枯病和由大_花轮枝抱菌(alboatrum 和 Verticillium t/aA7ia<9)侵染引发的草莓黄萎病是草莓上主要的真菌病害。草莓病害防治效果的高低，将直接影响到作物产量和种植户的收益。草莓病害的防治当前主要通过化学防治来防控。主要用以下化学药剂防治卩密菌酯(azoxystrobin)、醚菌酯(kresoxim-methyl)、苯醚甲环唑(difenoconazole)、烯月亏菌酯(enestroburin)、卩定酰菌胺(boscalid)、多菌灵(carbendazim)、卩比唑醚菌酯(pyraclostrobin)和咪鲜胺(prochloraz)等。长期以来，由于多频次、多剂量施用化学药齐U，造成炭疽病菌对常用化学药剂都产生了不同程度的抗(耐)药性，生产上屡屡出现防治失败的事例。目前成功用于防治病害的生物农药专用制剂还没有。文献已报道生物防治控制病害的生防菌属(种)主要有(I)木霉菌属真菌(7>icAoofe/maspp.)中的绿色木霉(Tri choderma viri de)和哈茨木霉(Tri choderma harzianum ) ； (2)芽抱杆菌属细菌(.Bacillus spp.)中的枯草芽抱杆菌{Bacillus subtilis、、多粘芽抱杆菌{BacilluspoIymyxa )和巨大芽抱杆菌 iBacillus megaterium') ； (3)假单胞菌属细菌{Pseudomonasspp.)中的突光假单胞细菌fluorescens)等。因草莓是即采即食的应时鲜果，且无果皮防护，所以对药剂的选择有很大的局限性。因此对草莓病害的生物防治在生产上具有一定迫切需求。本专利技术提供的可同时兼治草莓各类病害的颉颃细菌黄麻链霉菌NF0919菌株，在现有技术中没有提及和公开。
技术实现思路
提供黄麻链霉菌iStreptomyces corchorusii) NF0919菌株发酵液中产物的提取方法，及提取物在防治草莓炭疽病、草莓灰霉病、草莓枯萎病和草莓黄萎病上的应用。本专利技术是通过以下技术方案实现的 本专利技术中提供用的黄麻链霉菌NF0919菌株的菌株特征，见专利ZL 201010236886. I。分类命名为黄麻链霉菌(拉丁文学名为Streptomyces corchorusii ),已于2010年7月8日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为=CGMCC No. 3968。本专利技术的黄麻链霉菌NF0919菌株发酵液中代谢产物的提取方法，包括以下步骤(A)菌株的活化与一级种子培养液的培养 将保存的NF0919菌株的斜面在高氏一号培养基上活化，30°C培养10 d，挑取I cm2大小的菌块接种于50 mL—级种子培养液中(250 mL三角瓶装培养液50 mL)，置于170 rpm摇床上30°C振荡培养44 48 h，其中所述的50 mL—级种子培养液的成分为可溶性淀粉3%，葡萄糖2%，酵母粉1%，蛋白胨l%，NaCl O. 5%, K2HPO4 O. 2%，可溶性淀粉、葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、NaCl和K2HPO4含量的单位比例为W/V; (B)二级种子培养液的培养 将步骤(A)所得一级种子培养液按5% (V/V)的接种量接入50 mL 二级种子培养液中(250 mL三角瓶装培养液50 mL),170 rpm,30 °C摇床上培养48 - 52 h，其中所述的5%的单位比例为V/V ;所述的50 mL 二级种子培养液的成分(W/V):马铃薯淀粉8. 5%，棉籽蛋白2.2%, CaCO3 O. 1%，K2HPO4 O. 05%, MgSO4 O. 05%,淀粉酶 O. 01%,马铃薯淀粉、棉籽蛋白、CaCO3、K2HPO4^MgSO4和淀粉酶含量的单位比例为W/V ； (C)发酵培养液的培养 将步骤(B)所得二级种子培养液按5% (V/V)的接种量接种于装有160 L发酵培养液的容积为200 L的发酵罐中，其中所述的5%的单位比例为V/V，设置发酵参数为溶氧100%，消泡剂I. 6 L，搅拌速度为360 rpm,发酵温度为36 °C，发酵时间为72 h，pH 6. 8 7. 2，所述的发酵培养液的成分为(W/V):马铃薯淀粉8. 5%，棉籽蛋白2. 6%，K2HPO4 O. 05%, NaClO. 2%, MgSO4 O. 05%, CaCO3 O. 1%，ρΗ7· 2-7. 4，马铃薯淀粉、棉籽蛋白、K2HPO4、NaCl、MgSO4和CaCO3含量的单位比例为W/V ;所述的消泡剂为XP-100F系列发酵用有机硅消泡剂； (D)NF0919菌株发酵液中代谢产物分离方法 把步骤(C)所得发酵液在10000 rpm离心5 min得上清液，用浓盐酸调节pH至2. 0，出现沉淀，再次离心，收集沉淀物，用乙酸乙酯萃取3次，35°C真空干燥得提取物。本专利技术的有益效果是 本专利技术提供黄麻链霉菌NF0919菌株发酵液中代谢产物的提取方法，并证明其提取物可同时防治草莓果实、叶柄和叶片上的多种病害。大田防治结果表明，该菌株代谢产物对草莓炭疽病、草莓灰霉病、草莓枯萎病和草莓黄萎病均有很好的防治效果。具体实施方式实施例本专利技术中提供用的黄麻链霉菌NF0919菌株的菌株特征，见专利ZL201010236886. I。本专利技术黄麻链霉菌NF0919菌株发酵液中产物的提取方法，包括以下步骤 (A)菌株的活化与一级种子培养液的培养 将保存的NF0919菌株的斜面在高氏一号培养基上活化，30°C培养10 d，挑取I cm2大小的菌块接种于50 mL—级种子培养液中(250 mL三角瓶装培养液50 mL)，置于170 rpm摇床上30°C振荡培养44 48 h，其中所述的50 mL—级种子培养液的成分为可溶性淀粉3%，葡萄糖2%，酵母粉1%，蛋白胨l%，NaCl O. 5%, K2HPO4 O. 2%，可溶性淀粉、葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、NaCl和K2HPO4含量的单位比例为W/V;(B)二级种子培养液的培养 将步骤(A)所得一级种子培养液按5% (V/V)的接种量接入50 mL 二级种子培养液中(250 mL三角瓶装培养液50 mL),170 rpm,30 °C摇床上培养48 - 52 h，其中所述的5%的单位比例为V/V ;所述的50 mL 二级种子培养液的成分(W/V):马铃薯淀粉8. 5%，棉籽蛋白·2.2%, CaCO3 O. 1%，K2HPO4 O. 05%, MgSO4 O. 05%,淀粉酶 O. 01%,马铃薯淀粉、棉籽蛋白、CaCO本文档来自技高网...

【技术保护点】
黄麻链霉菌（Streptomyces？corchorusii）NF0919菌株（该菌种特性见专利ZL？201010236886.1）发酵液中代谢产物的提取方法。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨敬辉，陈宏州，张文文，庄义庆，
申请(专利权)人：江苏丘陵地区镇江农业科学研究所，
类型：发明
国别省市：