本发明专利技术涉及一种乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料及其制备方法和应用，所述的乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料是选用壳聚糖作为载体，甘草次酸和乳糖酸作为配体，通过N-酰化反应，合成的甘草次酸和乳糖酸共修饰的壳聚糖材料。本发明专利技术还提供一种乳糖酸化甘草次酸壳聚糖/5-氟尿嘧啶载药纳米粒子。本发明专利技术优点在于：首次合成双配体共修饰的壳聚糖材料，并制成纳米粒子，进行靶向研究；乳糖酸化甘草次酸壳聚糖制备成纳米粒子后，比GA-CTS和CTS具有更强的肝靶向性和肝癌细胞受体介导的主动靶向性，能显著减少在其他脏器的分布，提高了肝癌靶向的可靠性，可以作为一种在医学临床中对肝癌的靶向治疗具有广阔应用前景的载体材料。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及高分子药物载体领域，具体地说，是ー种乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料及其制备方法和应用。
技术介绍
目前，国内外关于肝癌的研究主要集中在单配体修饰的聚合物制备载药(或基因)纳米粒子方面。如，以去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)介导的肝靶向纳米粒子的研究，显示具有趋肝性，并且对肝癌也有一定的抑制作用，以甘草次酸受体介导的肝主动靶向也有同样的效果。然而这种单个配体修饰的纳米粒子在进行受体一配体相互作用时易受到许多病理及生理条件的变化而变化，从而导致受体介导作用的部分失效，影响靶向治疗的效果。如对于患肝脏疾病的病人，ASGP-R的密度和活性会降低，这是由于血清抑制剂的存在， 而导致肝癌细胞的结合量降低大约95%，因此在病理条件下，单纯ASGP-R介导的肝主动靶向将会变得不那么有效。另外，并不是所有的靶向受体都仅仅在靶细胞上过量表达，这会导致单配体修饰纳米粒子与靶向受体结合的不足，Negishi等发现大鼠肝脏中含有最高的甘草次酸受体，而肾脏中也含有少量的甘草次酸受体。因此单个配体修饰的载体材料的低的转运率、有限的被受体特异性识别的能力等，仍是现阶段急需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供ー种乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料。本专利技术的第二个的目的是，提供ー种乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料的制备方法。本专利技术的第三个目的是，提供ー种乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料的制备方法的应用。本专利技术的第四个目的是，提供ー种乳糖酸化甘草次酸壳聚糖/5-氟尿嘧啶载药纳米粒子。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是ー种乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料，所述的乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料是选用壳聚糖作为载体，甘草次酸和乳糖酸作为配体，通过N-酰化反应，合成的甘草次酸和乳糖酸共修饰的壳聚糖材料。所述的乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料的制备方法包括以下步骤 a、首先称取甘草次酸溶于DMF溶液中，并加入EDOHCl和NHS进行活化，在磁力搅拌的条件下，将活化的甘草次酸溶液加入到壳聚糖溶液中，并在室温下反应，用丙酮静置沉淀后，再用こ醇、こ醚洗涤沉淀，室温真空干燥即得到甘草次酸壳聚糖材料； b、将乳糖酸溶于TEMED*HC1溶液中，并加入EDOHCl和NHS对乳糖酸的羧基进行活化，同时将GA-CTS溶液与被活化的乳糖酸溶液在磁力搅拌的条件下室温反应，溶液置于透析袋中用蒸馏水透析，冷冻干燥得到乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料。所述的步骤a中甘草次酸壳聚糖合成的条件为EDOHCl与GA的摩尔比为O. 6-2. 4:1，EDOHCl 与 NHS 的摩尔比为 O. 4-2. 5:1，GA 与 CTS 的摩尔比为 O. 8-1. 5:1，反应时间为1-3 do所述的步骤b为将乳糖酸溶于TEMED*HC1溶液中，并加入EDOHCl和NHS对乳糖酸的羧基进行活化，同时将GA-CTS溶液与被活化的乳糖酸溶液在磁力搅拌的条件下室温反应中72小时后，溶液置于透析袋中用蒸馏水透析4天，每隔24小时更换一次透析液，冷冻干燥得到乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是ー种乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料的制备方法，所述的乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料的制备方法包括以下步骤 a、首先称取甘草次酸溶于DMF溶液中，并加入EDOHCl和NHS进行活化，在磁力搅拌的条件下，将活化的甘草次酸溶液加入到壳聚糖溶液中，并在室温下反应，用丙酮静置沉淀后，再用こ醇、こ醚洗涤沉淀，室温真空干燥即得到甘草次酸壳聚糖材料； b、将乳糖酸溶于TEMED*HC1溶液中，并加入EDOHCl和NHS对乳糖酸的羧基进行活化，同时将GA-CTS溶液与被活化的乳糖酸溶液在磁力搅拌的条件下室温反应，溶液置于透析袋中用蒸馏水透析，冷冻干燥得到乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料。所述的步骤a中甘草次酸壳聚糖合成的条件为EDOHCl与GA的摩尔比为O. 6-2. 4:1，EDOHCl 与 NHS 的摩尔比为 O. 4-2. 5:1，GA 与 CTS 的摩尔比为 O. 8-1. 5:1，反应时间为1-3 do所述的步骤b为将乳糖酸溶于TEMED*HC1溶液中，并加入EDOHCl和NHS对乳糖酸的羧基进行活化，同时将GA-CTS溶液与被活化的乳糖酸溶液在磁力搅拌的条件下室温反应中72小时后，溶液置于透析袋中用蒸馏水透析4天，每隔24小时更换一次透析液，冷冻干燥得到乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料。为实现上述第三个目的，本专利技术采取的技术方案是所述的乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料作为载体材料在制备治疗肝靶向治疗药物中的应用，所述的乳糖酸化甘草次酸壳聚糖的浓度为O. 005-0. 05 mg/ml O为实现上述第四个目的，本专利技术采取的技术方案是ー种乳糖酸化甘草次酸壳聚糖/5-氟尿喃唳载药纳米粒子，所述的载药纳米粒子是由权利要求1-4任一所述的乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料，通过离子交联的方法，制成的载5-氟尿嘧啶的载药纳米粒子。所述的载药纳米粒子的制备方法称取乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料溶于醋酸溶液中，并用NaOH调节其pH值后，加入5-氟尿嘧啶于上述溶液中溶解，然后逐滴滴加TPP溶液于上述均匀混合的溶液中，室温低速磁力搅拌进行离子交联反应，并自发形成纳米粒子；将得到的纳米粒子悬浮液以10000转/分离心30分钟，然后用大量去离子水洗残留物，分散后再离心洗涤，然后重新分散在去离子水中，冷冻干燥，保存备用。本专利技术优点在干 1、首次合成双配体(甘草次酸和乳糖酸)共修饰的壳聚糖材料，并制成纳米粒子，进行靶向研究，为新型肝癌靶向给药系统的设计与制备提供理论基础和科学依据，并丰富了肝靶向给药系统的内容，为临床肝癌的靶向治疗奠定实验基础； 2、本专利技术的乳糖酸化甘草次酸壳聚糖制备成纳米粒子后，比GA-CTS和CTS具有更强的肝靶向性和肝癌细胞受体介导的主动靶向性，能显著減少在其他脏器的分布，提高了肝癌靶向的可靠性，可以作为ー种在医学临床中对肝癌的靶向治疗具有广阔应用前景的载体材料。附图说明图I.乳糖酸化甘草次酸壳聚糖的N-酰化反应机理。图2. GA-CTS在EDOHC1/NHS交联剂介导下的反应机理。图3. GCGA的合成路线及机理。图4. GA-CTS, CTS和GA的红外光谱图。图5.通过正交实验设计法合成的九组GA-CTS的红外光谱图。图6. GCGA, GA-CTS和LA的红外光谱图。 图7. GCGA和CTS的核磁共振氢谱图，其中，★是乳糖酸特征峰， 是壳聚糖的特征峰，▲是甘草次酸的特征峰。图8.不同浓度下CTS和GCGA材料对L929细胞由MTT得到的OD值。图9. FITC标记的CTS、GA-CTS和GCGA纳米粒子的扫描电镜照片。图10. FITC标记的CTS、GA-CTS和GCGA纳米粒子的粒径分布。图11.三种纳米粒子与BEL-7402细胞共孵育2 h的流式细胞仪分析結果，a，无纳米粒子阴性对照组；b，GCGA纳米粒子组；c，GA-CTS纳米粒子组；d，CTS纳米粒子组，GCGA纳米粒子组与GA-CTS有显著显著性差异(P〈O. 05)，与CTS组有高度显著性差异(P〈0.01)。图12.三种纳米粒子与BEL-7402细胞共孵育4 h的激光共聚焦显微镜照片。图13. GCGA纳米粒子分别与BEL本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料，其特征在于，所述的乳糖酸化甘草次酸壳聚糖材料是选用壳聚糖作为载体，甘草次酸和乳糖酸作为配体，通过N？酰化反应，合成的甘草次酸和乳糖酸共修饰的壳聚糖材料。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：程明荣，何秉，洪洋，黄陶承，顾勇，
申请(专利权)人：复旦大学附属上海市第五人民医院，
类型：发明
国别省市：
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