一种醋酸去氨加压素的制备方法技术

技术编号:8187475 阅读:303 留言:0更新日期:2013-01-09 23:22
一种醋酸去氨加压素的制备方法,属于多肽类药物生产技术领域,具体制备方法为:将RinkAMResin和Fmoc-Gly-OH进行反应,生成Fmoc-Gly-AMResin,然后依次偶合Fmoc-D-Arg-OH等基团生成Fmoc-Mpa(trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-Cys(trt)-Pro-D-Arg-Gly-AMResin,脱Fmoc后裂解、氧化得到1-6成环的Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH3,最后纯化、真空冻干得到醋酸去氨加压素。本方法收率高、成本低、环境友好、有利于规模化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多肽类药物生产
,尤其是涉及一种制备醋酸去氨加压素的方法。
技术介绍
醋酸去氨加压素,药物别名弥凝(Minirin),英文名称Desmopressin Acetate。是一种泌尿系统用药,主要用于中枢性尿崩症、夜间遗尿及血友病等,也用于肾尿液浓缩功能的测试,也可用作术后止血。 目前国内醋酸去氨加压素的制备方法主要由液相法和固相法。液相法产生较多废液,反应时间长,难纯化、后处理繁琐等问题,但在合适的浓度氧化成环效率极高,畐1J 产物较小。固相法合成 Mpa (trt)-Tyr (tBu)-Phe-Gln (trt)-Asn (trt)_Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AM Resin虽然高效简单,分子间成环肽产率极低,同时要求氨基树脂取代率较小等缺点。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题,本专利技术人提供了。本方法具有高收率、低成本、环境友好、有利于规模化生产等优点。本专利技术的技术方案如下 ,具体制备方法如下(1)制备Fmoc-Gly-AM Resin Rink AM Resin用二氯甲烷浸泡至充分溶胀,用N,N-二甲基甲酰胺洗涤,然后用25%哌啶/N,N- 二甲基甲酰胺脱Fmoc保护基,洗涤后得到A产物; 取Fmoc-Gly-OH,I-羟基苯并三唑,N, N’ - 二异丙基碳二亚胺加入到无水N,N- 二甲基甲酰胺中,在(T5°C活化后加入A产物,在25 35°C反应2 4 h后洗涤,得到Fmoc-Gly-AMResin ;(2)制备Mpa(trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AMResin 将步骤(I)所得Fmoc-Gly-AM Resin加入固相合成管中,用25%哌啶/N,N-二甲基甲酰胺脱Fmoc-Gly-AM Resin上的Fmoc保护基,,洗涤后得到B产物; 取Fmoc-D-Arg-OH,1_羟基苯并三唑,N,N’ - 二异丙基碳二亚胺加入到无水N,N-二甲基甲酰胺中,在(T5°C活化后加入B产物,在25 35°C反应广3 h后洗涤,得到Fmoc-D-Arg-Gly-AM Resin ; 重复上述过程,依次偶联 Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys (trt) -OH、Fmoc-Asn (trt) - OH、Fmoc-Gln (trt) -OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr (tBu) -OH、Mpa (trt) -OH,全部偶联完毕后,得到Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly -AM Resin ;(3 )裂解 Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AM Resin 将三氟乙酸与苯甲硫醚按照质量比94:6混合配制成裂解液,取裂解液,加入步骤(2)制备好的 Mpa(trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-Cys(trt)-Pro-D-Arg- Gly-AMResin中,裂解初始温度为0 5°C,保持O. 5 lh,逐渐升到2(T30°C,保持2h,得到Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-CyS-Pro-D-Arg-Gly-NH3 ; (4)氧化成环 将步骤(3)Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D_Arg-Gly-NH3 加入适量纯化水中,配制成2g/L溶液,加入氧化剂双氧水lml/L氧化液,反应I. 5^2. Oh,得到Mpa-Cys成环的Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH3 ;最后经过高效液相纯化和真空冻干得到高质量醋酸去氨加压素。本专利技术有益的技术效果在于 本专利技术操作简单,原料投料少,成本低,纯度高等优点,采用固-液结合的合成方法,具有固相合成法和和液相合成法高效,简单,同时也避免了二者的缺点相比于液相法减少了大量废液,同时没有固相环化带来的聚合副产物,极大地提高了纯度和收率。具体实施例方式下面对本专利技术进行具体描述。步骤I :制备 Fmoc-Gly-AM Resin。称取Rink AM Resin (一种常见试剂,具体为一种带连接臂的氨基树脂)树脂10 g加入固相合成管中,用50 mL 二氯甲烷浸泡30 min,使树脂充分溶胀,依次用70 mL N,N-二甲基甲酰胺洗涤2次,依次用70 mL 25%哌啶/N,N- 二甲基甲酰胺在30°C脱Fmoc保护基2次,第一次5 min、第二次15 min,中间用70 mL无水N, N-二甲基甲酰胺洗漆一次。然后依次用70 mL无水N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺各洗涤2、1、1、2次。称取Fmoc-Gly-OH (N-荷甲氧轻基保护甘氨酸)4 g, I-轻基苯并三唑I. 5 g,N,N’- 二异丙基碳二亚胺1.8 mL加入到10 mL无水N,N-二甲基甲酰胺,在(T5°C活化5min。加入上述固相合成管在30°C反应3 h,反应终点以茚三酮法检测为准。依次用70 mL无水N, N- 二甲基甲酰胺洗漆2次,每次不少于I min,得到Fmoc-Gly-AM Resin。步骤 2 Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AM Resin的制备。将5 g Fmoc-Gly-AM Resin加入固相合成管中,依次用70 mL 25%哌啶/N,N-二甲基甲酰胺在30°C脱Fmoc-Gly-AM Resin上的Fmoc保护基2次,第一次5 min、第二次15 min,中间用70 mL无水N, N-二甲基甲酰胺洗漆一次,不少于I min。依次用70 mL无水N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺各洗涤2、1、1、2次,每次不少于lmin。称取Fmoc-D-Arg-OH 3. 5 g, I-轻基苯并三唑1.3 g, N, N’ - 二异丙基碳二亚胺1.5 mL加入到10 mL无水N,N-二甲基甲酰胺,在(T5°C活化5 min,加入上述固相合成管在30°C反应2 h,反应终点以茚三酮法检测为准。依次用70 mL无水N,N-二甲基甲酰胺洗涤2 次,每次不少于 I min,得 Fmoc- D-Arg-Gly-AM Resin。重复上述过程,依次偶联Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys (trt) -ΟΗλ Fmoc-Asn (trt) - OH、Fmoc-Gln (trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr (tBu)-OH、Mpa (trt)-OH。全部偶联完毕后,得到 Mpa (trt) -Ty r (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly -AM Resin0步骤(3):裂解Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Ph本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种醋酸去氨加压素的制备方法,其特征在于具体制备方法如下:(1)制备Fmoc?Gly?AM?Resin:Rink?AM?Resin用二氯甲烷浸泡至充分溶胀,用N,N?二甲基甲酰胺洗涤,然后用25%哌啶/N,N?二甲基甲酰胺脱Fmoc保护基,洗涤后得到A产物;取Fmoc?Gly?OH,1?羟基苯并三唑,N,N’?二异丙基碳二亚胺加入到无水N,N?二甲基甲酰胺中,在0~5℃活化后加入A产物,在25~35℃反应2~4?h后洗涤,得到Fmoc?Gly?AM?Resin;(2)制备Mpa(trt)?Tyr(tBu)?Phe?Gln(trt)?Asn(trt)?Cys(trt)?Pro?D?Arg?Gly?AM?Resin:将步骤(1)所得Fmoc?Gly?AM?Resin加入固相合成管中,用25%哌啶/N,N?二甲基甲酰胺脱Fmoc?Gly?AM?Resin上的Fmoc保护基,,洗涤后得到B产物;取Fmoc?D?Arg?OH,1?羟基苯并三唑,N,N’?二异丙基碳二亚胺加入到无水N,N?二甲基甲酰胺中,在0~5℃活化后加入B产物,在25~35℃反应1~3?h后洗涤,得到Fmoc??D?Arg?Gly?AM?Resin;重复上述过程,依次偶联Fmoc?Pro?OH、Fmoc?Cys(trt)?OH、Fmoc?Asn(trt)??OH、Fmoc?Gln(trt)?OH、Fmoc?Phe?OH、Fmoc?Tyr(tBu)?OH、Mpa(trt)?OH,全部偶联完毕后,得到Mpa(trt)?Tyr(tBu)?Phe?Gln(trt)?Asn(trt)?Cys(trt)?Pro?D??Arg?Gly?AM?Resin;(3)裂解Mpa(trt)?Tyr(tBu)?Phe?Gln(trt)?Asn(trt)?Cys(trt)?Pro?D?Arg?Gly?AM?Resin:将三氟乙酸与苯甲硫醚按照质量比94:6混合配制成裂解液,取裂解液,加入步骤(2)制备好的Mpa(trt)?Tyr(tBu)?Phe?Gln(trt)?Asn(trt)?Cys(trt)?Pro?D??Arg?Gly?AM?Resin中,裂解初始温度为0~5℃,保持0.5~1h,逐渐升到20~30℃,保持1~2h,得到Mpa?Tyr?Phe?Gln?Asn?Cys?Pro?D?Arg?Gly?NH3;(4)氧化成环:将步骤(3)制备得到的Mpa?Tyr?Phe?Gln?Asn?Cys?Pro?D?Arg?Gly?NH3加入适量纯化水中,配制成2g/L溶液,加入氧化剂双氧水1ml/L氧化液,反应1.5~2.0h,得到Mpa?Cys成环的Mpa?Tyr?Phe?Gln?Asn?Cys?Pro?D?Arg?Gly?NH3;最后经过高效液相纯化和真空冻干得到高质量醋酸去氨加压素。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:杨毅跃康国伟姚程成蒙相锋鲁尧
申请(专利权)人:无锡市凯利药业有限公司
类型:发明
国别省市:

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