D组禽轮状病毒制造技术

本发明专利技术涉及新鉴定的禽轮状病毒D?VP6核酸序列和其应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
D组禽轮状病毒
技术介绍
轮状病毒属于病毒的呼肠孤病毒科(Reoviridae)，并能影响鸟和其他生物体的胃肠系统和呼吸道。呼肠孤病毒科含有不同属，包含正呼肠病毒(orthoreovirus)(禽和哺乳动物呼肠孤病毒)，环状病毒(orbivirus)(蓝舌病毒(Bluetongue virus))和轮状病毒(rotavirus) (A-G 组)。轮状病毒是非包被、双壳RNA病毒。其基因组有11片段双链RNA组成，编码6个结构和6个非结构蛋白。6个病毒蛋白(VP)形成病毒粒子的三层二十四面蛋白衣壳。所述结构蛋白称为VP1、VP2、VP3、VP4、VP6和VP7。VP6形成衣壳的体。这是高度抗原性并能用于鉴定轮状病毒种类。除了 VP，有6个非结构蛋白(NSP)，只有在被轮状病毒感染的细胞中产生。这些称为NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5和NSP6。已知禽轮状病毒(ARV) ，其在世界范围内经常影响家禽群，并特别对鸡群。受到感染的鸡的症状是腹泻，随后体重增加缓慢，症状称为吸收不良症状(MAS)或生长与发育障碍症状(RSS)。在一个领域研究，检查有RSS的8个群的6-18日龄的肉鸡以检测哪些ARV是RSS发病机理的主要原因。在所述研究中，有RSS的群的34只小鸡中的32只检测到ARV。有RSS的群中鉴定了四组ARV :AVR A、D、F和G。所述研究的结果显示D组的ARV显示在RSS发病机理中的主要作用。RSS对小鸡饲养者的经济学影响严重。会损失所有被感染的小鸡。因此，非常需要早期检测和预防ARV感染。目前，经常使用RNA-PAGE对基于11个基因组RNA片段的迁移作为ARV检测和鉴定的基础。D组ARV的RNA-PAGE概况特征是5:2:2:2 。所述RNA迁移的特征概况能用于鉴定D组ARV。也能用ELISA、透射电镜和逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)检测ARV。只有PAGE能区别不同ARV组，但其灵敏度低。目前，只有使用PCR方法检测A组轮状病毒。在优先权日不存在D组ARV的核酸序列数据。因此迫切需要开发检测其他轮状病毒的替代方法，特别是D组轮状病毒。具体来说，迫切需要开发快速和灵敏检测D组ARV的方法。
技术实现思路
本专利技术涉及新D组禽轮状病毒(ARVD)的鉴定并提供在兽医学和药学领域的数个机遇。本专利技术提供 编码VP6多肽和片段及其变体的核酸，以及与编码VP6多肽的核酸互补的核酸序列。·由上述核酸编码的VP6多肽序列、和片段、变体和其抗原性片段。·在高度严谨条件下与编码VP6多肽的核酸杂交的核酸分子，包含引物和探针。·与VP6多肽、片段、变体和/或其抗原性决定簇结合的抗体。·诊断试剂和试剂盒，所述试剂和试剂盒包含在生物样品中鉴定ARVD有无的试剂和能用于诊断生物样品中ARVD感染或鉴定ARVD病毒有无的方法。·治疗或防御ARVD感染的疫苗。·证实蛋，特别是用于疫苗生产的胚胎蛋，没有ARVD的方法。核酸专利技术提供包含SEQ ID NO: I或SEQ ID N0:2核酸序列的核酸。专利技术也提供包含与SEQ ID NO: I或SEQ ID NO: 2至少i %—致的核酸序列的核酸。i值选自75%、80%、85%、90%、 95%、96%、97%、98%、99%、99. 5%,99. 9%。序列鉴定应该沿核酸序列全长计算。SEQ ID NO: 2提供整个ARVD VP6编码序列。SEQ ID NO: I提供包含如SEQ ID NO2所述的VP6编码序列片段的核酸，并还包含3’非翻译序列的核酸。优选地，所述核酸编码ARVD VP6多肽。本专利技术的核酸可以编码如SEQ IDN0:3或SEQ ID NO:4 所述的 ARVD VP6 多肽。专利技术也包含如SEQ ID N0:1和/或2所述的核酸序列片段。因此，所述专利技术提供包含SEQ ID N0:1和/或2的至少η个连续核酸片段的核酸，其中，η是8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、50 或更多。核酸可以有 η+χ 核酸的总长度，其中 χ=0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、1 O、11、12、13、14、15、16、17、I 8、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、50或更多。在一个实施方式中，η值是24。在另一实施方式中，专利技术提供包含SEQ ID Ν0:1或SEQ ID Ν0:2的反义互补序列的核酸。本专利技术也提供包含至少与如SEQ ID NO: I或SEQ ID NO:2所述核酸序列的反义互补序列的一致性在 75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99· 5%,99. 9% 或更高的核酸序列的核酸。本专利技术也提供包含衍生自SEQ ID Ν0:1和/或2的反义互补的至少η个连续核酸片段的核酸，其中，η 是 8、9、10、11、12、1 3、14、15、16、17、I 8、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、50或更多。所述核酸可以有η+χ核酸的总长度，其中χ=0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、50 或更多。在一个实施方式中，η值是10。在另一个实施方式中，专利技术提供在严谨条件下与包含SEQ ID NO: I和/或SEQ IDNO: 2的核酸杂交的核酸。实例性严谨杂交条件是65。C 10分钟的O. I X SSC、0. 1% SDS’并用 2XSSC、0. 1% SDS 洗涤 10 分钟，然后再用 O. I X SSC, O. 1% SDS 10 分钟。本专利技术提供式5’-Χ-Υ-Ζ_3'表示的核酸，式中-Χ-是由X个核苷酸组成的核苷酸序列；-Ζ-是由ζ个核苷酸组成的核苷酸序列；-Υ-是由(a) SEQ ID NO :1或2的片段，或(b) (a)的互补物组成的核苷酸序列;和所述核酸5’-X-Y-Z-3'既不是(i)SEQ ID N0:1或2的片段，也不是(ii) (i)的互补物。例如，-X-和/或-Z-部分可包含启动子序列(或其互补物)。专利技术也提供包含专利技术的核酸和片段和也包含进一步核酸、修饰核酸或一个或多个可检测标记的核酸。所述核酸可以用作包含LCR、PCR、RT-PCR、实时PCR、实时RT-PCR、qPCR、qRT-PCR、Northern印迹和Southern印迹的方法的引物和/或探针。示例性标记包含放射性同位素、荧光分子、生物素、碱基对错配、发夹结构等。很多合适荧光团已知并能使用，包括但不限于荧光素，特别是5-FAM (也称为5-羧基荧光素；也称为螺环(异苯并呋喃-I (3H)，9’_ (9H)毒蕈碱)-5-羧酸，3’，6’-二羟基-3-氧代-6-羧基突光素)；丽丝胺(Iissamine);藻红蛋白；罗丹明(帕金埃尔默公司鲸鱼(Cetus)) ;Cy2、Cy3、Cy3. 5、Cy5、Cy5. 5、Cy7 ；FluorX (安玛西亚公司(Amersham))和其他标记，如在参考文献中所述。整合所述标记到核酸分子在分子生物学领域技术人员的技术范围内。在一个特定实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·罗斯，
申请(专利权)人：诺华有限公司，
类型：
国别省市：