本发明专利技术属海洋微藻养殖领域，涉及一种牟氏角毛藻培养基配方及白塑料桶充气培养方法。牟氏角毛藻是一种小型海洋硅藻，富含多不饱和脂肪酸、蛋白质等，是对虾、鲍鱼等海珍品的优质育苗饵料。目前牟氏角毛藻生产上多采用f/2培养基配方进行培养，存在问题是营养物质不均衡，不全面，生长缓慢、倍增时间长、产量低。实验显示，用尿素取代硝酸盐作氮源并补充NaHCO3和植物生长刺激素、VB12、VB1后，营养更加全面、均衡，牟氏角毛藻产量能提高87％。另外，现生产中多采用水泥池或玻璃缸桶进行培养，有很多缺点：易污染、洗刷困难、操作不便、易划破。本研究表明，用白塑料桶充气培养角毛藻，操作灵活，不易污染，洗刷方便，不易划破，成本低，产量高，可大规模推广。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于海洋微藻养殖领域，尤其涉及一种。
技术介绍
牟氏角毛藻(Chaetoceros muelleri)隶属娃藻门，中心纲，盒形藻目，角毛藻科，角毛藻属，是一种小型海洋浮游硅藻，细胞小，壁薄，多数单个生活，在10 39°C环境温度下均能生长繁殖，最适温度25 30°C，是一种沿岸性半咸水种类。与其它常用单胞藻如球等鞭金藻(Isochrysis galbana Parke)、湛江叉鞭金藻(Dicrszhan jiangensis)和扁藻(Platymonas)相比,牟氏角毛藻藻含有大量脂肪酸、蛋白质等营养物质,繁殖快且耐高温。多不饱和脂肪酸含量高，在良好培养条件下，其二十碳五烯酸(EPA)占总脂肪酸含量10.2%，是对虾、海参、文蛤、牡蛎、鲍鱼、魁钳、海胆等海珍品优质育苗饵料，在医药、保健品行业也有重要应用价值。海水中无机碳的存在形式以HC03_为主(90% )，而游离的CO2不足I %。过去人们一直认为，水体中游离CO2是藻类利用外源无机碳的唯一形式。张学成的工作表明，螺旋藻培养基中添加50 100mmol/L NaHCO3时，不仅可以满足螺旋藻生长的需要，而且有助于保持藻体生长的PH值。林惠民认为，NaHCO3在培养基中的作用之一是作为碳源。我的研究结果表明，牟氏角毛藻可以利用HC03_作为碳源。另外，氮磷营养盐对牟氏角毛藻的生长影响极显著，氮的影响高于磷。传统上人们习惯利用硝酸钠或硝酸钾作为培养牟氏角毛藻氮源，但我的实验显示，用尿素作氮源牟氏角毛藻生长更快，产量更高。尿素对不同微藻生长影响机理较无机氮复杂。已经证实许多藻含有尿素酶，在酶的催化下，尿素分解出氨被微藻利用。可能是酶功能的差异造成了各种微藻利用氮或磷的能力差异。目前牟氏角毛藻生产上多采用m培养基配方进行培养。牟氏角毛藻规模化培养存在的主要问题是营养物质不均衡，不全面，藻细胞生长缓慢、倍增时间长、细胞密度低(室外培养密度最高仅为2X IO6ceIlAiL酶，产量低。合适的培养基是实现牟氏角毛藻高密度培养的重要因素之一。以前使用的培养基没有加入碳酸氢钠和维生素及微量元素，但大量实验表明，牟氏角毛藻除了能利用空气中游离的CO2，还能有效地利用培养液中的HCO3-作为碳源。添加NaHCO3不仅缩短了牟氏角毛藻的倍增时间，而且延长了藻的生长时间。我的实验表明，添加500mg的NaHCO3和5国际单位九二 O植物生长刺激素(即赤霉素)，5Xl(T4mg VB12,0. Img VB1后，营养更加全面、均衡,能大大提高生长速度,牟氏角毛藻产量能提高87%。贝类人工苗种技术的不断改进和工厂化种苗技术的提高，要求技术人员在生产中能够稳定提供大量单胞藻作为饵料，为解决这个问题，国内外藻类培养工作者做了很多研究，有封闭立柱式、薄膜袋式、开放水泥池式等多种培养方法。生产上现在一般采用玻瓶一级保种，小池或小型薄膜袋或玻璃缸桶二级扩种和大池三级培养，存在很多缺点易污染、成本高、洗刷困难、操作不便、容易划破等。我用聚乙烯白色塑料桶并充入空气和CO2混合气体进行牟氏角毛藻二级扩种，并取得了理想效果。CO2来源广泛，利用CO2促进微藻细胞的生长，具有良好的经济价值。我的研究证明，将CO2和空气形成的混合气体(Vas Vsn =1 15)充入藻液，可明显促进牟氏角毛藻的生长，生产量大大高于不充气和只充入纯空气或纯CO2的平行对照。CO2对微藻的光合作用及固碳效率的影响机理，已有广泛的研究。用白塑料桶充气培养方法进行牟氏角毛藻二级扩种，大小合适，易于搬动，操作灵活，不易污染，不忌直射光，可封闭式充气，洗刷方便，可以重复使用，不易损坏，不易划破，透光性好，成本低廉,生长快,产量高。
技术实现思路
为了克服目前技术的不足，本专利技术提供了一种，具体技术方案如下一种牟氏角毛藻培养基，配方如下co(nh2)2(即尿素)21. 5mg, KH2P048mg, FeC6H5O7 · 5H20(即柠檬酸铁)0. 5mg, Na2SiO3 · 9H20 8mg, NaHCO3500mg，九二 0植物生长刺激素(即赤霉素)5国际单位，VB125X10_4mg，VB1 O. lmg，海水IOOOmL0一种牟氏角毛藻培养基，其特征在于该牟氏角毛藻培养基配方如下CO(NH2)2 (尿素)21. 5mg，KH2P048mg，FeC6H5O7 · 5H20(柠檬酸铁)0.5mg，Na2SiO3 · 9H208mg, NaHCO3 500mg,九二 O植物生长刺激素(即赤霉素)5国际单位，VB125X 10_4mg, VB1O. lmg, VB6 O. lmg,朽1 檬酸铁铵 lmg, ZnS04500mg,体积比 I % 的钥酸水溶液15ml,硫酸猛5mg,磷酸二氢钾IOmg,氯化钾3mg,海水lOOOmL。一种牟氏角毛藻培养方法，其特征在于包括如下步骤采用白塑料桶充气培养方法；白色塑料桶为市场售常用聚乙烯塑料桶，圆筒形，直径30cm，高60cm，加满水约6. 5X 104ml，消毒海水洗净，再用蒸馏水润洗3遍，桶口处用酒精擦洗消毒备用；白色塑料桶置于室外水泥地上，顶部有透明玻璃钢瓦遮阴，四周开放式，将白桶放置于离地O. 5m的水泥板上，自然光照射，最佳温度25-30°C，最佳光照强度10000-150001x,或人工光源光照，60 100瓦电灯或日光灯，需1500 3000勒克斯/厘米2;培养用海水采用漂白液(次氯酸钠)氧化法消毒；漂白液氧化法消毒方法是Im3海水中加入漂白液200 300mL，使海水中有效氯含量达到10 20mg/L，充气8 12h后，用硫代硫酸钠中和余氯；硫代硫酸钠量由余氯的多少来确定，直到滴入淀粉碘化钾液不变色为止。按照所述的牟氏角毛藻培养基配方添加培养基，藻种要选择生长良好、生活力旺盛、色泽鲜艳、无沉淀及无明显附壁现象的藻种，镜检无其它杂藻、原生动物等；充气培养，接种密度为30X 104cell/mL，充入空气和二氧化碳混合气体，体积比比例为 V二氧化碳=15 1，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；夜间停止充气，白天行间隔充气，即充气I小时，停I小时，重复进行；用透明薄膜盖于桶上部，然后用橡皮筋拉紧，进行封闭式培养；经过5-7天的培养，密度达300X 104-400X 104cell/mL即可采收或转入下一级培养。优选地，充气培养时充入空气和二氧化碳、臭氧混合气体，体积比比例为Vsn : V二氧化碳·臭氧=15 · I · I。有益效果我的实验表明，用尿素代替硝酸钠或硝酸钾作为培养牟氏角毛藻的氮源，并补充500mg的NaHCO3和5国际单位九二 O植物生长刺激素(即赤霉素)，5 X 10_4mg VB12,0. ImgVB1后，营养更加全面、均衡，缩短了牟氏角毛藻的倍增时间，延长了藻的生长时间，能大大提高生长速度，牟氏角毛藻产量能提高87%。用白桶并充入CO2混合气体方法进行牟氏角毛藻二级扩种，大小合适，易于搬动，操作灵活，不易污染，不忌直射光，可封闭式充气，洗刷方便，可以重复使用，不易损坏，不易划破，透光性好，成本低廉，生长快，产量高。具体实施例方式培养基配制方法I)柠檬酸铁较难溶解，可加少量自来水在火炉上微热至80-90°C，并不断搅拌至全部融化；2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种牟氏角毛藻培养基，其特征在于该牟氏角毛藻培养基配方如下：CO(NH2)2(尿素)21.5mg，KH2PO48mg，FeC6H5O7·5H2O(柠檬酸铁)0.5mg，Na2SiO3·9H2O8mg，NaHCO3？500mg，九二0植物生长刺激素(即赤霉素)5国际单位，VB125×10？4mg，VB10.1mg，海水1000mL。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王培磊，
申请(专利权)人：王培磊，
类型：发明
国别省市：
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