增强的多重FISH制造技术

本发明专利技术的目标是能与靶标核酸序列杂交的核酸分子的组合。为了克服FISH实验的重复性问题和减少实验时间，联用发夹探针和毗邻所述发夹探针靶位点退火的辅助探针。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】增强的多重FISH 说明本专利技术涉及荧光原位杂交的发夹环的多重应用和实验的重复性、特异性和速度的增强。本专利技术的第一个方面是能与靶标核酸序列杂交的核酸分子的组合，其中所述组合包含(a)包含能形成发夹环(如分子信标)的序列的至少一种核酸，和(b)第二核酸分子、第三核酸分子和可选地至少一个称为辅助核酸的其他核酸分子。临床样品中致病生物体的快速鉴定越来越重要，用以降低发病率和致死率以及治疗感染疾病的成本。在应用DNA-信标技术进行原位杂交应用方面的突破(I)使FISH技术能与PCR系统和微阵列技术在速度方面竞争并在成本效率上超越。本专利技术的目标是找到解决FISH已经经历的重复性问题并且进一步增加实验时间的速度。为了增加实验的速度，需要分析实验动力学(2)。在PCR实验中，所有参与杂交的成分在均一溶液中并且采用二级动力学。微阵列采用准一级反应速率，因为捕获的寡核苷酸固定在固相而分析物在溶液中(3)。FISH中，互换不同作用(B卩，分析物固定在固相，而寡核苷酸在溶液中)，然而，从动力学方面看，所述构型相似。当探针附着在固相时，测量的速率常比溶液中所测低多至三个数量级(3)。因此，不能期望原位杂交动力学产生与均一溶液相同的数量级。本领域现有的杂交实验的动力学属性能概括如下

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.03.04 EP 10155508.41.ー种能与靶标核酸序列杂交的核酸分子的组合，其中所述组合包含 (a)至少ー个第一核酸分子，包含 (i)能与靶标序列杂交的序列， ( )能形成茎干的两段互补序列，和 (iii)发光基团和淬灭基团，如果核酸形成茎环结构，淬灭基团使荧光基团淬灭；如果寡核苷酸与靶标序列杂交，荧光基团能在激发后发射发光信号， (b)第二核酸分子，第三核酸分子和可选的至少ー个其他核酸分子， 其中，所述第二核酸分子、第三核酸分子和可选的至少ー个其他核酸分子与靶标序列在位于第一核酸杂交序列5’或/和3’的序列杂交。2.如权利要求I所述的组合，其特征在于，所述核酸适用于原位杂交，特别是FISH。3.如权利要求I或2所述的组合，其特征在于，所述靶标核酸序列选自DNA序列和RNA序列，并且其中所述靶标核酸序列优选rRNA序列或mRNA序列。4.如权利要求1-3中任ー项所述的组合，其特征在于，所述各核酸分子与靶标序列的杂交位点彼此直接相邻，或其中至少两个核酸分子与靶标序列的杂交位点相隔至少ー个核苷 酸。5.如前述权利要求中任ー项所述的组合，其特征在干，至少ー个与所述靶标序列杂交的核酸分子序列长16-26核苷酸。6.如前述权利要求任ー项所述的组合，其特征在干，所述组合的各核酸分子与靶标序列独立杂交 (i)AG 范围为-15-25kcal/mo...

【专利技术属性】
技术研发人员：I·P·斯里普顿，W·斯坦·弗雷赫冯，
申请(专利权)人：米阿科姆诊断有限公司，
类型：
国别省市：