本发明专利技术公开了奶山羊泌乳量相关microRNA-431基因的单核苷酸多态性及其检测和应用，其基因单核苷酸多态性包括：在如SEQ?ID?No.1所示的奶山羊microRNA-431基因序列中，其第217位为T或C的单核苷酸多态性。RFLP多态性与泌乳量关联分析证实：MluI多态位点与产奶量之间有显著相关，基因型为TT的第三胎产奶量和体长显著高于基因型为TC和CC个体的。该方法是一种在DNA水平上筛查和检测与奶山羊泌乳性状密切相关的分子遗传标记，以用于奶山羊的辅助选择和分子育种，对提高奶山羊的产奶量具有重要的作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于奶山羊选育
，涉及奶山羊泌乳量相关microRNA-431基因单核苷酸多态性及其检测和其作为辅助选择标记在奶山羊育种中的应用。
技术介绍
羊奶是保健营养品，作为人类的三大乳源之一，营养价值高，具有润心肺、利大肠、补肾益精、滋阴养胃、治消渴、食疗的功能，在西方国家被作为疗效食品。羊奶在国际营养界被誉为“奶中之王”。适用于婴儿、青少年、孕妇、成年人和老人(陈炜，2009)。近年来，随着我国人民生活水平的提高，人们对奶制品的需求也越来越多，在对牛奶需求量逐渐增加的 同时，人们也了解到了山羊奶的营养价值，对山羊奶的需求也在渐渐的增加，但是由于山羊奶有膻味和奶山羊的产奶量较低；在我国优秀奶山羊品种种源不足和种群遗传品质较差也是制约我国奶山羊业发展的重要因素。应用分子标记的现代育种技术是加快良种选育和提高种群遗传品质，从而增加奶山羊的产奶量和改善乳品质的先进的有效的方法。应用分子标记育种首先是在DNA水平上筛查和检测与奶山羊泌乳性状密切相关的遗传标记；其次是建立其基因多态性的快速检测方法；然后实现遗传标记辅助选择和实现早期诊断选择。近年来，人们发展了许多用于探寻分子遗传标记的方法，最常见的有单链构象多态技术(SSCP)、PCR-RFLP和直接测序技术等，但SSCP操作繁琐、耗时长，结果易造成误判；普通的PCR-RFLP方法要求待测多态性位点是某一特定酶切位点，应用范围局限；直接测序技术成本较高。MicroRNA是一种21_25个核苷酸(nt)的单链小分子RNA，是一类转录后水平的调控因子，并不直接作用于目的基因而是作用于目的基因转录出来的mRNA从而调节目的基因的表达。其参与了细胞的分裂增殖、分化、生物发育及代谢等许多生物学过程，并在疾病发生发展过程中发挥了巨大作用，己有实验证据表明一些miciORNAs在乳腺上皮细胞的分化增殖过程中发挥重要的调控作用。Wang等(Wang and Li. , 2007)应用microRNA芯片已分析出在小鼠的怀孕和哺乳期microRNA-431具有下调作用，但microRNA-431在奶山羊上的研究目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供一种奶山羊泌乳量相关microRNA-431基因的单核苷酸多态性及其检测和应用，该基因的单核苷酸多态性其检测方便，可以作为辅助选择标记在奶山羊育种中应用，加快良种选育速度和提高种群品质。本专利技术是通过以下技术方案来实现一种奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性，其基因单核苷酸多态性包括在如SEQ ID No. I所示的奶山羊microRNA-431基因序列中，其第217位为T或C的单核苷酸多态性。一种奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性的检测方法，包括以下步骤I)以包含microRNA-431基因的待测奶山羊全基因组DNA为模板，以弓丨物对P为引物，PCR扩增奶山羊microRNA-431基因；所述的引物对P为正向引物 cccttctcaggtggttccc ；反向引物 gcagatgacgcccaggtt ；2)用限制性内切酶MluI消化PCR扩增产物，再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定奶山羊microRNA-431基因序列中第217位的单核苷酸多态性 TT基因型表现为355bp条带；TC基因型表现为355，334和21bp条带；CC基因型表现为334和2 Ibp条带。所述的PCR扩增的反应程序为94°C预变性5min ;94°C变性30s，62°C退火30s，72°C延伸30s, 35个循环；72°C延伸IOmin0所述琼脂糖凝胶电泳为3. 0%的琼脂糖凝胶电泳。所述将奶山羊microRNA-431基因第217位SNP位点的TT基因型作为有效DNA标记。所述的有效DNA标记为TT基因型作为奶山羊泌乳性状的标记辅助选择育种中提高奶山羊第三胎泌乳量的分子遗传标记。所述的奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性在奶山羊标记辅助选择中的应用。所述奶山羊microRNA-431基因第217位的单核苷酸多态性中的TT基因型作为奶山羊泌乳性状的标记辅助选择育种中提高奶山羊第三胎泌乳量的分子遗传标记。所述的奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性在区分绒山羊与奶山羊的分子遗传标记中的应用。所述的奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性在区分绒山羊与奶山羊的分子遗传标记中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果本专利技术提供的奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性，利用DNA池测序的方法筛查奶山羊microRNA-431基因的多态性位点，结果表明该基因第217位为T或C的碱基多态性，而且进一步表明该基因与奶山羊的泌乳量相关，多态性可作为辅助选择标记在奶山羊育种中应用，从而加快良种选育速度和提高种群品质。本专利技术提供的奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性的检测方法，针对其多态性的特性，设计了特定的PCR弓I物扩增，用限制性内切酶MluI消化PCR扩增产物，再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定SNP多态性，能够简单、快速、成本低、精确的检测其单核苷酸的多态性。本专利技术提供的奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性，对2个奶山羊品种和2个绒山羊样品的上述SNP进行了基因分型和基因频率分析，结果表明这个位点检测能够成为绒山羊与奶山羊的区分特征；同时也对MluI多态位点与莎能奶山羊各胎年泌乳量之间进行了关联分析。方差分析结果表明，MluI多态位点能够成为提高奶山羊第二胎和第三胎泌乳量的分子标记。本专利技术提供的奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性，提供了一种用简单、快速、低成本、精确度高的，便于推广应用的在DNA水平上筛查和检测与奶山羊泌乳性状密切相关的遗传标记，可用于奶山羊的辅助选择和分子育种。附图说明图I是本专利技术的技术流程示意图；图2是本专利技术中PCR克隆筛查到的奶山羊microRNA-431基因序列表SEQ ID No. I上游第217位T-C突变的SNP多态性测序结果图； 图3是本专利技术用来检测SNP多态性的PCR引物设计和扩增产物中SNP位点突变的示意图，其中方框中表示突变位点、带下划线为内切酶识别序列，小写“ac”是引入的错配碱基;图4是本专利技术多态性检测的PCR产物琼脂糖凝胶电泳图谱，其中琼脂糖凝胶浓度为 I. 0% ；图5是本专利技术中奶山羊microRNA-431基因序列表SEQ ID No. I上游第217位的MIuI-RFLP的三种基因型电泳结果，琼脂糖凝胶浓度为3. 0% ;其中，TT基因型表现为355bp条带，TC基因型表现为355，334和21bp条带，CC基因型表现为334和21bp条带；由于21bp较小，故在琼脂糖电泳中看不到，但不影响判别基因型。具体实施例方式本专利技术首先根据microRNA-431基因的保守序列设计引物，分别以4种山羊品种的基因组DNA池为模板，进行PCR扩增，并对PCR产物纯化，测序。然后，进行测序图的分析和序列的比对筛查出SNP位点；其次，对待测群体进行多态位点的MIuI-RFLP检测；最后，根据在群体中检测到的基因型，进行群本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种奶山羊microRNA？431基因的单核苷酸多态性，其特征在于，其基因单核苷酸多态性包括：在如SEQ？ID？No.1所示的奶山羊microRNA？431基因序列中，其第217位为T或C的单核苷酸多态性。
【技术特征摘要】
1.一种奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性，其特征在于，其基因单核苷酸多态性包括 在如SEQ ID No. I所示的奶山羊microRNA-431基因序列中，其第217位为T或C的单核苷酸多态性。2.一种奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤 O以包含microRNA-431基因的待测奶山羊全基因组DNA为模板，以引物对P为引物，PCR扩增奶山羊microRNA-431基因； 所述的引物对P为 正向引物cccttctcaggtggttccc ； 反向引物gcagatgacgcccaggtt ； 2)用限制性内切酶MluI消化PCR扩增产物，再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定奶山羊microRNA-431基因序列中第217位的单核苷酸多态性 TT基因型表现为355bp条带；TC基因型表现为355，334和21bp条带；CC基因型表现为334和21bp条带。3.如权利要求2所述的奶山羊microRNA-431基因的单核苷酸多态性的检测方法，其特征在于，所述的PCR扩增的反应程序为94°C预变性5min ;94°...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈宏，郭文娇，李转见，蓝贤勇，孙雨佳，薛璟，潘虹，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：
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