一种从中药虎杖中制备白藜芦醇的工艺制造技术

本发明专利技术提供了一种从中药虎杖中制备白藜芦醇的工艺，它包括将干燥虎杖药材粉碎过筛，加水浸润后加入复合酶，在35℃～60℃下恒温发酵24～72h；然后经乙醇提取，洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥而得白藜芦醇。本发明专利技术的工艺过程安全、经济、操作简便，并且易于实现从含有虎杖苷和/或白藜芦醇的植物和/或提取物中规模化生产制备高纯度的白藜芦醇。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物有效成分提取领域，具体是一种从中药虎杖中制备白藜芦醇的工艺。
技术介绍
白藜芦酉享(又名苗三酹),化学名为3，4, 5,-三轻基二苯乙烯(3，4, 5,-trihydrolystiIbene),是含有芪类结构的非黄酮多 )类化合物。白藜芦醇是植物在受到应激时自身合成的一种抗毒素，具有重要的顺利活性，在抑制癌细胞、降低血脂、预防心血管疾病、抗氧化、延缓衰老等方面有较显著的作用，被喻为继紫杉醇之后又一新的绿色抗癌药物。主要存在于虎杖、葡萄、花生等植物中，研究表明，虎杖中白藜芦醇的含量最高。 查新发现，关于“从虎杖中提取白藜芦醇”方面的文献和专利已有报道。中国专利“从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的工艺”(ZL201110125337)公开的是使用有机溶剂萃取，氧化铝柱层析分离纯化白藜芦醇，中国专利“一种从虎杖中提取纯化白藜芦醇的新方法”(ZL200510019788. I)公开的是采用酸催化水解，大孔吸附树脂分离纯化白藜芦醇，中国专利“虎杖苷和白藜芦醇的新制备方法”(ZL200310112538. 3)公开的是采用聚酰胺层析法分离纯化白藜芦醇，中国专利“从虎杖中提取纯化98%以上的白藜芦醇的工艺”(ZL200810032067. 8)是将虎杖先提取后发酵，采用专用的絮凝剂絮凝沉淀，氧化铝层析分离纯化白藜芦醇，目前采用碱水洗脱白藜芦醇的文献未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种操作简单，成本低，快速制备白藜芦醇的方法，其工艺步骤如下I)将虎杖药材干燥并粉碎，得虎杖粉；2)加水浸润虎杖粉，在浸润后的虎杖粉中加入复合酶，恒温发酵，使白藜芦醇的类似物虎杖苷转化成白藜芦醇；3)用乙醇回流提取；4)将提取液合并、过滤，浓缩；加入纯净水沉淀，离心，取上清液；5)上清液上大孔吸附树脂，开始用纯净水洗脱至无色，然后用碱水洗脱，收集碱水洗脱液，调pH=2. 5-3. 5，离心，取上清液；6)上清液继续上大孔吸附树脂，第一次用纯净水洗脱至无色，第二次用10%乙醇洗脱，弃去,第三次用50% 95%乙醇洗脱，收集洗脱液；7)将收集的洗脱液浓缩干燥。本专利技术的优选方案为I)将虎杖药材干燥并粉碎，得虎杖粉；2)加水浸润虎杖粉，在浸润后的虎杖粉中加入复合酶，置于温度控制在35°C 60°C的容器内，恒温发酵24 72小时，使白藜芦醇的类似物虎杖苷转化成白藜芦醇；3)加入虎杖药材重量6 12倍的40-95%乙醇，回流提取；4)将提取液合并、过滤，浓缩回收乙醇至无醇味，加入I 3倍水沉淀，离心，取上清液；5)上清液上大孔吸附树脂，开始用纯净水洗脱至无色，然后用O. 4% 1%的碱水洗脱，收集碱水洗脱液，用稀盐酸调pH=2. 5-3. 5，离心，取上清液；6)上清液继续上大孔吸附树脂，第一次用纯净水洗脱至无色，第二次用10% 35%乙醇洗脱2 3BV，弃去，第三次用50% 95%乙醇洗脱，收集3 6BV洗脱液；7)将收集洗脱液浓缩干燥。本专利技术提供的更优选技术方案为 (I)干燥虎杖药材粉碎到通过80目筛> 90% ；·(2)加水浸润虎杖粉；在复合酶中加入水，复合酶与水的比例为I (g) =150-250(ml)，调pH=3-5，然后加入到浸润后的虎杖粉中，置于温度控制在50°C 60°C的容器内，恒温发酵50 60小时，使白藜芦醇的类似物虎杖苷转化成白藜芦醇；(3)加入虎杖药材重量8 12倍的80%乙醇，回流提取两次，每次I 2小时；(4)将两次虎杖提取液合并、过滤，浓缩回收乙醇至基本无醇味，加入I 3倍水沉淀，离心，取上清液；(5)上清液上大孔吸附树脂，开始用纯净水洗脱至基本无色，然后用O. 4% O. 5%的碱水洗脱，收集碱水洗脱液，用O. 5mol/L稀盐酸调pH=3，离心，取上清液；(6)上清液继续上大孔吸附树脂，第一次用纯净水洗脱至基本无色，第二次用20% 25%乙醇洗脱2 3BV，弃去，第三次用50% 60%乙醇洗脱，收集3 6BV洗脱液；(7)将收集的洗脱液浓缩干燥。本专利技术提供的更优选技术方案中，步骤(2)中的复合酶与水的用量比为复合酶水=1 (g) :200 (ml), PH值调至5 ;复合酶的加入量与虎杖粉的重量比为复合酶虎杖粉=1-3:80-100。最优选复合酶的加入量与虎杖粉的重量比为复合酶虎杖粉=1:100。本专利技术中所述的碱优选强碱。如氢氧化钠、氢氧化钾等。本专利技术具有以下优点I、文献只有碱水提取，本专利技术首次采用碱水洗脱，而且在一定的浓度下，目标成分针对性比较强，杂质干扰少。2、树脂可以是AB_8、D101等对白藜芦醇有吸附的常规树脂，使用范围比较广；3、整个工艺周期短，设备简单，成本低，除了乙醇，没有其它有机试剂。4、产品纯度可达65%以上。附图说明图I是产品的高效液相色谱图。具体实施例方式图I是产品的高效液相色谱图实施例I :将虎杖药材干燥粉碎成虎杖粉，过80目筛，取虎杖粉100g，加水浸润；lg的复合酶加入200ml水中，调pH=5，然后拌入虎杖粉，50°C水浴上发酵48h。80%乙醇回流提取两次，第一次12倍量，I. 5h，第二次8倍量，Ih,过滤，合并提取液，浓缩至500ml，加入500ml水，离心，取上清液，上DlOl树脂(天津市海光化工有限公司)，纯净水冲洗至基本无色，然后O. 5%NaOH水溶液洗脱，收集3BV，O. 5mol/L稀盐酸调pH=3，离心，取上清液，再上DlOl树脂，第一次用纯净水洗脱至基本无色，第二次用25%乙醇洗脱3BV，第三次用60%乙醇洗脱，收集5BV60%乙醇洗脱液，洗脱液浓缩、干燥，HPLC测定，得纯度60. 2%的白藜芦醇。实施例2 将虎杖药材干燥粉碎成虎杖粉，过80目筛，取虎杖粉100g，加水浸润；Ig的复合酶加入200ml水中，调pH=5，然后拌入虎杖粉，50°C水浴上发酵52h。80%乙醇回流提取两次，第一次12倍量，I. 5h，第二次10倍量，Ih,过滤，合并提取液，浓缩至500ml，加入600ml水，离心，取上清液，上AB-8树脂(西安蓝晓科技有限公司)，纯净水冲洗至基本无色，然后O. 6%Na0H水溶液洗脱，收集3BV，O. 5mol/L稀盐酸调pH=3，离心，取上清液，再上AB-8树脂，第一次用纯净水洗脱至基本无色，第二次用30%乙醇洗脱3BV，第三次用75%乙醇洗脱，收集5BV75%乙醇洗脱液，洗脱液浓缩、干燥，HPLC测定，得纯度61. 1%的白藜芦醇。·实施例3:将虎杖药材干燥粉碎成虎杖粉，过80目筛，取虎杖粉100g，加水浸润；lg的复合酶加入200ml水中，调pH=5，然后拌入虎杖粉，50°C水浴上发酵60h。80%乙醇回流提取两次，第一次12倍量，I. 5h，第二次10倍量，Ih,过滤，合并提取液，浓缩至500ml，加入600ml水，离心，取上清液，上AB-8树脂，纯净水冲洗至基本无色，然后O. 5%Na0H水溶液洗脱，收集3BV, O. 5mol/L稀盐酸调pH=3，离心，取上清液，再上AB-8树脂，第一次用纯净水洗脱至基本无色，第二次用25%乙醇洗脱3BV，第三次用60%乙醇洗脱，收集5BV60%乙醇洗脱液，洗脱液浓缩、干燥，HPLC测定，得纯度65. 1%的白藜芦醇。实施例4 将虎杖药材干燥粉碎成虎杖粉，过80目本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从中药虎杖中制备白藜芦醇的工艺，其特征在于，包括以下步骤：1）将虎杖药材干燥并粉碎，得虎杖粉；2）加水浸润虎杖粉，在浸润后的虎杖粉中加入复合酶，恒温发酵，使白藜芦醇的类似物虎杖苷转化成白藜芦醇；3）用乙醇回流提取；4）将提取液合并、过滤，浓缩；加入纯净水沉淀，离心，取上清液；5）上清液上大孔吸附树脂，开始用纯净水洗脱至无色，然后用碱水洗脱，收集碱水洗脱液，调pH=2.5？3.5，离心，取上清液；6）上清液继续上大孔吸附树脂，第一次用纯净水洗脱至无色，第二次用10%乙醇洗脱，弃去，第三次用50%～95%乙醇洗脱，收集洗脱液；7）将收集的洗脱液浓缩干燥。

【技术特征摘要】
1.ー种从中药虎杖中制备白藜芦醇的エ艺，其特征在于，包括以下步骤 1)将虎杖药材干燥并粉碎，得虎杖粉； 2)加水浸润虎杖粉，在浸润后的虎杖粉中加入复合酶，恒温发酵，使白藜芦醇的类似物虎杖苷转化成白藜芦醇； 3)用こ醇回流提取； 4)将提取液合并、过滤，浓缩；加入纯净水沉淀，离心，取上清液； 5)上清液上大孔吸附树脂，开始用纯净水洗脱至无色，然后用碱水洗脱，收集碱水洗脱液，调pH=2. 5-3. 5，离心，取上清液； 6)上清液继续上大孔吸附树脂，第一次用纯净水洗脱至无色，第二次用10%こ醇洗脱，弃去,第三次用50% 95%こ醇洗脱，收集洗脱液； 7)将收集的洗脱液浓缩干燥。2.根据权利要求I所述的ー种从中药虎杖中制备白藜芦醇的エ艺，其特征在于，包括以下步骤 1)将虎杖药材干燥并粉碎，得虎杖粉； 2)加水浸润虎杖粉，在浸润后的虎杖粉中加入复合酶，置于温度控制在35°C 60°C的容器内，恒温发酵24 72小时，使白藜芦醇的类似物虎杖苷转化成白藜芦醇； 3)加入虎杖药材重量6 12倍的40-95%こ醇，回流提取； 4)将提取液合并、过滤，浓缩回收こ醇至无醇味，加入I 3倍水沉淀，离心，取上清液； 5)上清液上大孔吸附树脂，开始用纯净水洗脱至无色，然后用O.4% 1%的碱水洗脱，收集碱水洗脱液，用稀盐酸调pH=2. 5-3. 5，离心，取上清液； 6)上清液继续上大孔吸附树脂，第一次用纯净水洗脱至无色，第二次用10% 35%こ醇洗脱2 3BV，弃去，第三次用50% 95%こ醇洗脱，收集3 6BV洗脱液； 7)将收集洗脱液浓缩干燥。3.根据权利要求2所述的ー种从中药虎杖中制备白藜芦醇的エ艺，其特征在于，包括以下步骤 (1)干燥虎杖药材粉碎到通过80目筛>90% ； (2)加水浸润虎杖粉；在复合酶中加入水，复合酶与水的重量体积比为I:150-250，调pH=3-5，然后加入到浸润后的虎杖粉中，置于温度控制在50°C 60°C的容器内，恒温发酵50 60小时，使白藜芦醇的类似物虎杖苷转化成白藜芦醇； (3)加入虎杖药材重量8 12倍的80%こ醇，回流提取两次，每次I 2小时； (4)将两次虎杖提取液合并、过滤，...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓义德，
申请(专利权)人：湖南希尔天然药业有限公司，湖南希尔药物研究有限公司，
类型：发明
国别省市：