一种可快速检测苯乙醇胺A的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种可快速检测苯乙醇胺A的试剂盒。该试剂盒包括上、下两层，上层装有包被苯乙醇胺A-卵清蛋白抗原的酶标板、盖板膜、自封袋、说明书、质检报告；下层有6瓶不同梯度浓度的苯乙醇胺A标准品、1瓶高浓度苯乙醇胺A标准品、苯乙醇胺A抗体工作液、样品稀释液、浓缩肉样提取液、浓缩洗涤液、底物A液、B液和终止液。采用直接竞争法，待测样品中苯乙醇胺A残留与酶标板上固定抗原竞争抗体，再加入酶标结合物，通过酶催化显色，利用样本吸光度值计算出样本中苯乙醇胺A的含量。本试剂盒具有检测简便，快速，灵敏度高，检测费用低廉等优点，可满足多种检需求。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品安全检测领域，具体而言，本专利技术涉及一种检测动物源性食品中苯こ醇胺A残留量的试剂盒。
技术介绍
β -受体激动剂在现代养殖业中被用于作为饲料添加剤，如之前为人们所熟知的克伦特罗等，这ー类药物可以减少脂肪，增加瘦肉，提高猪的单位经济价值，但是它们都有危险的副作用，轻则导致心律不整，严重一点就会导致心脏病。苯こ醇胺Α，又称“克伦巴胺”，化学式2-[4-(4_硝基苯基)丁基-2-基氨基]-1-甲氧基苯こ醇，分子式C19H24N204，分子量344，是新一代的瘦肉精。四川省广安 市广安区枣山镇畜牧兽医站对某养猪场例行违禁药物监测中，用莱克多巴胺测试卡分别检测母猪、仔猪和育肥猪尿液，发现该场育肥猪尿检呈阳性，之后确认是新型添加物苯こ醇胺A。这种瘦肉精新品种惊现市场，再次敲响中国食品安全警钟。因此被农业部发布的第1519号公告列为“禁止在和动物饮水中使用的物质”。公告称，根据《饲料和饲料添加剂管理条例》有关規定，禁止在饲料和动物饮水中使用苯こ醇胺A等物质。各级畜牧饲料管理部门要加强日常监管和监瞀检測，严肃查处在饲料生产、经营、使用和动物饮水中违禁添加苯こ醇胺A等物质的违法行为。目前，检测苯こ醇胺A的方法主要为仪器方法——高效液相色谱质谱法，这类方法需要专业的仪器设备和专业的人员进行操作，前处理繁杂，费时，不适合大量样本的筛查和基层人员操作。因此能够快速、准确检测苯こ醇胺A在动物性食品中的残留是十分必要的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种成本低、快速、操作简便、灵敏度高的苯こ醇胺A检测试剂盒。本专利技术的技术方案是包括ー个双层试剂盒盒体，盒体内上层装有，包被苯こ醇胺A-卵清蛋白抗原的96孔酶标板、一张盖板膜、一个自封袋、ー份说明书、一份质检报告、下层有固定泡沫模具形成的放置试剂的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶，其特征在于酶标板上装有12条可拆卸的酶标条，每个酶标条有8个反应孔，每个酶标孔预包被了苯こ醇胺A-卵清蛋白抗原，放入铝箔袋，装入干燥剂后真空；所述试剂瓶包括有6瓶2mL从O 24. 3 μ g/L梯度浓度的苯こ醇胺A标准品、I瓶2mL lmg/L的高浓度苯こ醇胺A标准品、7mL苯こ醇胺A抗体工作液、30mL样品稀释液、12mL浓缩肉样提取液、40mL浓缩洗涤液、7mL底物A液、7mL底物B液、7mL终止液；试剂瓶的大小、瓶盖的颜色各不相同，固定在具有下凹瓶位的泡沫塑料模具中盖板膜、自封袋、说明书和质检报告一同装在一个自封袋中置于酶标板的下方。试剂盒可以一次连续測定多份样品，也可将板孔拆开多次检测。本试剂盒检测的原理是待测样品中苯こ醇胺A残留与酶标板上固定抗原竞争抗体，再加入酶标结合物，通过酶催化显色，如果苯こ醇胺A含量少，显色深，反之，显色浅。本试剂盒具有很高的灵敏度和很高的特异性，可检测的样本包括猪肉、牛肉、羊肉、猪尿、牛尿、羊尿。对猪肉、牛肉、羊肉的的最低检测限为O. 5 μ g/kg，对猪尿、牛尿、羊尿的最低检测限为O. 3 μ g/L，样本的回收率为90% ±30%。与苯こ醇胺A的的交叉反应率为100%，不与β -受体激动剂的其他药物产生交叉反应。本试剂盒检测简便，所需仪器较少，只需要酶标仪、均质器、离心机等简单的实验室仪器，所需检测成本低。可满足食品生产企业的自我质量控制、也可作为食品安全监瞀和检测机构的常规筛查手段，也能用于科研中动物药理和毒理学研究的辅助手段。附图说明图I是本使用新型的上层示意图图2是本技术下层示意图；图3是本技术打开上层后的俯视图具体实施方式參见附图1-3，展现了本实施例所述的ー种可快速检测苯こ醇胺A试剂盒的结构，所述盒体I上层装有所述的96孔酶标板2，所述盖板膜、自封袋、说明书、质检报告共同装在一个自封袋中放置于所述酶标板2下面；所述试剂盒下层内具有固定泡沫模具3形成的下凹瓶位，共有14个下凹瓶位2mL lmg/L的高浓度苯こ醇胺A标准品瓶位4，7mL苯こ醇胺A抗体工作液瓶位5，40mL浓缩洗涤液瓶位6，12mL浓缩肉样提取液瓶位7，7mL底物A液瓶位8，7mL底物B液瓶位9，7mL终止液瓶位10，2mL O μ g/L浓度苯こ醇胺A标准品11，2mLO.3 μ g/L浓度苯こ醇胺A标准品12，2mL0. 9 μ g/L浓度苯こ醇胺A标准品13，2mL 2. 7 μ g/L浓度苯こ醇胺A标准品14，2mL 8. I μ g/L浓度苯こ醇胺A标准品15，2mL 24. 3 μ g/L浓度苯こ醇胺A标准品16，30mL样品稀释液瓶位17。所述下凹瓶位用于放置装有相应溶液的试剂瓶(14瓶)。本技术的实施例一、工作液的准备洗涤工作液用去离子水按I : 20(1份浓缩液+19份去离子水)稀释。样品稀释液用去离子水按I : 10(1份浓缩样品稀释液+9份去离子水)稀释。肉样提取液用去离子水按I : 50 (I份浓缩液+49份去离子水)稀释。ニ、样品前处理尿样取20 μ L待检尿样直接进行检测。注若混浊,可过滤或4000g离心5min ；肉样精确称取2g均质后的样品于50mL离心管中，加入6mL肉样提取液充分涡动2min ;注涡动步骤须至组织完全分散；4000g以上离心IOmin ;立即取20 μ L上清进行检测。样本稀释倍数为4。三、操作步骤I.将所需的酶标板条插入酶标板架上，并记录下各标准品和样品的位置，建议均做平行实验，未使用的酶标板条用自封袋密封后，立即保存于2-8°C环境中；2.将20 μ L各标准品工作液/样品溶液分别加入对应的标准品/样品孔中；3.在每个板孔中加入50 μ L酶结合物工作液；4.再在每个板孔中加入50 μ L的抗体工作液(注意严格按标准品/样品、酶结合物工作液、抗体加样)；5.盖好盖板膜，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀，室温(25±2°C )，避光反应30min ；6. 6揭开盖板膜；倒掉板孔中液体，每孔加入260 μ L洗涤工作液，浸泡15 30s ；再重复上ー步骤3次；7.倒掉板孔中液体，将酶标板倒置于吸水纸上，拍干；立即在每孔中加入100L底物A、B混合液注底物A液、底物B液按体积I : I混合，现用现配)；8.盖好盖板膜，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀，室温(25±2°C )，避光反应10 15min ；9.揭开盖板膜，板孔中加入50 μ L終止液，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀；10.用酶标仪在双波长450nm、630nm下检测吸光度,在5min内读取检测数据。·四、计算用每个浓度的标准品溶液的吸光度平均值(B)除以第一个标准品溶液(O标准)的吸光度值(BO)再乘以100%，得到百分吸光度值。运用Originpro 7. O软件对数据结果进行分析，以标准品浓度(μ g/L)的自然対数值为X轴，百分吸光度值为Y轴拟合出标准曲线。用每个待测样本溶液的吸光度平均值(B)除以第一个标准品溶液(O标准)的吸光度值(BO)再乘以100%，得到百分吸光度值。相对应每ー个待测样本溶液的百分吸光度值，则可从标准曲线上读出苯こ醇胺A的浓度值，再乘以相应样品的稀释倍数，换算出待测样本溶液中苯こ醇胺A的含量。五、测定注意事项I.请勿使用过期产品，不同批号产品的试剂不得混用。2.试剂盒使用前，将盒内各组份置于实验台上，待其恢复至室温(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可快速检测苯乙醇胺A的试剂盒，其特征在于：一个双层试剂盒盒体，盒体内上层装有，包被苯乙醇胺A？卵清蛋白抗原的96孔酶标板、一张盖板膜、一个自封袋、一份说明书、一份质检报告、下层有：固定泡沫模具形成的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶，所述试剂瓶包括有6瓶2mL从0～24.3μg/L梯度浓度的苯乙醇胺A标准品、1瓶2mL？1mg/L的高浓度苯乙醇胺A标准品、7mL苯乙醇胺A抗体工作液、30mL样品稀释液、12mL浓缩肉样提取液、40mL浓缩洗涤液、7mL底物A液、7mL底物B液、7mL终止液。

【技术特征摘要】
1.ー种可快速检测苯こ醇胺A的试剂盒，其特征在于ー个双层试剂盒盒体，盒体内上层装有，包被苯こ醇胺A-卵清蛋白抗原的96孔酶标板、一张盖板膜、一个自封袋、一份说明书、一份质检报告、下层有固定泡沫模具形成的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶，所述试剂瓶包括有6瓶2mL从O 24. 3 μ g/L梯度浓度的苯こ醇胺A标准品、I瓶2mL lmg/L的高浓度苯こ醇胺A标准品、7mL苯...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴小平，何丹婷，徐飞，赵宁，王世恩，潘净如，
申请(专利权)人：北京维德维康生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：