亲和色谱用填充剂制造技术

本发明专利技术提供含有蛋白质的动态结合容量高且压力特性优异的多孔粒子的、对蛋白质纯化有用的亲和色谱用填充剂。本发明专利技术的亲和色谱用填充剂的特征在于，具有：由乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子、结合于上述多孔粒子的配体、以及开环环氧基，所述乙烯基单体包括：含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体和含有环氧基的非交联性乙烯基单体、或者含有羟基和环氧基的交联性乙烯基单体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及亲和色谱用填充剂。尤其涉及含有蛋白质的动态结合容量高且压力特性优异的多孔粒子的、对蛋白质纯化有用的亲和色谱用填充剂。
技术介绍
亲和色谱法在包括单克隆抗体的蛋白质的研究、开发和制造中承担着重要的作用。亲和色谱用填充剂一般包含具有选择性地与靶分子结合的配体的固相载体。就亲和色谱法而言，固相载体上的配体对于靶分子具有高选择性，因此，与离子色谱法、凝胶过滤色谱法、反相液体色谱法等其它色谱法相比，可以进行收率优异以及高速且经济的纯化。亲和色谱用填充剂的固相载体主要使用琼脂糖粒子(专利文献1、2)。琼脂糖粒子由于其高亲水性，因此配体的活性高，对于靶分子的动态结合容量高。作为其它亲和色谱用填充剂的固相载体，有时使用由苯乙烯-二乙烯基苯的聚合物形成的多孔粒子(专利文献3、4)。由苯乙烯-二乙烯基苯这样的乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子一般来说弹性模量高，压力特性优异。另外，为了兼顾亲和色谱用填充剂中的高动态结合容量和压力特性，也提出了将琼脂糖这样的糖链结合于由乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子的细孔而得到的粒子(专利文献5)。另一方面，虽然有将由含有羟基的交联性乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子用于色谱法的例子，但它们均仅适合于以分析为目的的凝胶过滤色谱法、反相液体色谱法(专利文献6 8)。专利文献I :日本特表2008-523140号公报专利文献2 日本特表2009-522580号公报专利文献3 日本特开平8-278299号公报专利文献4 :日本特表平10-501173号公报专利文献5 :日本特开2008-232764号公报专利文献6 :日本特开2002-239380号公报专利文献7 :日本特开2003-176363号公报专利文献8 :日本特开2000-187028号公报
技术实现思路
但是，琼脂糖粒子一般弹性模量低，因此具有在高速流过介质时柱的压力变高这个缺点，从而压力特性较差。另外，琼脂糖粒子一般是从天然的海草经过长的复杂工序而制造成的，因此具有难以获得恒定质量的琼脂糖粒子这个缺点。另一方面，由苯乙烯-二乙烯基苯这样的乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子的亲水性低，因此，配体的活性低，从而具有对靶分子的动态结合容量低这个缺点。另外，将琼脂糖这样的糖链结合于由乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子的细孔而得到的粒子与琼脂糖粒子同样地是经过长的复杂工序而制造成的，因此，具有可以作为亲和色谱使用的质量的粒子昂贵、或难以获得恒定质量的粒子的缺点。进而，在现有的凝胶过滤色谱法、反相液体色谱法中使用的、由含有羟基的交联性乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子不能达到兼顾作为亲和色谱用填充剂的高动态结合容量和压力特性。于是，本专利技术的目的在于提供蛋白质的动态结合容量高、压力特性也优异、对蛋白质纯化有用的亲和色谱用填充剂。本专利技术的一个方式所涉及的亲和色谱用填充剂其特征在于，具有由乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子，所述乙烯基单体包括含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体和含有环氧基的非交联性乙烯基单体、或者含有羟基和环氧基的交联性乙烯基单体，结合于上述多孔粒子的配体，以及 开环环氧基。在上述亲和色谱用填充剂中，上述配体可以是含有至少I个蛋白A、蛋白A的免疫球蛋白结合域、或者其变异体的蛋白质。在上述亲和色谱用填充剂中，上述乙烯基单体可以由以下构成(X-I)含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体20 90质量份、(X-2)不含有羟基和环氧基的交联性乙烯基单体O 40质量份、(M-I)含有环氧基的非交联性乙烯基单体I 40质量份、以及(M-2)不含有环氧基的非交联性乙烯基单体O 70质量份(其中，(X-1)、(X-2)、(M-1WP(M_2)的合计是100 质量份)。在上述亲和色谱用填充剂中，上述开环环氧基可以利用硫甘油使上述聚合物所含有的环氧基开环而获得。在上述亲和色谱用填充剂中，上述多孔粒子可以将上述乙烯基单体100质量份与以(P-ι)为必需成分的水系混合物悬浮聚合而获得，所述(P-I)是选自碳原子数为7 14的直链状、支链状以及环状的醇、醚、醛、酮、酯、碳原子数为8 10的烷基苯中的至少I种的致孔剂(其中，致孔剂的合计量是100 400质量份，(P-I)在致孔剂的合计量100质量％中为10质量％以上)。在上述亲和色谱用填充剂中，利用压汞仪对相当于孔径为10 5000nm范围的细孔进行测定时上述多孔粒子的细孔容积可以是I. 00 I. 90ml/g。在上述亲和色谱用填充剂中，上述多孔粒子的粒径可以是35 ΙΟΟμπι。本专利技术的另一方式所涉及的离析免疫球蛋白的方法包括利用上述亲和色谱用填充剂使免疫球蛋白吸附于上述填充剂的工序，以及使上述免疫球蛋白溶出的工序。本专利技术的另一方式所涉及的柱是填充有上述亲和色谱用填充剂的亲和色谱法用填充柱。利用本专利技术所涉及的亲和色谱用填充剂，可以提供蛋白质的动态结合容量高、且压力特性优异、对蛋白质纯化有用的亲和色谱用填充剂。附图说明图I是表示本专利技术的实施例I中制备的免疫球蛋白结合蛋白质(SP4Z)的氨基酸序列的图。图2是说明在表达载体(pETM-11)中插入的、编码本专利技术的实施例I所涉及的免疫球蛋白结合蛋白质的DNA片段的构成的图。图3是表示本专利技术的实施例2中制备的免疫球蛋白结合蛋白质(SPATK)的氨基酸序列的图。图4是说明在表达载体(pETM-11)中插入的、编码本专利技术的实施例2所涉及的免疫球蛋白结合蛋白质的DNA片段的构成的图。具体实施例方式下面，对于本专利技术的亲和色谱用填充剂进行具体地说明。 I.亲和色谱用填充剂本专利技术的亲和色谱用填充剂具有由乙烯基单体的聚合物形成的多孔粒子，所述乙烯基单体包括含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体和含有环氧基的非交联性乙烯基单体、或含有羟基和环氧基的交联性乙烯基单体，结合于上述多孔粒子的配体，以及开环环氧基。I. I.多孔粒子的构成构成本专利技术的亲和色谱用填充剂的多孔粒子是由以含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体和含有环氧基的非交联性乙烯基单体为必需成分的乙烯基单体的共聚物、或者仅以含有羟基和环氧基的交联性乙烯基单体为必需成分的乙烯基单体的均聚物形成的载体粒子。由于该聚合物所含有环氧基，因此，配体结合前的由该聚合物形成的多孔粒子含有环氧基。配体结合前的多孔粒子的环氧基含量是O. 05 4. Ommol/goI. I. I.含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体是在I分子中具有2个以上聚合性乙烯基(具有乙烯性不饱和键的基团)和I个以上羟基、且不具有环氧基的交联性单体。通过使用含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体将多孔粒子亲水化并控制成适合的弹性模量，可以获得蛋白质的动态结合容量高、且压力特性优异的亲和色谱用填充剂。作为含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体，优选为脂肪族聚乙烯基单体，进一步优选为多元醇的(甲基)丙烯酸酯。作为含有羟基且不含有环氧基的交联性乙烯基单体，具体地可以举出甘油二(甲基)丙烯酸酯、三羟甲基乙烷二(甲基)丙烯酸酯、三羟甲基丙烷二(甲基)丙烯酸酯、丁三醇二(甲基)丙烯酸酯、季戊四醇二(甲基)丙烯酸酯、季戊四醇三(甲基)丙烯酸酯、二季戊四醇二(甲基)丙烯酸酯、二季戊四醇三(甲基)丙烯酸酯、二季戊四本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：田守功二，安陪毅由，冈野友亮，籾山昌辉，川井洋，日向寺慧，王勇，
申请(专利权)人：JSR株式会社，
类型：
国别省市：