【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体上涉及抗体模拟物的领域，具体地涉及用于例如产生 具有新型结合特征的产物的基于纤连蛋白III型(Fn3)结构域的多聚体支架。背景能够特异性结合期望的靶表位的生物分子具有作为治疗剂、研究和医学诊断工具的极大重要性。该类分子的公知实例为抗体。可选择特异性结合几乎任何结构表位和具有对于所述表位的亲和カ的抗体。然而，经典抗体是难以在简单真核系统中表达的结构复杂的异源四聚体分子。因此，大多数抗体使用复杂且昂贵的哺乳动物细胞表达系统来产生。具有相对确定的三维结构(通常称为蛋白质支架)的蛋白质可用作用于设计工程产物的试剂。此类支架通常包含一个或多个易于特定或随机序列变异的区域，并且经常进行这样的序列随机化以产生可从其选择期望的产物的蛋白质的文库。其中这类支架是有用的ー个具体领域是抗体模拟物设计的领域。抗体模拟物，即小的非抗体蛋白质治疗剂，利用抗体和抗体片段的有利方面，例如对靶的高亲和カ结合以及低免疫原性和毒性，同时避免ー些缺点，例如抗体片段聚集的倾向以及不如全长IgG稳定。这些缺点可通过使用通过除去抗体天然折叠的部分产生的抗体片段来解決。然而，当通常包埋在疏水环境例如可变结构域与恒定结构域之间的界面中的氨基酸残基变得暴露于溶液时，这通常引起聚集。基干支架的抗体模拟物的ー个实例基于III型(FnIII)的纤连蛋白模块(在门(phyla)间和蛋白质种类间(例如在哺乳动物的血液和结构蛋白质中)被广泛发现的结构域)的结构。FnIII结构域通常存在于多种蛋白质(包括纤连蛋白、生腱蛋白、细胞内细胞骨架蛋白、细胞因子受体和原核生物酶)中(Bork和Doolittle...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.04.13 US 61/323,7081.一种重组多聚体支架，其包含衍生自一个或多个目标FnIII结构域(FOI)的两个纤连蛋白III型(FnIII)单体支架，其中 (a)每一个FnIII单体支架包含连接于多个环区域的多个0链， (b)所述FnIII单体支架以串联形式连接,其中至少I个所述单体包含非天然存在的分子内二硫键单体支架， (c)所述重组多聚体支架特异性结合至少I个靶，且 (d)对所述靶的作用与关联FnIII单体支架的所述作用相比较得到了增强。2.根据权利要求I所述的多聚体支架，其中所述多聚体支架包含3、4、5、6、7或8个FnIII单体支架。3.根据权利要求2所述的多聚体支架，其中以线性串联形式连接所有FnIII单体支架。4.根据权利要求I至3中任一项所述的多聚体支架，其中至少2个FnIII单体支架包含非天然存在的分子内二硫键。5.根据前述权利要求中任一项所述的多聚体支架，其中所述多聚体支架结合至少2个靶。6.根据权利要求2至5中任一项所述的多聚体支架，其中至少I个FnIII单体支架通过接头或通过异源部分直接连接于2、3、4、5或6个其它FnIII单体支架。7.根据权利要求6所述的多聚体支架，其中至少2个FnIII单体支架通过接头连接。8.根据权利要求I至7中任一项所述的多聚体支架，其中至少2个FnIII单体支架直接连接而无间插在所述FnIII单体支架之间的接头。9.一种重组多聚体支架，其包含衍生自一个或多个目标FnIII结构域(FOI)的3个纤连蛋白III型(FnIII)单体支架，其中 (a)每一个FnIII单体支架包含连接于多个环区域的多个0链， (b)所述重组多聚体FnIII支架特异性结合至少I个靶，且 (c)对所述靶的作用与关联FnIII单体支架的所述作用相比较得到了增强。10.根据权利要求9所述的多聚体支架，其中所述多聚体支架包含4、5、6、7、8、9、10、11或12个FnIII单体支架。11.根据权利要求10所述的多聚体支架，其中以线性串联形式连接所有FnIII单体支架。12.根据权利要求9至11中任一项所述的多聚体支架，其中至少I个FnIII单体支架包含非天然存在的分子内二硫键。13.根据权利要求9至12中任一项所述的多聚体支架，其中所述多聚体支架结合至少2个靶。14.根据权利要求9至13中任一项所述的多聚体支架，其中至少I个FnIII单体支架通过接头或通过异源部分直接连接于2、3、4、5或6个其它FnIII单体支架。15.根据权利要求9至14中任一项所述的多聚体支架，其中至少2个FnIII单体支架通过接头连接。16.根据权利要求9至15中任一项所述的多聚体支架，其中至少2个FnIII单体支架直接连接而无间插在所述FnIII单体支架之间的接头。17.根据权利要求I至16中任一项所述的多聚体支架，其中至少I个FnIII单体支架中的所述多个P链包括命名为A、B、C、D、E、F和G的7个P链。18.根据权利要求I至16中任一项所述的多聚体支架，其中至少I个FnIII单体支架中的所述多个环区域包括命名为AB、BC、⑶、DE、EF和FG的6个环区域。19.根据权利要求I至18中任一项所述的多聚体支架,其中对于至少I个FnIII单体支架，在结合上与关联FnIII单体支架的所述结合相比较存在增强，其中所述增强在于结合亲和力和/或结合亲合力的增强。20.根据权利要求19所述的多聚体支架，其中对于所述靶的结合亲和力和蛋白质稳定性与关联FnIII单体支架的所述结合亲和力和蛋白质稳定性相比较得到了增强。21.根据权利要求19所述的多聚体支架，其中对于所述靶的所述结合亲合力和蛋白质稳定性与关联FnIII单体支架的所述结合亲合力和蛋白质稳定性相比较得到了增强。22.根据前述权利要求中任一项所述的多聚体支架，其中至少I个FnIII单体支架包含至少2个非天然存在的分子内二硫键。23.根据权利要求6、7、14或15中任一项所述的多聚体支架，其中所述接头包括肽接头。24.根据权利要求23所述的多聚体支架，其中所述肽接头为柔性肽接头。25.根据权利要求6或14中任一项所述的多聚体支架，其中所述接头包含功能性部分。26.根据权利要求25所述的多聚体支架，其中所述功能性部分为免疫球蛋白或其片段。27.根据前述权利要求中任一项所述的多聚体支架，其中将至少I个所述FnIII单体支架融合至异源部分。28.根据权利要求6、7、14或15中任一项所述的多聚体支架，其中超过两个所述FnIII单体支架通过接头连接，并且其中至少I个接头在结构上和/或功能上与另外的接头不同。29.根据权利要求2、4-8、10或12-28中任一项所述的多聚体支架，其中以分枝形式连接所述FnIII单体支架。30.根据权利要求2、4-8、10或12-28中任一项所述的多聚体支架，其中一些FnIII单体支架以线性串联形式连接并且一些FnIII单体支架以分枝形式连接。31.根据前述权利要求中任一项所述的多聚体支架，其中至少2个FnIII单体支架是相同的。32.根据前述权利要求中任一项所述的多聚体支架，其中至少2个FnIII单体支架是不同的。33.根据前述权利要求中任一项所述的多聚体支架，其中所述多聚体支架为受体激动剂。34.根据前述权利要求中任一项所述的多聚体支架，其中所述多聚体支架为受体拮抗剂。35.根据前述权利要求中任一项所述的多聚体支架，其中至少2个FnIII单体支架在相同的表位上结合所述相同的靶。36.根据权利要求I至35中任一项所述的多聚体支架，其中至少2个FnIII单体支架在不同的表位上结合所述相同的靶。37.根据权利要求36所述的多聚体支架，其中所述不同表位为非重叠表位。38.根据权利要求36所述的多聚体支架，其中所述不同表位为重叠表位。39.根据前述权利要求中任一项所述的多聚体支架，其中至少I个FOI选自动物FnIII结构域、细菌FnIII结构域、古细菌FnIII结构域和病毒FnIII结构域。40.根据权利要求39所述的多聚体支架，其中至少I个FOI包含选自SEQID NO: 1-34,59,69中的任一个序列和图16中所示的序列的任何序列的序列。41.根据权利要求39所述的多聚体支架，其中至少I个FOI为来自超嗜热古菌的FnIII结构域。42.根据权利要求39所述的多聚体支架，其中所述动物FnIII结构域包含人生腱蛋白C(SEQ ID NO:4)的第三FnIII结构域或其功能性片段。43.根据权利要求39所述的多聚体支架，其中所述动物FnIII结构域包含人纤连蛋白的第HFnIII结构域(SEQ ID NO:69)或其功能性片段。44.根据权利要求39所述的多聚体支架，其中所述动物FnIII结构域包含人纤连蛋白的第IOFnIII结构域(SEQ ID NO:64)或其功能性片段。45.根据权利要求39所述的多聚体支架，其中每一个FnIII单体的FOI包含人生腱蛋白C的第三FnIII结构域(SEQ ID NO:4)或其功能性片段。46.根据权利要求42或45中任一项所述的多聚体支架，其中所述功能性部分为所述人生腱蛋白C的第三FnIII结构域的N末端截断形式(SEQ ID NO: 14)。47.根据权利要求17所述的多聚体支架，其中所述FnIII单体支架中的至少I个的所述@链与SEQ ID NO:4中的所述关联P链具有至少90%的序列同一性。48.根据权利要求17所述的多聚体支架，其中对于至少I个FnIII单体支架，所述A3链结构域包含SEQ ID NO: 41或42，所述链包含SEQ ID NO: 43，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·巴卡，T·迪斯泰德，J·斯维斯，
申请(专利权)人：米迪缪尼有限公司，
类型：
国别省市：
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