发明专利技术提供了一种检测水样双酚A的酶联免疫试剂盒，它含有：包被有包被原的酶标板，酶标二抗溶液，双酚A抗体溶液，双酚A标准品溶液，底物显色液，终止液和浓缩洗涤液；利用上述酶联免疫试剂盒检测对于悬浮物含量较高的水样双酚A的方法，先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明专利技术提供的酶联免疫试剂盒用于水样双酚A的检测，具有操作简便和灵敏度高的优点，并且制作费用低廉，能够进行现场监控且适合大量样本筛查。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检验检疫，特别涉及ー种用于检测水样中双酚A的酶联免疫试剂盒。
技术介绍
双酚A，中文名称2，2-双(4-羟基苯基)丙烷，英文名称2,2-bis (4-hydroxyphenyl) propane 或 Bisphenol A (简称为 BPA),易溶于醇、丙酮、こ醚、ニ氯甲烷、苯及稀碱液等，微溶于四氯化碳，几乎不溶于水。BPA是重要的有机化工原料，苯酚和丙酮的重要衍生物，主要用于生产聚碳酸酷、环氧树脂、聚砜树脂、聚苯醚树脂、不饱和聚酯树脂等多种高分子材料。也可用于生产增塑剂、阻燃剂、抗氧剂、热稳定剂、橡胶防老齐IJ、农药、涂料等精细化工产品。BPA在生产生活中几乎无处不在，从矿泉水瓶、医疗器械到及食品包装的内里，都 有它的身影。每年全世界生产2700万吨含有BPA的塑料。但BPA也能导致内分泌失调，威胁着胎儿和儿童的健康。BPA是制造包括婴儿奶瓶、水瓶、其他食品和饮料容器等坚硬和透明聚碳酸酯塑料的关键物质。癌症和新陈代谢紊乱导致的肥胖也被认为与BPA有夫。国内外市售婴儿用聚碳酸酯塑料奶瓶在沸水下检出双酚A析出，可能会危害婴儿的健康；桶装水因为其便利而在人们日常生活普及，已有文献报道在桶装水中检出的双酚A，长期摄入含有双酚A的饮用水会影响健康；而事实上研究表明长期暴露在食品包装物上的双酚A剂量水平要比实验室里双酚A致动物癌变的剂量水平高的多。由于欧盟认为含双酚A奶瓶会诱发性早熟，从2011年3月2日起，禁止含生产化学物质双酚A(BPA)的婴儿奶瓶。随着人们对食品安全意识的提高，由于双酚A在环境中的广泛存在及其危害性。为保障食品安全，开发出快速、有效并能够适应现场检测需要的双酚A残留的检测手段显得尤为重要。目前现有技术中对双酚A的測定多采用色谱法，但该方法中所用的仪器造价昂贵且耗时较长，样品前处理复杂，而且不能用于现场检测，使其应用范围受到一定的限制。与之相比，ELISA技术在大量样品的现场快速筛选方面有着无可比拟的独特优势。但是目前国内实际应用的检测双酚A的ELISA试剂盒很少，主要依赖进ロ。因此，本课题致力于研究制备效价高，亲和性好，特异性强的抗体，用于建立BPA免疫分析检测的产品和使用方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服上述现有技术存在的不足，提供ー种操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够适合大量样本筛查的试剂盒，以及利用其检测水样中双酚A含量的检测方法。本专利技术提供的酶联免疫试剂盒用于水样双酚A的检测，要能够做到操作简便、费用低廉、灵敏度高并且能够进行现场监控，还适合大量样本筛查。为了达到上述专利技术目的，本专利技术提供的技术的原理和技术方案如下一、本专利技术的检测原理为先在酶标板上固定一定量的双酹A偶联抗原,加入样本溶液或双酹A标准品溶液后,接着加入一定量的双酚A特异性抗体，使待测抗原和固定抗原竞争性地与溶液中游离的双酚A特异性抗体结合，充分洗涤未反应的抗体和抗原，再加入一定量的酶标ニ抗(抗抗体)进行放大作用，充分洗涤后，加底物显色液显色。结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的抗体越少，酶标ニ抗的量就越少，显色越浅，两者呈负相关。此实验的条件是固定抗原限量，抗体定量，酶标ニ抗限量。固定抗原与待测抗原和抗体结合的位点相同，竞争性地与抗体结合。ニ、本专利技术的技术方案为本专利技术一方面提供了ー种用于检测水样中双酚A的酶联免疫试剂盒，它含有(I)包被有双酚A-BSA包被抗原的96孔酶标板；(2)双酚A标准品溶液；(3)双酚A特异性抗体； (4)底物显色液；(5)終止液;(6)浓缩洗涤液；(7)酶标ニ抗溶液。在本专利技术检测水样中双酚A的酶联免疫试剂盒中，所述包被抗原为双酚A半抗原与牛血清蛋白的偶联物。通过Friedel-Crafts烧基化反应在双酹A上引入羧基,制得能够与蛋白质偶联的双酚A半抗原，再将其与N-羟基丁ニ酰亚胺和N，N’ - ニ环己基碳ニ亚胺混合后反应，与蛋白质偶联制备双酚A完全抗原，在本专利技术检测水样中双酚A的酶联免疫试剂盒中，双酚A特异性抗体为兔抗双酚A的多克隆抗体，用双酚A半抗原与牛血清蛋白的偶联物作为免疫原通过免疫兔制得。在本专利技术检测水样中双酚A的酶联免疫试剂盒中，所述的洗涤液为O. 05%的吐温-20 (TWEEN-20)磷酸盐缓冲液。所述的显色剂由显色剂A液和显色剂B液组成(例如，体积比为I :I)，显色剂A液为过氧化氢，显色剂B液为四甲基联苯胺溶液。在本专利技术检测水样中双酚A的酶联免疫试剂盒中，所述的酶标ニ抗的标记酶为辣根过氧化物酶。为方便现场检测和大量样本筛查，所述试剂盒还可以进一歩包括双酚A-BSA包被的96孔酶标板、双酚A标准溶液、底物显色液、浓缩洗涤液、終止液。另ー方面，本专利技术还提供了ー种检测样品中双酚A含量的方法，包括步骤(1)样品前处理；(2)用上述的试剂盒进行检測，向包被有双酚A抗原的酶标板孔中加入标准品或样品溶液，再加入抗双酚A多克隆抗体，孵育后洗涤拍干，加入酶标记ニ杭，孵育后洗涤拍干，显色、终上，用酶标仪測定吸光度值；(3)分析检测結果。基于上述技术方案，本专利技术的试剂盒和检测方法与现有技术相比具有如下技术优点I.本专利技术检测双酚A的试剂盒主要采有间接竞争酶联免疫測定法定性或定量样品中双酚A含量；对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批样品。2.本专利技术该试剂盒采用高特异性的双酚A多克隆抗体，主要试剂以工作液形式提供，可以减少试剂盒的操作步骤，为使用者节省时间并降低因操作步骤冗繁造成的误差。3.本专利技术具有灵敏度高、特异性强、高精确度、高准确度、对仪器设备要求低、试剂保存时间长、自动化程度高、无放射性同位素污染的等优点。附图说明图I是本专利技术专利检测水样双酚A的酶联免疫试剂盒中的双酚A的检测标准曲线图。具体实施例方式下面我们结合附图和具体的实施例来对本专利技术的检测水样双酚A的酶联免疫试剂盒及其检测方法做进ー步的详细阐述，以求更为清楚明了地理解本专利技术的成分组成和エ作流程，但不能以此来限制本专利技术的保护范围。一、先进行双酚A完全抗原合成。 (I)半抗原的合成。组织反应装置，将250mL三ロ反应烧瓶放入带有冰浴的IL玻璃容器中，玻璃容器盛有冰-盐水混合液，带有数字温度计可随时读数，然后将玻璃容器置于磁力搅拌器中；向三ロ烧瓶中加入磁力搅拌子，插入回流冷凝管(上装无水CaCl2干燥管和尾气吸收装置)、插入滴液漏斗。再向三ロ烧瓶中加入50mL N，N’- ニ甲基甲酰胺、I. 335g (0.01 mol)无水A1C13 和 2.280g (O. Olmol) BPA，搅拌，冰浴冷却至(TC 以下，缓慢滴加 O. 945g (O. 01 mol)氯こ酸，滴加过程中保持温度在O 5°C，滴加完毕，在0°C反应3 h，再补加I. 335g无水A1C13，升温至60 70°C反应，使溶液沸腾，回流3h。反应结束后，冷却至室温，然后经离心、过滤、干燥得到白色固体，即为羧基化双酚A (半抗原)。(2)双酚A完全抗原的合成及纯化。采用DCC+NHS法合成双酚A完全抗原，具体步骤如下I、将22mg半抗原(MW=228)溶于ImL N，N-ニ甲基甲酰胺，通过磁力搅拌的方式使其完全溶解成溶液。2、称取13. 3mg NHS和17. 4mg DCC加入上述溶液中，室温下磁力搅拌过夜，反应现象为本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测水样双酚A的酶联免疫试剂盒，其特征在于，酶联免疫试剂盒中含有：？(1)？包被有双酚A？BSA包被抗原的96孔酶标板；(2)？双酚A标准品溶液；？(3)？双酚A特异性抗体；？(4)？底物显色液；？(5)？终止液；？(6)？浓缩洗涤液；？(7)？酶标二抗溶液？。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴晓红，缪文彬，蒋伟，朱洪坤，陈相，
申请(专利权)人：上海出入境检验检疫局工业品与原材料检测技术中心，
类型：发明
国别省市：
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