本发明专利技术公开紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖，其特征在于，所述均一多糖的总糖含量为大于95％，且所述均一多糖的分子量大于2000KDa。本发明专利技术也公开上述均一多糖的制备方法。本方法提供的紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖的多糖含量更高、给药剂量更低、纯度更高，且其制备工艺亦适于工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及由紫芝液体深层发酵菌丝体得到的均一多糖GS-C-W-1、其制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的用途。
技术介绍
食药用真菌具有抗肿瘤抗病毒、降血脂、延缓衰老、护肝排毒、促进核酸和蛋白质生物合成等多种功效，在中国有悠久的使用历史。国内外大量研究表明，真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离得到的，为真菌类药物的药效部位，是能够控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老的一类活性多糖。紫芝(Ganoderma sinense)作为灵芝属真菌(2005版中国药典)，其有较明显的抗 肿瘤、提高免疫力的功效。由于其制备工艺不明确，多糖含量较低(一般<60%)。另外紫芝粗多糖组分复杂，主要药效部位和组分尚未阐明。且由于紫芝子实体资源稀少，市场上少见紫芝产品。紫芝粗多糖溶解度很差，粘度较大，颜色深，味重，其分子量从几千到上千万，分子量跨度很大，难找到合适的质量控制方法。研究表明，分子量是影响多糖组分药效的主要因素之一，若能将粗多糖分离纯化得到均一多糖，阐明其构效关系，不仅能提高药效水平，并且对质量控制有很大的帮助。中国专利200710045369. 4 “一种紫芝发酵方法及制得的紫芝菌丝体”公开了一种紫芝液体深层发酵产生菌丝体的方法，该菌丝体用水提醇沉法提取得到的粗多糖含量在39 75%，其体内药理实验中，口服剂量为40mg/kg/天时有一定抗肿瘤活性。中国专利200710045368. x “紫芝菌丝体胞内多糖及其制备方法和应用”公开了一种从紫芝液体深层发酵产生的菌丝体中提取制备得到粗多糖的方法。该方法涉及的水提醇沉法提取得到粗多糖含量在39 75%。其药理实验的剂量也为40mg/kg/day (给药方式口服喂药)。杨国红，杨义芳，金隽迪(紫芝液体深层发酵的抗肿瘤活性部位研究.中草药，2008，39 (6)877-880)对紫芝液体深层发酵的抗肿瘤活性多糖进行了研究，从紫芝菌丝体中提取得到胞内多糖，其药理实验的剂量也为40mg/kg/天(给药方式口服喂药)。中国专利0910574:200910197329. O “一种紫芝菌丝体抗肿瘤多糖组分GS-C及其制备”公开了一定分子量范围的紫芝液体深层发酵菌丝体多糖的制备。然而，以上专利申请和文章均未涉及多糖分子量、纯度及结构解析方面及药物作用机制方面的研究。鉴于现有技术的状况，需要寻找多糖含量高、具有明显的抗肿瘤活性且给药剂量比常规方法提取得到的粗多糖的更低的紫芝菌丝体多糖组分。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种多糖含量高、抗肿瘤活性更明显且给药剂量更低的紫芝菌丝体抗肿瘤多糖组分。如本专利技术所使用，“液体深层发酵”是发酵工业上常用的一种发酵方法，它的培养基是液态的。如本专利技术所使用，“菌丝体”是菌丝集合在一起构成一定的宏观结构。如本专利技术所使用，“均一多糖”是单糖通过聚合而成的多糖，聚合的糖有特定的结构单元。均一多糖可分为相同单糖形成的聚糖和不同单糖形成的杂多糖。本专利技术的第一个目的在于提供一种紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖，将其命名为GS-C-W-I，其特征在于，所述均一多糖的总糖含量为大于95 %，优选为大于97. I % ;且所述均一多糖的分子量大于2000KDa。根据本专利技术的一个优选的实施方式，本专利技术所述均一多糖GS-C-W-I中多糖的分子量大于2000KDa。根据本专利技术的一个优选的实施方式，经TLC和HPLC分析可以得知，所述均一多糖GS-C-W-I中的多糖主要由半乳糖和鼠李糖组成，所述半乳糖与葡萄糖的摩尔比为 3.3-3. 7 1，优选 3. 5 : I。进一步,经高碘酸氧化及Smith降解分析得知,所述均一多糖由(I — 6)_a_半乳糖连接的主链和具有通过I — 6取代在主链上的鼠李糖分支所组成。根据本专利技术的一个优选的实施方式，所述均一多糖在水中pH值为7. 16。本专利技术的第二个目的是提供一种紫芝液体深层发酵菌丝体提取物，其包含上述均一多糖，所述均一多糖的总糖含量为大于95%,优选为97. I %,且所述均一多糖的分子量大于 2000KDa。本专利技术通过柱层析将不同分子量多糖分离，从而得到紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-C-W-I，该均一多糖GS-C-W-I在降低给药剂量、并且不增加毒性的前提下能表现出一定的药效。柱层析能按照不同的原理将复杂的混合物分离纯化，已得到单一组分为目的。而分离纯化的关键在于所选的填料，根据本专利技术的一个优选的实施方式，本专利技术所选择的两个填料分别是阴离子交换树脂和葡聚糖凝胶，前者是根据被分离组分离子交换能力的差别而实现分离，后者根据被分离组分分子的线团尺寸而进行分离。本专利技术的第三个目的在于提供上述紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-C-W-I的制备方法，其特征在于，包括如下步骤紫芝液体深层菌丝体粗多糖经过柱层析，得到紫芝液体深层菌丝体均一多糖GS-C-W-I。上述制备方法简单易行、生产周期短、成本较低廉。根据本专利技术的一个优选的实施方式，柱层析步骤通过加负压进行。采取的仪器设备为螺动泵，自动收集仪。根据本专利技术的一个优选的实施方式，本专利技术所选择的两个填料分别是阴离子交换树脂和葡聚糖凝胶。根据本专利技术的一个特别优选的实施方式，柱层析选择的填料阴离子交换树脂为DEAE-cellulose 52。根据本专利技术的一个特别优选的实施方式，柱层析选择的填料葡聚糖凝胶的型号为Sephacryl S-300。本专利技术制备紫芝液体深层菌丝体均一多糖GS-C-W-I的具体步骤如下紫芝液体深层发酵菌丝体多糖组分GS-C(按照中国专利0910574 :200910197329.0 “一种紫芝菌丝体抗肿瘤多糖组分GS-C及其制备”中所述方法得到)经过阴离子交换树脂，葡聚糖凝胶柱得到紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-C-W-I。本专利技术利柱层析方法将紫芝液体深层发酵菌丝体粗多糖纯化成均一多糖，药理实验表明纯化后均一多糖GS-C-W-I有明显的增强机体免疫作用的活性。本专利技术方法得到的紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-C-W-I含量为大于95%,优选为97. I % (苯酚-硫酸法检测)，其分子量大于2000KDa。将该均一多糖部位进行药理实验，GS-C-W-I在低浓度下对促进的T淋巴细胞增殖活性有非常显著的作用，对LPS诱导小鼠脾脏B淋巴细胞增殖反应中，随着浓度升高，其增殖活性可以得到一定的提高，但是提高到一定浓度以后，增殖的促进作用开始减弱；提示GS-C-W-I通过提高机体免疫能力达到抗肿瘤作用。且未见对给药动物的毒性反应。因此，本专利技术的第三个目的在于提供上述紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-C-W-I在制备抗肿瘤药物和提高免疫力药物中的应用。 与现有的技术相比，本方法提供的紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-C-W-I的多糖含量更高、给药剂量更低、纯度更高，且其制备工艺亦适于工业化生产。附图说明图I为本专利技术实施例I所得紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-C-W-I的HPGPC图谱。图2为用HPGPC检测的实施例I步骤2)中w_l的分子量分布(MWD)结果。图3为实施例I步骤2)中w-1过Sephacry S-300的洗脱曲线。图4为用HPGPC检测的实施例I步骤2)中w-l_S300 (15-25)的分子量分布(MWD)结果。图5为本文档来自技高网...
【技术保护点】
紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖，其特征在于，所述均一多糖的总糖含量为大于95％，优选为大于97.1％，且所述均一多糖的分子量大于2000KDa。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨义芳，牛莉鑫，金隽迪，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，
类型：发明
国别省市：
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