一组gp96蛋白的多肽片段及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一组gp96蛋白的多肽片段及其应用。本发明专利技术提供的多肽片段，为序列表的序列1至序列18中任一所述的多肽片段。所述多肽片段具有如下应用：(1)预防和/或治疗肝炎；(2)预防和/或治疗肝炎引发的肝损伤；(3)抑制肿瘤细胞的增殖和/或生长和/或侵袭；(4)促进肿瘤细胞的凋亡；(5)抑制肿瘤生长；(6)促进肿瘤细胞中HER2蛋白与gp96蛋白的结合；(7)降低肿瘤细胞中HER2蛋白的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一组gp96蛋白的多肽片段及其应用。
技术介绍
热休克蛋白gp96存在于人和动物几乎所有细胞的内质网膜中，也存在于某些细胞的质膜上，它是热休克蛋白90家族(HSP90)中的成员。人的gp96蛋白由803个氨基酸组成，N端21个氨基酸为信号肽序列，因此成熟的蛋白由782个氨基酸组成。Gp96是糖蛋白，该分子拥有6个潜在的糖基化位点。犬类的gp96(与人的gp96高度同源，有98. 5的同源性)与ATP结合的晶体结构已经解析，单个分子分为N端结构域、中间(M)结构域和C端结构域，gp96以同源二聚体的形式存在,其N端结合ATP, C端形成二聚化,整个二聚体从C端到N端围绕分子中轴左旋扭曲形成扭曲的V字形。该分子与ATP的结合及发挥水解ATP的功能与其构象变化相关，其构象变化涉及N端结构域和M段结构域的90°的旋转，gp96构象变化引发与其它蛋白的结合或释放。HER2又称为erbB-2，它是原癌基因属于EGFR家族成员，编码一种酪氨酸激酶受体。该家族共有四个成员即HER1，HER2，HER3和HER4。HER2与该家族的其它三个成员之间可以形成异源二聚体，该异源二聚体与配体结合后，能活化下游信号通路。HER2在正常细胞和肿瘤细胞的生长、分化、恶性转化和抵抗化疗药物的过程中起着重要的作用。HER2的过表达可以向肿瘤细胞提供促有丝分裂的信号，导致肿瘤细胞生长速度加快，并抵抗细胞凋亡。HER2过表达的肿瘤恶性程度高、迁移性和浸润性强，对化疗药物更加不敏感，且治疗后复发的可能性更大。HER2在包括乳腺癌在内的多种上皮源性肿瘤中过度表达，与乳腺癌的发生、发展、预后等关系密切。大约四分之一的乳腺癌病人有HER2的基因扩增或蛋白过表达，HER2的过表达与淋巴结转移的数目和病人预后不良有关。因此HER2是极具发展前途的治疗靶位，抑制HER2基因表达对治疗HER2阳性的乳腺癌将有着很重要的意义。Trastuzumab (即赫塞汀)是一种人源化的HER2单克隆抗体，对HER2基因扩增和过表达的乳腺癌病人，trastuzumab单独应用或与其它药物联合应用有效率可分别达到25%或50%，赫塞汀目前已成为乳腺癌等治疗的一线药物，销售额位居肿瘤生物治疗药物前列。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一组gp96蛋白的多肽片段及其应用。本专利技术提供的多肽片段，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列18所示的氨基酸序列组成的多肽片段；(b)将序列18的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的添加且与具有相同功能的由序列18衍生的多肽片段。所述(b)中的多肽片段具体可为序列表的序列I至17中任一所示的多肽片段。本专利技术还保护所述的多肽片段的如下⑴至⑷中任一所述的应用(I)在与gp96蛋白结合中的应用；(2)在抑制胰酶消化gp96蛋白中的应用；(3)在制备与gp96蛋白结合的产品中的应用；(4)在制备抑制胰酶消化gp96蛋白的产品中的应用。本专利技术还保护一种产品，它的活性成分为所述多肽片段；所述产品的用途为如下(I)至(7)中的至少一种(I)预防和/或治疗肝炎；(2)预防和/或治疗肝炎引发的肝损伤；⑶抑制肿瘤细胞的增殖和/或生长和/或侵袭；⑷促进肿瘤细胞的凋亡；(5)抑制肿瘤生长；(6)促进肿瘤细胞中HER2蛋白与gp96蛋白的结合；(7)降低肿瘤细胞中HER2蛋白的含量。所述产品中，所述⑴和/或所述(2)中，所述肝炎为自体免疫性肝炎或重型肝炎。所述自体免疫性肝炎具体可为刀豆蛋白引发的自体免疫性肝炎。所述重型肝炎具体可为甘露糖引发的重型肝炎。所述产品中，所述(3)和/或所述(4)和/或所述(6)和/或所述(7)中，所述肿瘤细胞为乳腺癌细胞，优选为乳腺癌细胞SKBR3。所述产品中，所述(5)中，所述肿瘤是由乳腺癌细胞引发的，所述乳腺癌细胞优选 为乳腺癌细胞SKBR3。所述多肽片段的如下(I)至(7)中任一所述的应用也属于本专利技术的保护范围(I)制备预防和/或治疗肝炎的药物；(2)制备预防和/或治疗肝炎引发的肝损伤的药物；(3)制备抑制肿瘤细胞增殖和/或生长和/或侵袭的药物；(4)制备促进肿瘤细胞凋亡的药物；(5)制备抑制肿瘤生长的药物；(6)制备促进肿瘤细胞中HER2蛋白与gp96蛋白结合的药物；(7)制备降低肿瘤细胞中HER2蛋白含量的药物。所述应用中，所述(I)和/或所述(2)中，所述肝炎为自体免疫性肝炎或重型肝炎。所述自体免疫性肝炎具体可为刀豆蛋白引发的自体免疫性肝炎。所述重型肝炎具体可为甘露糖引发的重型肝炎。所述应用中，所述(3)和/或所述(4)和/或所述(6)和/或所述(7)中，所述肿瘤细胞为乳腺癌细胞，优选为乳腺癌细胞SKBR3。所述应用中，所述(5)中，所述肿瘤是由乳腺癌细胞引发的，所述乳腺癌细胞优选为乳腺癌细胞SKBR3。以上任一所述gp96蛋白具体可为如下(a)或(b)(a)由序列表中序列19所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列19的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列19衍生的蛋白质。本专利技术提供的18种多肽片段可竞争性地抑制该α-螺旋的功能，从而阻碍gp96的构象变化。免疫系统调控失调和过度活化是导致急性乙肝和慢加急性肝炎等肝衰竭疾病的重要原因，Gp96蛋白作为炎症因子，在急性乙肝和慢加急性肝炎等肝衰竭中发挥重要调控作用。Gp96与TLR2和TLR4相互作用，刺激IL-6、IL-12、TNF-α等细胞因子的产生，引发天然免疫；同时通过抗原呈递激活特异性CTL，引发细胞免疫，加重肝损伤。本专利技术提供的多肽片段可有效抑制gp96的免疫学功能，阻止由gp96引发的天然免疫和细胞免疫，减轻肝损伤症状，对急性乙肝和慢加急性肝炎等肝衰竭疾病有治疗作用。本专利技术提供的多肽片段抑制gp96后能明显下调HER2，而且gp96与HER2分子相互作用。通过所述多肽片段下调gp96来抑制HER2，对乳腺癌细胞SKBR3、ZR751细胞增殖有抑制作用，促进细胞凋亡，降低细胞的侵袭性，在小鼠体内对乳腺癌生长有明显抑制作用，因此本专利技术提供的多肽片段可用于治疗HER2过表达的肿瘤。附图说明图I为gp96蛋白的的N端结构域、中间(M)结构域和C端结构域；两个同源聚体分别用绿色和蓝色表示，左为侧面图，右为俯视图。图2为rgp96蛋白的鉴定图谱；1 :分子量标准；2 :步骤(二)的发酵液；3 :亲和层析后的洗脱液；4 :离子交换层析后的洗脱液；5 rgp96蛋白的western blot。具体实施例方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平 均值。BALB/c小鼠购自北京维通利华公司，体重为18-20g。PBS缓冲液8g NaCUO. 2gKC1、3. 625g Na2HPO4 · 12Η20、0· 24g KH2PO4，加水至 1L，调 ρΗ7· 3。实施例I、制备各种多肽片段根据三维晶体结构(图I)分析发现gp96蛋白第448-475位氨基酸残基形成一个α -螺旋，该α -螺旋可与分子内的其它序列相互作用，对于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽片段，是如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列18所示的氨基酸序列组成的多肽片段；(b)将序列18的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的添加且与具有相同功能的由序列18衍生的多肽片段。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孟颂东，陈立钊，胡坤，李杨，李鑫，闫晓丽，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：