本发明专利技术公开了一种口蹄疫疫苗新型佐剂的配方以及用该佐剂的口蹄疫疫苗制备方法。用氢氧化铝佐剂加上2种免疫增强剂PolyI:C和R848，再和口蹄疫抗原混合后免疫小鼠，发现该疫苗的效力类似甚至优于现行的矿物油进口佐剂ISA206。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及的是一种口蹄疫疫苗新型佐剂的配方以及疫苗制备方法。
技术介绍
口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是危害偶蹄动物的烈性传染病，尤其对主要畜种猪、牛、羊的危害特别严重，能造成畜种生产力下降和不良的社会影响，社会经济损失巨大。因该病传染性极强，世界动物卫生组织(FA0/0IE)将其列为头号必报烈性传染病，国际贸易予以严格限制。我国将该病列为一类动物传染病之首。在世界上许多国家，尤其是非洲、亚洲和南美洲国家，该病发生次数频繁，流行严重。此外，不时出现全球的流行性爆发。 疫苗是预防和控制口蹄疫采取的重要措施。口蹄疫免疫常用疫苗是油佐剂灭活疫苗。该苗的生产采用的是病毒接种细胞、组织培养物，病毒增殖后，收获培养物，加化学灭活剂(如二乙烯亚胺，BEI)使病毒失去感染性，与矿物油佐剂混合乳化制成疫苗。天然免疫应答不仅是机体抵抗病毒和其他病原侵染的第一道防线，也是启动获得性免疫应答的前提。Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)是近年来发现的在宿主抗病原微生物的免疫应答中起重要作用的细胞表面受体分子(Medzhitov R，Preston-Hurlburt P. Janeway CA Jr. A human homologue of the Drosophila Tollprotein signals activation of adaptive immunity. Nature 1997 ;388 :394-397)。迄今为止，在哺乳动物中已发现有10 15种TLR及其相应的配体或激动剂。TLRs广泛表达在各种免疫细胞，尤其是先天免疫细胞的表面，如巨噬细胞和树突状细胞等，主要介导细胞免疫。TLRs通过识别病原微生物及其特殊结构(TLRs激动剂一般是这种结构的类似物)，介导宿主相关细胞因子的分泌和天然免疫应答的产生。TLR3识别具有双链RNA的病毒感染，而单链RNA病毒在复制时能产生双链RNA，也能通过TLRs识别。病毒单链RNA的相应识别受体是TLR7和TLR8。TLR9是识别带有CpG DNA病毒的受体。一些TLRs激动剂，聚肌胞(polyl C)是 TLR3 的激动剂(Kumar H, Kawai T, Akira S. Pathogen recognitionin the innate immune response, Biochem J. 2009,420 (I) :1_16)。Resquimod(R-848)是 TLR7 和 TLR8 的激动剂(Gibson SJ, Lindh JM, Riter TR, Gleason RM, Rogers LM,Fuller AE, et al.Plasmacytoid dendritic cells produce cytokines and maturein response to the TLR7agonists, imiquimod and resiquimod. Cell Tmmunol 2002 ；218(1-2) :74-86)。氢氧化铝免疫佐剂的使用历史已有80多年，比油类佐剂更具有安全性和低反应性，已广泛应用于人兽疫苗，主要是形成抗原储存和缓释效应，刺激的细胞免疫较弱(Iyer S, HogenEsch H, Hem SL. Relationship between the degree of antigenadsorption to aluminum hydroxide adjuvant in interstitial fluid and antibodyproduction. Vaccine 2003 ；21 :1219-1223)。欧洲在2005年已经批准氢氧化铝吸附的LPS的类似物单磷酸酯A(MPL)作为乙肝疫苗的佐剂(Ennio De Gregorio, Elaine Trittoand Rino Rappuoli Alum adjuvanticity Unraveling a century old mystery, Eur.J. Immunol. 2008. 38 :2068-2071)。研究表明，氢氧化铝与CpG或LPS的联合使用免疫效果要优于其单独使用(Vajdy, M. , Selby, Μ.，Medina-Selby，A. , Coit, D. , Hall, J. , Tandeske,L. , Chien, D. et al. , Hepatitis C virus polyprotein vaccine formulations capableof inducing broad antibody and cellular immune responses. J. Gen. Virol. 2006. 87 2253-2262. Wack, A. , Baudner, B.C. , Hilbert, A. K. , Manini, I. , Nuti, S. , Tavarini,S. , Scheffczik, H. et al. , Combination adjuvants for the induction of potent,long-lasting antibody and T—cell re sponses to influenza vaccine in mice. Vaccine2008. 26 :552-561),这是由于氢氧化铝引起Th2效应，而TLRs引起Thl效应(Nemazee,D.，Gavin, A. , Hoebe, K. and Beutler, B. , Immunology Toll-like receptors and antibodyresponses. Nature 2006. 441 E4 ；discussion E4)。由于目前的文献所用的抗原模型均为乙肝、丙肝等人医病毒，用动物病毒做抗原模型少见报道。并且，氢氧化铝作为兽用病毒疫苗的佐剂使用较少，这是因为矿物油佐剂的效果要好于氢氧化铝，但是从动物福利以及肉食品质量的角度看，矿物油引起的疼痛、副反应、注射部位的结节等要远远大于氢氧化铝。并且，氢氧化铝佐剂更容易注射。因此，本研究准备联合使用2种不同的TLR激动剂，提高氢氧化铝的佐剂性，提高其细胞免疫效果，降低油性佐剂所带来的不良反应。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种口蹄疫复合型氢氧化铝佐剂的配方及其疫苗制备方法。本专利技术的技术方案如下一种口蹄疫疫苗新型复合氢氧化铝佐剂，含20mg/ml氢氧化铝胶体佐剂、200 μ g/ml的免疫增强剂PolyI :C和200 μ g/ml的R848。所述的口蹄疫疫苗的制备方法，包括以下步骤1、常规方法制备氢氧化铝胶体佐剂；2、常规方法制备并灭活口蹄疫抗原；3、在氢氧化铝胶体佐剂中分别加入过滤灭菌的免疫增强剂PolyI:C和R848，浓度均为200 μ g/ml，制得口蹄疫复合型氢氧化铝佐剂，氢氧化铝胶体佐剂浓度为2011^/1111。4、将口蹄疫复合型氢氧化铝佐剂与口蹄疫抗原以体积比I : I混合，置于4°C保存3天 5天本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种口蹄疫疫苗新型复合氢氧化铝佐剂，其特征在于，含20mg/ml氢氧化铝胶体佐剂、200μg/ml的免疫增强剂PolyI:C和200μg/ml的R848。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李冬，刘在新，周春雪，卢曾军，陈应理，孙普，谢宝霞，曹轶梅，付元芳，包慧芳，李平花，白兴文，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。