兔肺炎克雷伯氏菌凝集原及其应用制造技术

本发明专利技术涉生物技术领域，特别涉及兔肺炎克雷伯氏菌的凝集反应实验技术，兔肺炎克雷伯氏菌凝集原，由经复红染色液染色的兔肺炎克雷伯氏菌液制备而成；所述应用方法具体为凝集反应实验中的应用方法：将所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与凝集素结合，判断凝集结果；本发明专利技术不需要昂贵的仪器和试剂、成本低、快速、操作简便、对操作人员技术要求不高、结果直观，适合基层现场检测应用，兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试剂盒的检测抗原进行了染色，凝集颗粒或凝集块呈红色，更易于观察，其检测方法既可以定量检测兔血清抗体效价，又可以定性检测兔肺炎克雷伯氏菌抗原，特别适合基层兽医站、兔场现场诊断兔肺炎克雷伯氏菌。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉生物
，特别涉及兔肺炎克雷伯氏菌的凝集反应实验技木。
技术介绍
兔肺炎克雷伯氏菌病(Klebsiellosis)是由肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)引起兔的肺炎和其它器官化脓性炎症为特征的散发性疾病，常呈地方性流行，很少造成大規模流行。家兔发病后表现出一系列的呼吸道症状，消化紊乱，母兔流产，严重者发生败血症而死亡。各种品种、年龄和性别的兔都对本菌有易感性，以断奶前后的仔兔和妊娠母兔发病率最高，子兔感染后极度衰竭，迅速死亡，危害十分严重。由于本病的临床症状和病理变化缺乏特征性，仅根据临床资料难以作出准确的诊断，通常只能在有条件的实验室做细菌学检查才能确诊，这样就会耽误防治的最佳时间。为了在基层兽医站或养兔场能快速诊断本病，以便迅速制定控制措施，建立ー种快速检测试剂盒及检测方法十分必要。目前，细菌病检测方法通常有形态学观察、培养特性鉴定、生化特性鉴定、免疫学检测和核酸检测。兔肺炎克雷伯氏菌病的诊断主要通过细菌分离培养、形态学观察、生化鉴定、动物接种试验，这种方法繁琐、费吋。免疫学检测方法主要有荚膜肿胀试验、平板凝集反应、SPA协同凝集试验、对流免疫电泳、间接免疫荧光试验。荚膜肿胀试验虽然快速、方便，但需要借助显微镜观察，在很多基层兽医站和兔场都无法进行。对流免疫电泳、间接免疫荧光试验虽然准确，但对操作人员的技术要求较高，且需要较昂贵的设备。PCR检测法灵敏度高、准确，但需要昂贵的仪器和试剂，检测成本高，对操作人员技术要求较高，不适合基层用。通过文献检索尚未发现兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试剂盒及检测方法的相关研究报道，特别是用复红对兔肺炎克雷伯氏菌进行染色后再进行微量凝集试验的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的之ー在于提供ー种兔肺炎克雷伯氏菌凝集原，其可以作为凝集反应实验试剂。凝集反应是ー种血清学反应，颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体结合，在有电介质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。參与凝集反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。传统的凝集原不经过任何色素染色。本技术方案必须经过染料染色，确保实验结果可直观判断。传统的染料包括结晶紫、台盼蓝、美兰、吖啶橙、罗丹明及复红染液等。设定了众多平行实验筛选出兔肺炎克雷伯氏菌凝集原，由经复红染色液染色的兔肺炎克雷伯氏菌液制备而成。进ー步，所述兔肺炎克雷伯氏菌液中每毫升含有80-120亿个兔肺炎克雷伯氏菌，所述复红染液与所述兔肺炎克雷伯氏菌液的体积比为8-12 I。作为优选，所述兔肺炎克雷伯氏菌液中每毫升含有100亿个兔肺炎克雷伯氏菌，所述复红染液与所述兔肺炎克雷伯氏菌液的体积比为10 I。本专利技术的目的之ニ在于提供上述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原的应用方法，该方法操作简单，便于掌握，无需借助昂贵精密的仪器。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为所述的兔肺炎克雷伯氏菌凝集原的应用方法，所述应用方法具体为凝集反应实验中的应用方法将所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与凝集素结合，判断凝集结果。所述应用方法还设有平行实验组，包括阳性对照组和/或阴性对照组和/或空白对照组。可以通过同空白对照组、阴性对照组及阳性对照组比对数据，进一歩判断样品为阴性或阳性。基于上述原理，上述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原的应用方法，既可以用于对兔肺炎克雷伯氏菌的定性检测，又可以用于兔肺炎克雷伯氏菌抗体定性或定量检测，或测其效价。作为优选方案,所述凝集反应实验为微量凝集反应实验，以96孔微量反应板为载体进行。 作为优选方案，所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与凝集素的体积比为I : I。作为优选方案，所述凝集结果的判断方式有肉眼观察。肉眼观察或许具备一定的主观性，一般技术员基本可实现定性检测；为了降低主观性导致的误差，可设平行实验组，包括阳性对照组和/或阴性对照组和/或空白对照组；肉眼观察判定凝集结果的程度标准为++++:孔底形成红色的伞状沉淀，或沉淀物呈红色的片状、块状或颗粒状，直径彡O. 20cm,即100%凝集；+++ :菌体凝集呈红色的片状、块状或颗粒状，直径O. 15cm-0. 19cm,，即75%凝集；++ :孔底有凝集沉淀，呈红色的块状或小片絮状物，直径O. IOcm-O. 14cm,即50%凝集;+ :空底红色凝集沉淀或仅有凝集沉淀的痕迹，直径O. Olcm-O. 09cm,即25%凝集；-:液体呈浑浊、不透明，无红色凝集沉淀或凝集沉淀的痕迹；以出现“++”以上判为所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与所述凝集素凝集；或以出现“++”的血清最高稀释度为待检血清效价，如血清稀释度为I : I时未出现凝集反应，则待检血清效价仍记为O,如果出现凝集反应,则记为待检血清效价记为I 2 ;生理盐水对照中抗体凝集效价应< I : 2。进ー步，所述应用方法是检测兔肺炎克雷伯氏菌抗体的方法，具体为将所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原与待测样品充分混合，当所述兔肺炎克雷伯氏菌凝集原和所述待测样品发生凝集时，判定待测样品中存在兔肺炎克雷伯氏圃抗体。作为优选方案，所述待测样品为血清，作1-256倍体积稀释。作为优选方案，所述判断结果为吸光度检测，判断标准为当OD28tl ^ O. 5时，判为不凝集；0. 2 < OD280 < O. 5时，判为可疑；0D28(i く O. 2时判为凝集。与现有的技术相比，本专利技术的有益效果在于兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试剂盒及检测方法与平板凝集反应、SPA协同凝集试验相比较，共同的优点是不需要昂贵的仪器和试剂、成本低、快速、操作简便、对操作人员技术要求不高、结果直观，适合基层现场检测应用，但平板凝集反应和SPA协同凝集试验的检测抗原未染色，凝集颗粒模糊、不便观察，而兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试剂盒的检测抗原进行了染色，凝集颗粒或凝集块呈红色，更易于观察，其检测方法既可以定量检测兔血清抗体效价，又可以定性检测兔肺炎克雷伯氏菌抗原，特别适合基层兽医站、兔场现场诊断兔肺炎克雷伯氏菌病，同时还可以用于兔肺炎克雷伯氏菌病的检疫和流行病学调查。本专利技术建立了兔肺炎克雷伯氏菌微量凝集试剂盒及检测方法，快速、特异性强，既可用于检测兔肺炎克雷伯氏菌抗体，又可用于检测兔肺炎克雷伯氏菌抗原，用于兔肺炎克雷伯氏菌病的快速诊断、检疫及流行病学调查。用该试剂盒及检测方法检测兔肺炎克雷伯氏菌抗体或抗原，凝集颗粒或凝集块呈红色，结果易判定。用该试剂盒及检测方法操作简便，不需要昂贵的仪器设备和试剂，一般技术员都可以操作，检测成本低，适合在基层和兔场应用。具体实施例方式抗原是指能够刺激机体产生(特异性)免疫应答，井能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫效应(特异性反应)的物质。凝集原是指參与凝集反应的抗原。本专利技术中的凝集原均指兔肺炎克雷伯氏菌凝集 原。凝集素是指參与凝集反应的抗体。本专利技术中涉及的凝集素均指兔肺炎克雷伯氏菌凝集素。凝集反应实验ー种血清学反应。颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体结合，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。待测样品的形式可以为液体或固体；通过检测液体或固体中是否含有兔肺炎克雷伯氏菌抗体。所述抗体主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。所述抗体可以是体内分泌的，也可以是通过生物学方法体外获得的。主要本文档来自技高网...

【技术保护点】
兔肺炎克雷伯氏菌凝集原，其特征在于：由经复红染色液染色的兔肺炎克雷伯氏菌液制备而成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王孝友，杨睿，沈克飞，徐登峰，付利芝，黄伟，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：