本发明专利技术公开了一种bumetanide在抑制肝癌转移中的应用。布美他尼(bumetanide)可用于制备抑制肝癌细胞增殖和/或侵袭和/或转移的药物，制备治疗肝癌的药物，制备降低肝癌细胞中磷酸化NKCC1蛋白含量的产品。布美他尼(bumetanide)可以降低肝癌细胞中磷酸化NKCC1蛋白的含量，从而抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和转移。本发明专利技术肝癌的治疗具有重大价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种bumetanide的新用途,具体涉及bumetanide在抑制肝癌细胞转移中的应用。
技术介绍
原发性肝癌中90% 以上为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC),HCC 是一种很常见的、致死率非常高的恶性肿瘤，每年约650，000人死于HCC，且其发病率有逐年增高的趋势。HCC多发于东南亚和非洲等发展中国家，其中约有50%以上发生于中国，位居我国癌症死亡率的第二位，另外，在发达国家HCC的发病率也在逐年上升。HCC的早期诊断一直是临床治疗中的瓶颈。临床上的手术切除肝脏肿瘤以及肝移植被认为是HCC获得根治的 最佳手段，但是仅仅有10-20%的HCC病人适合外科手术治疗；即使是根治性切除，5年内仍有60-70%的病人会出现HCC的转移复发，而局部治疗的转移复发率则更高。HCC的转移是影响治疗效果和预后的最大障碍，是导致其高死亡率的主要原因。布美他尼(bumetanide)是一种利尿剂,主要抑制肾小管髓袢升支厚壁段对NaCl的主动重吸收，对近端小管重吸收Na+也有抑制作用，但对远端肾小管无作用。能抑制前列腺素分解酶的活性，使前列腺素E2含量升高，从而具有扩张血管作用。扩张肾血管，降低肾血管阻力，使肾血流量尤其是肾皮质深部血流量增加，在布美他尼的利尿作用中具有重要意义，也是其用于预防急性肾功能衰竭的理论基础。另外，布美他尼能扩张肺部容量静脉，降低肺毛细血管通透性，加上其利尿作用，使回心血量减少，左心室舒张末期压力降低，有助于急性左心衰竭的治疗。由于布美他尼可降低肺毛细血管通透性，为其治疗成人呼吸窘迫综合征提供了理论依据。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种布美他尼(bumetanide)在抑制肝癌转移中的应用。本专利技术提供了布美他尼(bumetanide)在制备抑制肝癌细胞增殖和/或侵袭和/或转移的药物中的应用。所述肝癌细胞可为肝癌细胞株MHCC97H或Huh7细胞。本专利技术还保护布美他尼(bumetanide)在制备治疗肝癌的药物中的应用。所述肝癌可为肝癌细胞株MHCC97H或Huh7细胞引起的。本专利技术还保护布美他尼(bumetanide)在制备降低肝癌细胞中磷酸化NKCCl蛋白含量的产品中的应用；所述NKCCl蛋白为如下⑴或(II)(I)由序列表中序列I所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(II)将序列表中序列I所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与癌细胞增殖和/或迁移和/或浸润和/或侵袭相关的由序列I衍生的蛋白质。所述肝癌细胞为肝癌细胞株MHCC97H或Huh7细胞。本专利技术还保护一种抑制肝癌细胞增殖和/或侵袭和/或转移的药物，它的活性成分为布美他尼(bumetanide)。所述肝癌细胞为肝癌细胞株MHCC97H或Huh7细胞。本专利技术还保护一种治疗肝癌的药物，它的活性成分为布美他尼(bumetanide)。所述肝癌为肝癌细胞株MHCC97H或Huh7细胞引起的。本专利技术还保护一种降低肝癌细胞中所述磷酸化NKCCl蛋白含量的产品，它的活性成分为布美他尼(bumetanide)。所述肝癌细胞为肝癌细胞株MHCC97H或Huh7细胞。质膜蛋白与肿瘤的转移密切相关。目前已发现的药物靶标大部分定位于细胞质膜，许多与肿瘤发生发展相关的质膜蛋白可作为重要的药物靶标。此外，部分质膜蛋白可从 细胞表面脱落进入体液，成为潜在的生物标志物。因此针对HCC细胞质膜蛋白的研究不仅能促进HCC转移机理的揭示，还有利于发现检测肿瘤转移的生物标志物和临床治疗的药物靶点。Na-K-Cl协同转运蛋白(NKCCl)定位于细胞质膜，在高转移肝癌细胞株中表达上调，介导转运Na、K、Cl离子进出细胞，维持和调节细胞体积和离子浓度，调节细胞的生长和发育。布美他尼(bumetanide)可以降低肝癌细胞中磷酸化NKCCl蛋白的含量，从而抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和转移。本专利技术肝癌的治疗具有重大价值。附图说明图I为活性实验检测不同转移能力肝细胞癌细胞株中NKCCl的活性。图2为活性实验检测bumetanide对肝癌细胞株MHCC97H和Huh7细胞中NKCCl活性的影响。图3为Western blot检测bumetanide对肝癌细胞株MHCC97H和Huh7细胞中NKCCl的活性影响。图4为bumetanide对肝癌细胞株MHCC97H和Huh7细胞体外增殖能力的影响。图5为bumetanide对肝癌细胞株MHCC97H和Huh7细胞体外侵袭能力的影响。图6为bumetanide对肝癌细胞株MHCC97H和Huh7细胞MMP-2分泌量的影响。具体实施例方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。肝癌细胞株MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3购自复旦大学附属中山医院肝癌研究所，其转移能力依次增强。Huh7细胞购自ATCC。鸡抗人NKCCl —抗购自GenWay Biotech公司。鼠抗人GAPDH—抗购自Prote inTech Group JRP标记的抗鸡的二抗购自Abcam公司。HRP标记的抗兔的二抗、HRP标记的抗鼠的二抗均购自北京中杉金桥生物技术公司。Cell CountingKit-8 (CCK-8试剂盒)购自株式会社同仁化学研究所。BD BioCoat Matrigel InvasionChamber购自美国BD公司。BCA法蛋白测定试剂盒购自Thermo。布美他尼(bumetanide)购自 sigma 公司。pluronic acid 与 sodium binding benzofuran isophthalate acetoxymethyl esters-AM(SBFI)购自Invitrogen公司。DMEM高糖培养基购自美国Hyclone公司。实施例中所用的PBS缓冲液均为将O.8g NaCl,O. 02g KCl，O. 358g Na2HPO4-12H20,0. 024g KH2PO4 溶于 IOOOmL 水得到的；pH7. 4。细胞裂解液质量百分含量为4%的SDS，质量百分含量为2%的DTT，120mMTris-Cl (pH6. 8)，5mM氟化钠，ImM矾酸钠，IOmM焦磷酸钠，蛋白酶抑制剂(Cocktail)。实施例I、比较不同转移能力肝癌细胞株中NKCCl活性的表达情况本实施例中，通过检测蛋白液中的钠离子含量比较不同肝癌细胞株中NKCCl活性的表达情况，相关机理见文献 AR. Jayakumar, ML. Liu, M. Moriyama. et al. Na-K-ClCotransporter-1 in the Mechani sm of Ammonia-induced Astrocyte Swelling. TheJournal of Biological Chemi stry.2008,283 (49) :33875。 分别将MHCC97L、MHCC97H和HCCLM3进行如下操作I、将细胞按2X IO5个/ml的密度接种于六孔培养板，本文档来自技高网...
【技术保护点】
布美他尼在制备抑制肝癌细胞增殖和/或侵袭和/或转移的药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姜颖，贺福初，周亚亚，孙薇，林巍然，魏汉东，
申请(专利权)人：北京蛋白质组研究中心，
类型：发明
国别省市：
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