一种植物离体茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法技术

本发明专利技术涉及一种植物离体茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法，即将植物主茎或者分枝砍下，放置在温度和湿度恒定的密闭环境，进行核盘菌接种。通过记录菌斑扩展长度，衡量材料的抗病性强弱。与传统的菌核病茎杆抗性鉴定方法相比较，本发明专利技术在可控环境条件下进行，发病条件一致，接种鉴定稳定；方法简单，周期短，接种效率高；接种部位灵活，可对单株进行重复鉴定，适合对材料进行大规模接种鉴定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物病虫害抗性鉴定方法，具体涉及ー种植物离体茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法。
技术介绍
菌核病可危害400多种植物，比如油菜，每年因菌核病的危害我国油菜减产10-80%。培育抗病品种是防治菌核病危害最经济的途径。简单易行，准确的菌核病抗性鉴定方法是筛选抗病材料的关键。目前菌核病抗性鉴定有叶片抗性鉴定和茎杆抗性鉴定，叶片抗性鉴定包括离体叶片接种、叶腋接种、叶柄接种、子叶接种等。这些方法虽然操作简单，但叶片的抗性并不能完全反映茎杆的抗性。菌核病浸染茎杆后，将导致产量严重降低。对茎杆抗性鉴定有田间茎杆牙签接种法和茎杆菌丝块捆绑法，两种方法简单易行，适合大規模接种鉴定，但容易受大田环境条件的影响，接种鉴定不稳定。比如遇到干燥等不利于菌核病发病的气候条件，将导致大田接种鉴定的失败。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种简单、稳定的茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法。本方法在室内可控条件下，创造适宜菌核病浸染的温度和湿度环境，对离体的茎杆进行接种鉴定，根据菌斑的长度来衡量材料抗菌核病的強弱。本专利技术的技术方案如下一种离体茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法，首先，用打孔器沿铺满核盘菌菌丝的PDA培养基的边缘打孔，获得大小一致的PDA菌丝块，作为接种体用于离体茎杆接种；然后截取茎杆并将离体茎杆转移至室内，在茎杆上制造与接种体相同形状的创伤后，覆盖接种体，在温度和湿度恒定的室内环境，进行核盘菌接种；记录菌斑扩展长度，衡量抗菌核病的強弱。本专利技术的优点该接种方法是在实验室可控环境条件下，发病条件一致，接种鉴定稳定，方法简单，接种效率高，周期短，接种部位灵活，可对单株进行重复鉴定，适合对材料进行大規模接种鉴定。附图说明图I为接种油菜茎杆后第3天菌斑的长度。具体实施例方式以下以鉴定芸苔属茎杆菌核病抗病性为本专利技术方法的ー种具体实施方式，但并不是对本专利技术方法的限定，任何不超离本专利技术实质内容的变换，仍应属于本专利技术的保护范围。实施例II.接种体的准备I)病原菌采集于重庆市油菜工程技术中心试验田，其纯化过程为将采集的菌核接种于马铃薯葡萄糖培养基(PDA)中，于22°C黑暗培养2天，从边缘挑取菌丝接入新的PDA培养基，2天后再次将边缘的菌丝转接，如此反复，直至培养基中长出的菌丝不含其它杂菌为止。其中PDA培养基的制备为200g 土豆、20g蔗糖和15g琼脂粉，定容到1し2)离体实验接种体(PDA菌丝块)制备取活化后的菌种ー小块，接种于装有PDA培养基的无菌培养皿中央，于22°C、85%湿度条件下培养2天，待菌丝均匀铺满培养基表面后，用直径6_的打孔器沿培养皿边缘打孔，获得的PDA菌丝块即可用于离体茎杆接种。2.离体茎杆接种在终花期，在距地面20cm处截取约30cm长的主茎并截取约30cm长最底端的2根侧枝，将茎杆两端用保鲜膜缠绕(以防止水分散失)。以17份芸薹属植物为例进行菌核病接种鉴定。这些材料包括3份白菜(B. rapa)，2份甘蓝(B. oleracea)，6份甘蓝型油菜(B. napus)，4份芥菜型油菜(B. juncea)和2份埃塞俄比亚芥菜(B. carinata)，其具体材料见表I。 接种是在ー个面积约20平方米、可控温的接种室内进行。首先将lX2m2的三合板放置于大小相称、高40cm的铝合金框架上，在三合板铺上湿毛巾，上面垫ー层滤纸。将取回的茎杆置于备好的滤纸上，用直径为4_的打孔器在茎杆表面打2个孔，从而造成表面创伤，2个孔间的间隔为10cm。将直径为6mm的PDA菌丝块带菌面紧贴于创伤处(图I)。接种完毕后，在三合板上方再放置ー个相同大小的铝合金框架，最后用塑料膜将三合板和上方的铝合金框架一同密闭，并保持密闭间的湿度維持在90-95%内ー恒定湿度。室内温度控制在22-24摄氏度内ー恒定温度。离体接种3天后，测量菌斑的长度，发现材料间的菌斑大小有差异明显，其具体表现见表I。主茎和侧枝菌斑的大小存在显著的正相关(r=0.657，P=O. 911)。主茎和侧枝的菌斑长度和茎杆的直径不存在显著相关性(主茎r=0. 056，P=O. 824 ;侧枝r=-0. 021，P=O. 935)。本实施例结果如表I。权利要求1.ー种植物离体茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法，首先，用打孔器沿铺满核盘菌菌丝的PDA培养基的边缘打孔，获得大小一致的PDA菌丝块，作为接种体；然后截取植物茎杆并将离体茎杆转移至室内，在茎杆上制造与接种体相同形状的创伤后，覆盖上接种体，在温度和湿度恒定、适宜菌核病浸染的密闭环境，进行核盘菌接种；记录菌斑扩展长度，衡量抗菌核病的強弱。2.根据权利要求I中所述的离体茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法，其特征在于所述植物为油菜等茎杆容易感染菌核病的植物。3.根据权利要求I中所述的植物离体茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法，其特征在于离体接种的茎杆可以为主茎、侧枝、茎段。4.根据权利要求I或2中所述的植物离体茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法，其特征在于适宜菌核病浸染的环境为，在22-24°C范围内设定ー个恒定温度，在90 -95%湿度范围5.根据权利要求I或2所述的离体茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法，其特征在于在接种后第3到4天测量菌斑生长的长度。全文摘要本专利技术涉及，即将植物主茎或者分枝砍下，放置在温度和湿度恒定的密闭环境，进行核盘菌接种。通过记录菌斑扩展长度，衡量材料的抗病性强弱。与传统的菌核病茎杆抗性鉴定方法相比较，本专利技术在可控环境条件下进行，发病条件一致，接种鉴定稳定；方法简单，周期短，接种效率高；接种部位灵活，可对单株进行重复鉴定，适合对材料进行大规模接种鉴定。文档编号C12Q1/18GK102808015SQ20121022995公开日2012年12月5日 申请日期2012年7月4日 优先权日2012年7月4日专利技术者钱伟, 梅家琴, 丁一娟, 魏大勇 申请人:西南大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植物离体茎杆接种鉴定菌核病抗性的方法，首先，用打孔器沿铺满核盘菌菌丝的PDA培养基的边缘打孔，获得大小一致的PDA菌丝块，作为接种体；然后截取植物茎杆并将离体茎杆转移至室内，在茎杆上制造与接种体相同形状的创伤后，覆盖上接种体，在温度和湿度恒定、适宜菌核病浸染的密闭环境，进行核盘菌接种；记录菌斑扩展长度，衡量抗菌核病的强弱。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：钱伟，梅家琴，丁一娟，魏大勇，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：