本发明专利技术提供一种土茯苓提取物的制备方法及其在肿瘤治疗中的应用。所述土茯苓提取物的制备方法包括下述步骤：用选自水、甲醇、乙醇的至少一种溶剂对土茯苓原料进行提取，获得土茯苓总提取物的步骤；用石油醚对土茯苓总提取物进行提取，获得土茯苓石油醚部分提取物的步骤；进一步用乙酸乙酯进行提取，获得土茯苓乙酸乙酯部分提取物的步骤；进一步用水饱和正丁醇进行提取，获得土茯苓水饱和正丁醇部分提取物和土茯苓水部分提取物，进一步通过对土茯苓水部分提取物进行醇沉，可以得到水上清部分提取物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种土茯苓提取物、其制备方法及其应用，特别是涉及土茯苓水部分及水上清部分提取物及其制备方法，以及土茯苓提取物在抗肿瘤药物的制备中的应用。
技术介绍
恶性肿瘤是严重威胁人类生命的常见病和多发病，其死亡率仅次于心血管疾病而列居第二，且发生率有逐年上升的趋势，因此，抗肿瘤药物的研究一直是医学研究的热点。作为肿瘤治疗主要手段的化疗虽然有较好的疗效，但是常引起骨髓抑制、免疫功能低下等副反应，使患者难以坚持治疗，并且化疗药物在治疗过程中出现的耐药性已成为目前临床治疗中的难题之一。因此，有必要寻求疗效好、毒副作用小的治疗方法和药物。随着分子生物学和分子药理学对肿瘤本质和作用机制方面的阐述，中药天然药物 抗肿瘤药物的研究水平也有了显著提高并展示出了广阔的前景。其在抑制、杀伤肿瘤细胞，改善症状与体征、以及减轻放化疗不良反应等方面，都发挥着重要作用。目前广泛用于临床的抗肿瘤药物，如紫杉醇、喜树碱、长春花碱等，都是天然植物的提取物，它们在肿瘤治疗中疗效确切、不良反应小，成为肿瘤治疗的重要药物。例如，紫杉醇(paclitaxel)是1971年由Wani等首先从短叶红豆杉中提取分离出来的，具有良好抗肿瘤活性，目前被广泛用于治疗卵巢癌、乳腺癌、肺癌及与艾滋病(acquiredimmune deficiency syndrome,AIDS)相关的Kaposi’s肉瘤，由于其作用机制独特、抗癌疗效显著，已成为目前全球销售量排名第一的抗肿瘤药物。近年来，对白藜芦醇、鬼白毒素、人参、青蒿素、风车子抑碱、小檗碱、苦参类生物碱以及天然黄酮类化合物的抗肿瘤作用的研究也日渐升温。可见，中药天然药物正成为抗肿瘤药物研究的热点。由于肿瘤的发生发展是一个涉及到多基因改变的复杂过程，上述的单一化合物虽然取得了一定的抗肿瘤疗效，但其与其它化疗药物一样，存在耐药与毒副作用的问题。而某些具有抗肿瘤作用的天然中药，其抗肿瘤作用可能是由同类物质的不同化合物共同发挥作用取得的，因此，如果能从中抗肿瘤作用的天然中药中获得具有抗肿瘤作用的有效组分，将有可能作为抗肿瘤药物直接用于临床，其组分中的不同化合物可通过对肿瘤细胞的多靶点作用，达到有可能优于单一靶点的临床治疗效果。土获茶为百合科植物光叶菝葜Smilax glabra Roxb.的干燥根莖，它分布长江流域以南等地，是一种常用中药材，其味甘淡，性平，入肝、胃经，为清热祛湿，泄浊解毒的常用中药。《本草纲目》中称它“健脾胃，强筋骨，去风湿，利关节，止泄湾，治拘挛骨痛，恶疮痈肿，解汞粉银朱毒。”对于土茯苓的抗肿瘤作用，非专利文献I报道了土茯苓对黄曲霉毒素BI (AFBl)致大鼠肝癌的作用，进食土茯苓的大鼠肝r-谷氨酰转肽酶(r-GT)灶小于对照组每个灶的平均面积，差别非常显著，表明土茯苓对AFBl致肝癌有一定抑制作用。另外，已知土茯苓在体外试验对子宫颈癌培养株系JTC226有抑制作用，抑制率在90%以上。但土茯苓对N- 丁基-N-(4-羟丁基)亚硝胺诱发大鼠的膀胱肿瘤无明显影响(参见非专利文献2)。另外，对于土茯苓具有的活性化学成分，普遍认为土茯苓化学成分中具有明显药理作用的为皂甙类、黄酮类(参见非专利文献3)。作为抗肿瘤活性成分，非专利文献4中记载了土茯苓总皂苷对体外培养的艾氏腹水癌(EAC)、肉瘤S180和肝癌(H22)细胞均具有一定的细胞毒性，对荷瘤小鼠S180具有一定的抑制作用，但其认为土茯苓总皂甙在体内对EAC和H22小鼠无明显抑瘤作用，临床上土茯苓主要与其他中草药配伍治疗肿瘤。但是，如上所述，土茯苓总皂甙的抗肿瘤方面的效果并不理想，对于体内抗肿瘤效果，仅在非专利文献I中报道了土茯苓提取物对肝癌有一定抑制作用。关于土茯苓总提取物、尤其是非皂甙、黄酮部分的体内抗肿瘤活性没有任何报道，对于土茯苓提取物单独作为活性成分在抗肿瘤药物中的应用也没有任何记载。 现有技术非专利文献I :严瑞琪，陈志英，覃国忠，等.当归等三种中药及联苯双酯对黄曲霉素BI致大鼠肝癌作用的影响.癌症，1986 ;5 (2) :141非专利文献2 :杨德安，石炳毅，李炎唐，等.猪芩、土茯苓和硒对膀胱化学致癌抑制作用的实验研究〔J〕.中华医学杂志，1987,67(11) 622.非专利文献3 :土茯苓品质与药理研究进展，沙飞等，中药材第29卷第5期，2006年5月非专利文献4 :土茯苓总皂甙的抗肿瘤作用研究，邱光清等，中药药理与临床2001 ；17(5) 1
技术实现思路
本专利技术是鉴于上述问题完成的，其提供一种土茯苓提取物、其制备方法及其应用，尤其是土茯苓水部分或水上清部分提取物及其制备方法，以及土茯苓提取物在抗肿瘤药物的制备中的应用；所述土茯苓提取物具有优异的抗肿瘤效果，能够确实地用于抗肿瘤药物的制备。本专利技术人在对土茯苓总提取物进行研究时意外地发现，其不仅在体外显出了抗肿瘤作用，在体内也显出了明显的抗肿瘤作用。进一步对活性成分进行研究时发现，利用系统溶剂法得到的乙酸乙酯部分、水部分和水上清部分也显示出了具有抑制肿瘤细胞体内/外增殖的活性，进一步研究发现，水部分抑瘤活性呈现明显的量效关系，并且主要的活性成分集中在土茯苓的水上清部分。由此完成了本专利技术。具体地说，本专利技术涉及下述的技术方案。I、一种土茯苓提取物的制备方法，所述制备方法包括下述步骤用选自水、甲醇、乙醇的至少一种溶剂对土茯苓原料进行提取，回收溶剂获得土茯苓总提取物的步骤；用水将所述土茯苓总提取物溶解，用石油醚进行提取，获得土茯苓石油醚部分提取物的步骤；进一步用乙酸乙酯进行提取，获得土茯苓乙酸乙酯部分提取物的步骤；进一步用水饱和正丁醇进行提取，获得土茯苓水饱和正丁醇部分提取物和土茯苓水部分提取物，所述土茯苓提取物至少含有所述土茯苓水部分提取物。2、如上述I所述的土茯苓提取物的制备方法，其中，进一步包括对土茯苓水部分提取物进行醇沉，获得水上清部分提取物和粗多糖的步骤，所述土茯苓提取物至少含有所述土茯苓水上清部分提取物。3、一种土茯苓提取物，其是通过上述I或2所述的土茯苓提取物的制备方法得到的土茯苓水部分提取物或土茯苓水上清部分提取物。4、一种抗肿瘤药物，其中，所述抗肿瘤药物含有上述3所述的土茯苓提取物作为活性成分。5、如上述4所述的抗肿瘤药物，其中，所述抗肿瘤药物是治疗肝癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、食管癌、鼻咽癌或肺癌等肿瘤的药物。6、土茯苓提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，其中，所述土茯苓提取物是选自上述3所述的土茯苓提取物。7、如上述6所述的土茯苓提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，其中，所述抗肿瘤药物是治疗肝癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、食管癌、鼻咽癌或肺癌等肿瘤的药物。8、一种抗肿瘤药物，其中，所述抗肿瘤药物含有土茯苓提取物作为唯一的活性成分，所述土茯苓提取物是用选自水、甲醇、乙醇的至少一种溶剂对土茯苓原料进行提取，获得的土茯苓总提取物。 9、土茯苓提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，其中，所述土茯苓提取物是用选自水、甲醇、乙醇的至少一种溶剂对土茯苓原料进行提取，获得的土茯苓总提取物，并且在所述抗肿瘤药物中，所述土茯苓提取物是唯一的活性成分。10、如上述9所述的土茯苓提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，其中，所述抗肿瘤药物是治疗肝癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、食管癌、鼻咽癌或肺癌等肿瘤的药物。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种土茯苓提取物的制备方法，该制备方法包括下述步骤：用选自水、甲醇、乙醇的至少一种溶剂对土茯苓原料进行提取，回收溶剂获得土茯苓总提取物的步骤；用水将所述土茯苓总提取物溶解，用石油醚进行提取，获得土茯苓石油醚部分提取物的步骤；进一步用乙酸乙酯进行提取，获得土茯苓乙酸乙酯部分提取物的步骤；进一步用水饱和正丁醇进行提取，获得土茯苓水饱和正丁醇部分提取物和土茯苓水部分提取物，所述土茯苓提取物至少含有所述土茯苓水部分提取物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：寿成超，苏亚辉，高玉婧，
申请(专利权)人：北京市肿瘤防治研究所，
类型：发明
国别省市：
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