免疫可检测性的改善制造技术

技术编号:8026955 阅读:163 留言:0更新日期:2012-12-02 18:15
在本公开内容中,提供了一种用于改善至少一种蛋白质在任选稀释的血液、血清或血浆样品中的免疫可检测性的方法,包括将样品加热至64-85℃的温度,之后进行样品与至少一种亲和配体间的接触以检测和/或量化所述至少一种蛋白质的步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及检测血液或血液衍生的样品中的蛋白质的领域。
技术介绍
目前,蛋白质组分析中广泛使用且公认的技术是常常与2D凝胶电泳或层析技术组合采用的质谱术。然而,小型化且并行化技术平台的最近开发已经打开了支持和补充质谱分析的可能性。专利技术概述首先,提供了用于改善至少一种蛋白质在任选稀释的血液、血清或血浆样品中的免疫可检测性的方法,包括将样品加热至50-85°C的温度,之后进行样品与至少一种亲和配 体间的接触的步骤。其次,提供了用于检测和/或量化来自受试者的血液、血清或血浆中的蛋白质的方法a)提供第一和第二任选稀释的来自所述受试者的血液、血清或血浆样品;b)将所述第一样品加热至50_85°C的温度;c)在b)的加热后,使所述第一样品与至少一种亲和配体接触,所述亲和配体能够与通过加热提高免疫可检测性的靶蛋白选择性相互作用;d)使尚未进行加热的所述第二样品与至少一种亲和配体接触,所述亲和配体能够与通过加热没有提高免疫可检测性的靶蛋白选择性相互作用;e)检测步骤c)和d)中形成的抗体与相应的靶蛋白间的相互作用,由此检测和/或量化所述血液、血清或血浆中的蛋白质。再次,提供了用于鉴定医学状况的生物标志的方法,包括a)提供来自患有所述医学状况(condition)的第一组受试者和没有所述医学状况的第二组受试者的血液、血清或血浆样品,b)任选地在稀释后,将所述样品加热至50_85°C的温度,c)使所述样品与能够与至少一种蛋白质选择性相互作用的至少一种亲和配体接触以测定各组中的所述至少一种蛋白质的水平,d)比较所述水平以鉴定在来自第一组的样品中比在来自所述第二组的样品中高或低的程度出现的蛋白质,如此鉴定所述医学状况的生物标志。下文更为详细地描述了上述方法的各个实施方案。附图简述在附图说明图1-4中,实线表示血浆中的蛋白质,而虚线表示血清中的蛋白质。图I显示了在以不同温度(X轴)热处理后血浆或血清中展现出至少2倍升高的免疫可检测性的蛋白质的数目(y轴)。图2显示了在以不同温度(X轴)热处理后血浆或血清中展现出至少2倍降低的免疫可检测性的蛋白质的数目(y轴)。图3显示了在以不同温度(X轴)热处理后血浆或血清中展现出至少2倍升高的免疫可检测性的蛋白质的数目(y轴)。图4显示了在以不同温度(X轴)热处理后血浆或血清中展现出至少2倍降低的免疫可检测性的蛋白质的数目(y轴)。图5显示了来自与于23°C、56°C和72°C处理后的血清中的蛋白质相互作用的6种不同亲和配体的信号。框图从原始荧光信号强度数据产生,并且基于三次重复分析的结果。MFI =中值荧光强度,AU =任意单位。图6显示了来自与于23°C、56°C和72°C处理后的血浆中的蛋白质相互作用的6种不同亲和配体的信号。框图从原始荧光信号强度数据产生,并且基于三次重复分析的结果。MFI =中值荧光强度,AU =任意单位。图7显示了于72°C处理后的来自PSA低或高的患者(PSA > 60ng/ml)的血浆中的蛋白质水平差异。结果以火山图(volcano plot)呈现,其中将相对倍数变化(x轴)相对于t检验结果的显著性(P值)(y轴)绘图。实线代表P值<0.01,而虚线代表P值<0.05。·点框代表....图8显示了于23°C处理后的来自PSA低或高的患者(PSA > 60ng/ml)的血浆中的蛋白质水平差异。结果以火山图呈现,其中将相对倍数变化(X轴)相对于t检验结果的显著性(P值)(y轴)绘图。实线代表P值< O. 01,而虚线代表P值< O. 05。点框代表火山图中定位具有较小的倍数变化和显著性数值的蛋白质的区域放大。专利技术详述作为本公开内容的第一方面,如此,提供了用于改善至少一种蛋白质在任选稀释的血液、血清或血浆样品中的免疫可检测性的方法,包括将样品加热至50-85°C的温度,之后进行样品与至少一种亲和配体间的接触的步骤。作为第一方面的结构,提供了用于检测血液、血清或血浆样品中的蛋白质的方法,包括a)将所述样品加热至50_85°C的温度;b)使所述样品与至少一种亲和配体接触,所述亲和配体能够与已知靶蛋白选择性相互作用;c)检测至少一种亲和配体与来自样品的相应靶蛋白间的相互作用,由此检测样品中的蛋白质。本公开内容基于如下的发现,S卩如果在分析前将血浆或血清样品加热,那么抗体以较高的程度检出血浆和血清样品的一些蛋白质。不限于任何具体的科学理论,通过加热似乎促进抗体与其在血清或血浆蛋白质中的相应表位间的相互作用。本公开内容的发现可以带来许多益处。使用加热,可有可能检出先前使用免疫学方法检测不到的蛋白质。因此,可以获得复杂生物学样品的蛋白质内容物的更广泛图像。还有,加热可以实现以较低水平存在于此类复杂生物学样品中的蛋白质的检测。这可以是特别感兴趣的,因为已经报告了许多感兴趣的生物标志以较低浓度范围存在。如此,本公开内容的加热可以是用于提高蛋白质组研究的灵敏性的有用工具。在本公开内容的上下文中,蛋白质的“免疫可检测性”指蛋白质的线性或构象表位可以通过能够与此类表位选择性相互作用的亲和配体,诸如抗体检出的程度。此外,在本公开内容的上下文中,“改善”蛋白质的免疫可检测性指在基于表位识别的分析中与来自尚未实施加热时的蛋白质的信号(或输出)相比,提高来自蛋白质的信号(或输出)。因此,为了测定是否已经改善免疫可检测性,可以在同时采集的两份来自患者的样品中测量来自所讨论的蛋白质的信号,其中在测量前已经加热样品之一。如果来自加热样品中的蛋白质的信号高于来自非加热样品中的蛋白质的信号,那么免疫可检测性得到改善。为了改善所述比较的精确性,可以实施对每份样品的超过一次测量和/或对每个种类的超过一份样品的测量。在一些实施方案中,若信号(按绝对值计)已经升高I. 5倍或2倍,则可以认为免疫可检测性得到改善。“样品与至少一种亲和配体间的接触”使检测和/或量化样品中的蛋白质成为可能。因此,可以采用亲和配体的选择性来测定亲和配体识别的蛋白质的存在和/或多度。可以使用各种设置和形式来实施接触,如下文进一步讨论的。作为本公开内容的第二方面,提供了用于检测和/或量化来自受试者的血液、血清或血浆中的蛋白质的方法a)提供第一和第二任选稀释的来自所述受试者的血液、血清或血浆样品; b)将所述第一样品加热至50_85°C的温度;c)在b)的加热后,使所述第一样品与至少一种亲和配体接触,所述亲和配体能够与通过加热提高免疫可检测性的靶蛋白选择性相互作用;d)使尚未进行加热的所述第二样品与至少一种亲和配体接触,所述亲和配体能够与通过加热没有提高免疫可检测性的靶蛋白选择性相互作用;e)检测步骤c)和d)中形成的抗体与相应的靶蛋白间的相互作用,由此检测和/或量化所述血液、血清或血浆中的蛋白质。第二方面基于专利技术人的洞察力,即一些蛋白质的免疫可检测性在本公开内容的热处理期间得到改善,而一些其它蛋白质的免疫可检测性没有升高或者甚至降低。因而,若在已经加热的样品中实施前种蛋白质的检测,而在非加热样品中实施后种蛋白质的检测,则可以实现对更大范围的蛋白质优化的灵敏性。本领域技术人员无需过度负担仅通过实施相同蛋白质的两次测量,一次在加热样品中而一次在非加热样品中,然后比较所得的信号便可以确定蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员:M乌伦J施温克
申请(专利权)人:阿特拉斯抗体有限公司
类型:发明
国别省市:

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