一种光合细菌菌株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种光合细菌菌株及其应用。所述细菌为胶状红长命菌(Rubrivivaxgelatinosus)sbg11，于2012年5月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC?No.6085，其16SrDNA序列如SEQ?ID?NO:1所示。所述的光合细菌菌株能够显著地提高蔬菜的产量及品质，可广泛地应用于各种蔬菜。在经本发明专利技术的细菌处理后，生菜、番茄、辣椒等蔬菜的产量及品质都有了显著提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ー种微生物领域，尤其涉及一种光合细菌菌株及其应用。
技术介绍
光合细菌是ー类具有固碳、固氮、脱氢、氧化硫化物等功能的微生物，此外，光合细菌本身是活蛋白，内含有丰富的氨基酸、维生素、促生长因子、抗病毒活性因子、辅酶Q及多种生理活性物质，具有抗脂质过氧化、改善水质，培养饵料生物，防治疾病，提高成活率，固氮，产氢气等功能，因而在水产养殖、禽畜饲养、饲料添加、环境保护、新能源的生产及保健品等方面越来越多的被应用，成为现代生物技术不可缺少的一部分。但是现有的光合细菌通常对酸、碱、盐、抗生素的耐受能力不强，在实际使用中受到限制，对蔬菜生长的促进效果不大。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有光合细菌耐受性低、不能有效促进蔬菜生长的缺陷，提供ー种具有耐酸、耐碱、耐盐、耐抗生素能力且能显著提高蔬菜产量及品质的光合细菌菌株。本专利技术的另一目的在于提供上述光合细菌菌株的应用。为了达到上述目的，本专利技术通过采用选择性培养基在厌氧和好氧培养条件下，对生长于广东省水田土壌中的光合细菌进行分离、纯化得到一种光合细菌菌株，所述细菌为胶状红长命菌iRubrivivax gelatinosus) sbgll,于2012年5月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No. 6085。该胶状红长命菌sbgll具有耐酸、耐碱、耐盐和抗生素的能力，可作为接种剂促进生菜、番茄、辣椒等蔬菜的生长。经过序列測定，上述光合细菌菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO: I所示。本专利技术还提供ー种接种剂，其含有上述光合细菌菌菌株，即胶状红长命菌sbgll。本专利技术的光合细菌菌株优选作为液体菌肥以促进生菜、番茄、辣椒等蔬菜作物生长。所述液体菌肥由上述光合细菌菌株按2 5% (特别优选3%)的接种量采用LB液体培养基培养而得。同时本专利技术还提供一种促进蔬菜生长的方法，具体是将上述液体菌肥施用于种植蔬菜的PH为4. 0-10. 0的土壌中。该方法特别适合于促进生菜、番茄或辣椒等蔬菜的生长。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果 专利技术人经过大量的实验研究，筛选出ー种具有耐酸、耐碱、耐盐和抗生素能力的光合细菌菌株，即胶状红长命菌{Rubrivivaxsbgll,所述的光合细菌菌株能够显著地提高蔬菜的产量及品质，可广泛地应用于各种蔬菜。在经本专利技术的细菌处理后，生菜、番茄、辣椒等蔬菜的产量及品质都有了显著提高。本专利技术还为生菜、番茄、辣椒等蔬菜提供了一种优良的液体菌肥，它来源于农田土壌中，明显促进生菜、辣椒、茄子等蔬菜对酸、碱性土壤的耐受性，可防止使用化肥进ー步使土壌酸化而不利于植物生长。具体实施例方式实施例I 胶状红长命菌{Rubrivivax gelatinosus) sbgll的分离、纯化和鉴定富集称取土样10 g于含50 mL无菌水的三角瓶中，充分振荡打散，制成悬浊液，与富集营养液按I: 5比例装人三角瓶中，并覆盖一层无菌液体石蜡(高约2 cm)形成厌氧环境，封ロ，静置于光照培养箱，30 ± 2°C，培养15 20d，瓶壁上先长出黄、绿、红、紫红等多种不同顔色的菌株，后又被优势菌株覆盖并贴满瓶壁。取此第一代培养瓶中的菌悬液100 ML于250 mL富集营养液进行第二代培养，培养方法与第一代相同。培养约10天后从第二代培养瓶中吸取10 ML于250 mL富集营养液进行第三代培养，培养条件不变，富集优势菌株，淘汰劣势菌株。 分离纯化吸取第三代液体培养液I mL于盛有9 mL无菌水的试管制成10—1倍稀释菌液，再取此浓度菌悬液如法稀释至10_2、10_3倍，直至稀释到10_6倍。分别吸取10_4、10_5、IO-6三个梯度的菌悬液100 ML，分别依次采用平板涂布培养法和倾注厌氧培养法，30±2°C下光照培养，观察不同培养方法下菌体的生长情况，挑取长势较好并且具有不同特征的菌落用平板划线法进行反复传代培养，直至菌落的形状、顔色、质地、透明度一致。最后通过简单染色和镜检，进ー步观察其形态，以长度均一、宽度一致、染色情况统ー为菌株纯化标准。保存将分离纯化后的菌株在光合细菌分离培养基平板光照培养2飞d，收集平板上的菌体，保存于15 %灭菌甘油(_20°C )和牛血清中(_80°C )。并且于2012年5月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 6085。上述方法中，富集培养液(IL) =KH2PO4 0.5 g，K2HPO4 0.6 g, (NH4)2SO4 1.0 g,MgSO4* 7H20 0. 2 g (分开灭菌)，NaCl 0. 2 g, CaCl2 *2H20 0. 075 g (分开灭菌)，こ酸钠 I. 5g，酵母膏 I g，微量元素液 1.0 mL (H3BO3 0. 28 g, NaMoO4 0.075 g, CuSO4 0.004 g, MnSO40. 21 g, ZnSO4 0. 024 g, I L 水)，pH 为 7. 0±0. 2。分离培养基(IL):酵母膏 3 g，蛋白胨 3 g，CaCl2.6H20 0.3 g,MgSO4*7H20 0.5 g,琼脂粉 15 g，pH 7.0 ±0.2。由上述方法分离纯化的胶状红长命菌sbgll具有如下形态和生理、生化特性 a、菌体形态特性 胶状红长命菌为革兰氏阴性菌，细胞呈短杆状，菌体大小为0. 4^0. 7X1. 2 2. 7 Mm。b、菌落形态特性 光照厌氧液体培养物为深粉红色，瓶底、瓶壁及液面上形成一层深红色隔氧膜，不随震荡散开；琼脂平板上也生长较快，呈浅红至深紅色点状菌落，菌落表面微光滑、突起、湿润、有光泽、透明，菌落边缘整齐。C、生理生化特性 兼性厌氧，菌体富含细菌叶绿素a和类胡萝卜素；能在以吐温40，吐温80，D-葡萄糖，D-甘露糖，L-果糖，D-果糖，a -酮戊ニ酸，琥珀酸钠，水杨酸钠为碳源的培养基上生长；pH生长范围较广，可耐pH4-pH10 ;对NaCl不敏感，耐NaCl浓度达4. 0% ;对300吒 mじ1的氨苄青霉素仍有耐受性，耐庆大霉素、新霉素可达50呢 !!!じ1，而对卡拉霉素、链霉素、氯霉素、四环素、红霉素的耐受性差，低浓度的这几种抗生素就能抑制其生长。菌株sbgll能产生吲哚、分泌生长素、液化明胶和还原N03_，不能生成H2S。吲哚反应呈阳性，且能分泌生长素IAA，能液化明胶。碳源利用情况和是否需氧的实验表明本专利技术的菌株胶状红长命菌sbgll与胶状红长命菌模式菌株ATCC17011存在较大的差异，应为胶状红长命菌中的一个新菌株。经过序列測定，上述菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO: I所示。本专利技术胶状红长命菌的分子分类地位的确定 采用细菌 16S rDNA 基因通用引物 25f〔5’-AAC T(G/T)A AGA GTT TGA TCC TGGCTC-3，〕(SEQ ID NO:2 或 SEQ ID N0:3)和 1492r〔5，-TAC GG(C/T) TAC CTT GTT ACGACT T-3’〕(SEQ ID N0:4或SEQ ID NO: 5)进行扩增，将PCR产物直接进行序列測定，将获得的DNA序列输入GenBank进行比对本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种光合细菌菌株，所述细菌为胶状红长命菌(Rubrivivax？gelatinosus)sbg11，于2012年5月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC？No.？6085。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄秋生，彭桂香，杨芳，刘光华，谭志远，田俊岭，
申请(专利权)人：广东凯利生物科技有限公司，华南农业大学，
类型：发明
国别省市：