本发明专利技术公开了一种人间充质干细胞在制备治疗M3型白血病药物中的应用。其中能够促使M3型白血病细胞向成熟粒细胞分化的人间充质干细胞可以单独应用，也可以与全反式维甲酸ATRA联合应用。本发明专利技术所公开的人间充质干细胞在制备治疗M3型白血病药物中的应用，为该类白血病的治疗药物开发提供了低成本、低不良反应且效果更佳的技术手段。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种人间充质干细胞在制备治疗M3型白血病药物中的应用。
技术介绍
急性白血病是由于病理的白细胞失去进一步分化成熟的能力而停滞在幼稚期的不同阶段。急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL) M3的白细胞分化阻滞于异常的早幼粒细胞阶段，是目前临床上唯一进行诱导分化治疗的白血病。使用全反式维甲酸(ATRA)单独或者与化学药物联合治疗可以获得高达909^95%的完全缓解率，但是存在可能有致死风险的毒副反应如维甲酸综合症，它可能引起患者出现高白细胞，不明原因发热，呼吸窘迫，间质性肺炎，胸腔或心包积液，间歇性低血压和急性肾功能衰竭。而 且，持续性的ATRA单药治疗M3型白血病将导致进行性获得性耐药，通常在3 6月内几乎所有的病人均出现复发。获得性耐药的一个可能的原因便是由于反复给药导致药物清除加快从而使ATRA的血浆浓度低于有效治疗浓度。要解决上述问题，可能的策略是寻找其他具有诱导白血病细胞分化能力的药物或药用组合物，单用或与ATRA联合诱导，在不降低疗效的基础上减弱ATRA单独应用所带来的问题。有不少研究报道了间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC)在体内外均可促进正常造血干细胞向髓系和淋系分化。起初，有研究发现小鼠间充质细胞系MS-5和S17均可促进人脐血来源的造血干祖细胞向B淋巴细胞和粒细胞分化。随后，人骨髓MSC被证实可以在体内外促进造血干祖细胞巨核细胞形成。最近研究显示人MSC可以促进骨髓和脐带血来源的造血干祖细胞向髓系和淋系细胞分化。不过尚未有研究显示MSC能够促进白血病细胞分化。非人类来源的MSC由于生物学和伦理学上存在的种种问题，不宜用于人类疾病的治疗。人骨髓来源的MSC可以分离和较大规模制备获取，在产业上具备使用的可能。脐带来源的间充质干细胞(umbilical cord-derived mesenchymal stem cells, UC-MSC)是正常妊娠分娩过程的副产品，可用酶消化法等多种成熟手段非常容易地从新生儿脐带组织中获取，生物学特性与其他来源的间充质干细胞基本一致，由于其来源的广泛性、取材的无创性和简易性、感染的低发生率和良好的体外扩增能力，在产业上具有广阔的应用前景。
技术实现思路
为解决现有技术所存在的诱导分化药物在治疗M3型白血病中所存在的复发率高、毒副反应严重、联合用药成本高等缺陷，本专利技术通过研究证明MSC可以促进急性早幼粒细胞白血病细胞向粒系成熟分化，和ATRA同时应用时其促分化作用有联合增强，并在此基础上提供了一种将人间充质干细胞应用于制备治疗M3型白血病的药物的技术方案。本专利技术所述的人间充质干细胞在制备治疗M3型白血病药物中的应用，其中人间充质干细胞可以单独应用，也可以与全反式维甲酸(ATRA)联合应用。本专利技术所述的人间充质干细胞在制备治疗M3型白血病药物中的应用，其中人间充质干细胞可以用组织块酶消化法从新生儿脐带胎盘当中获得。本专利技术所述的人间充质干细胞在制备治疗M3型白血病药物中的应用，解决了单独使用全反式维甲酸(ATRA)所可能造成的获得性耐药问题、提高了 M3白血病诱导分化的效率，减少了可能存在的不良反应。本专利技术所述的人间充质干细胞在制备治疗M3型白血病药物中的应用，其中所述人间充质干细胞的来源不仅仅限于废弃的新生儿脐带胎盘组织，目前随着相关
技术的发展，成年人的骨髓、脂肪、子宫内膜等组织中均可获得充足的人间充质干细胞，并且已有大量获取此类来源的间充质干细胞并储存用于建立成体间充质干细胞库的实例。以此为基础，可知上述来源的人间充质干细胞均可应用于本专利技术的技术方案中。本专利技术所述的人间充质干细胞在制备治疗M3型白血病药物中的应用，其中人间充质干细胞的实际应用方式，应当是以静脉注射的手段，单独或与其他促分化药物联合应 用。虽然本专利技术中的实施方式不包括对M3白血病患者使用人间充质干细胞进行治疗的实际用量，但通过现有技术所公开的大量间充质干细胞临床治疗损伤及免疫性疾病的实例来看，本专利技术中所使用的间充质干细胞用量可以参考已公开的其他疾病治疗中的用量，为(0. 5 5) X106/kg。本专利技术的有益效果是本专利技术所公开的人间充质干细胞在制备治疗M3型白血病药物中的应用，为该类白血病的治疗药物开发提供了低成本、低不良反应且效果更佳的技术手段。附图说明图I是形态学和NBT还原试验显示UC-MSC诱导NB4细胞向粒系分化并和ATRA同时使用有诱导作用联合增强。图2是细胞表面分化抗原的调控显示UC-MSC诱导NB4细胞向粒系分化而非向单核细胞分化，并和小剂量ATRA同时使用有诱导作用联合增强。图3是UC-MSC促进NB4细胞分化的同时伴随着细胞G0/G1期周期阻滞。图4是UC-MSC诱导APL患者来源的白血病细胞向粒系分化。具体实施例方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明I.利用酶消化法消化足月妊娠剖宫产健康新生儿的脐带，通过贴壁法取得原代培养的脐带间充质干细胞，培养于含10%胎牛血清，10_8M地塞米松，10ng/ml EGF (peprotech公司，美国)，2ng/ml bFGF (peprotech公司,美国),100 V- g/ml链霉素和100U/ml青霉素的DMEM/F12培养基(Gibco公司，美国)，置37°C，5%C02饱和湿度培养箱中，细胞长至80-90%融合后消化传代，取P4 P6代的细胞实验用。人APL细胞系NB4细胞由本实验室液氮冻存，培养于含10%胎牛血清、IOOii g/ml链霉素和100U/ml青霉素的RPMI 1640培养基(Gibco公司，美国)，置37°C、5%C02饱和湿度培养箱中悬浮培养，每2 3天传代I次。在6孔板内建立NB4细胞与UC-MSC共培养体系，设立4个实验组，即NB4对照组，UC-MSC处理组，ATRA处理组和UC-MSC/ATRA联合处理组。UC-MSC提前接种于6孔板内，5 X IO5/孔，置于37°C，5%C02饱和湿度培养箱中培养，达到80 90%融合后，铯源30Gy照射终止细胞增殖。NB4细胞起始浓度105/ml接种，4ml/孔。培养一定时间后，收集白血病细胞时轻轻反复吹打，避免破坏下层的UC-MSC细胞层。通过细胞形态,硝基四唑氮蓝还原试验(nitroblue tetrozoliumreduction test，NBT试验)，细胞表面髓系分化标志⑶IIb和⑶14的检测评价白血病细胞的分化状态。我们发现UC-MSC可以促进NB4细胞向粒系终末分化成熟同时可以导致NB4细胞周期G0/G1期阻滞，而且和小剂量的ATRA (10 nM)联合使用时，促分化作用有累加效应。具体为(I) NB4细胞在UC-MSC或/和10 nM ATRA处理培养72小时后收集细胞，经甩片机(Cytospin4，山东)将细胞甩至载玻片上，瑞氏吉姆萨染色30分钟后显微镜下观察各组NB4细胞形态。如图I中的A所示，NB4对照组细胞呈典型原始细胞形态，胞体较大，胞浆深蓝染，细胞核核大且圆，核浆比较大，染色质疏松，可见较大的核仁；UC-MSC共培养以后 的细胞形态上有分化的迹象，细胞体积较前变小，细胞核变小，核浆比变大，核染色质较前浓聚本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人间充质干细胞在制备治疗M3型白血病药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韩忠朝，陈芳，
申请(专利权)人：天津昂赛细胞基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。