本发明专利技术涉及人单克隆抗体，该人单克隆抗体来源于在已从感染甲型流感病毒中恢复的患者的血液中存在的人B细胞，其中所述单克隆抗体具有抗甲型流感病毒的中和活性。本发明专利技术的抗甲型流感病毒的单克隆抗体具有抗选自由甲型流感病毒H1、H2和H5亚型组成的组中至少一种甲型流感病毒的结合和中和活性，且因此所述抗甲型流感病毒的单克隆抗体对预防和治疗由甲型流感病毒引起的疾病是有用的，且对甲型流感病毒感染的诊断也是有用的。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及人单克隆抗体，该人单克隆抗体来源于已从感染甲型流感病毒中恢复的患者的血液中存在的人B细胞，其中该单克隆抗体具有抗甲型流感病毒的中和活性。
技术介绍
流感是由呼吸道感染的流感病毒引起的疾病，常常在冬季发生。已知流感具有非常高的传染性，会影响所有年龄组的人、尤其是老年人(Treanor J，2004，N Engl JMed. 350(3) :218-20)。流感病毒是负链且被包膜的RNA(核糖核酸)病毒，属于正黏液病毒(Orthomyxoviridae)科。流感病毒具有单链RNA的8个节段,且被分类为甲型(A)、乙型(B)和丙型(C)。甲型流感病毒根据它们主要的表面蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)进 一步分成多种亚型。迄今为止，已鉴定出16种HA和9种NA (Cheung TK和Poon LL 2007，AnnNYAcad Sci. 1102 :1_25)。流感病毒根据它们的类型而具有广泛的感染范围(包括鸟、猪和人)，且流感病毒具有由分段的RNA组成的基因组。因为这一原因，流感病毒可持续地突变和重组，从而产生新的遗传变异体(Treanor J, 2004. NEngl J Med. 350(3) :218-20)。因为这一原因，难以获得抗流感病毒的长期免疫。当前使用的最有效的预防方法是抗每次预期要流行的特定流感病毒的疫苗。通常使用蛋生产流感疫苗，但这是需要很长时间的低效率的方法。因此，该方法具有难以每年在有限的时间范围内生产足够量的疫苗的问题。为了解决这一问题，在多家制药公司(GSK、Baxter等)中正积极进行对通过细胞培养生产疫苗的方法的研究。此外，当出现大范围流行的传染时，很难迅速开发出抗该大范围流行的流感病毒的疫苗。另外由于与具有抗性的突变病毒的出现相关的问题，抗病毒药物并不是完全可靠的。为了解决这一问题，最近已积极开发了抗流感病毒的抗体以用于治疗目的(Throsby 等，2008, PloS One 3 (e3942) ；Sui 等，2009, Nature structural&molecularbiology. 16(265-273) ;Simmons 等，2007，PloS Medicine 4(e 178))。已使用来自恢复的患者的血液产物来治疗被各种病毒感染的患者，以及治疗流行性的流感传染。例如，当被西班牙流感病毒感染的患者具有肺炎症状时，使用从该流感病毒感染中恢复的患者收集血液产物以治疗该病毒(Luke等，2006. Annals of internalmedicine. 145 :599)。同样地，从人的血浆中纯化超免疫球蛋白(IgIv)以用于治疗被各种病毒感染的患者，但由于血液中潜在的感染介质而使如上述方法获得的产物可能并不安全，且不足以进行大批量生产。人B细胞用于特异性人单克隆抗体的筛选。但是,通过Epstein-Barr病毒(EBV)而使人B细胞无限增殖化在B细胞的无限增殖化中是低效且费时的。为了克服该低效，正在开发和使用新的技术。这些技术中的一项是使用RT-PCR方法以直接从B细胞获得抗体的遗传信息。例如，有一种方法包括对表达抗特异性抗原的抗体的B细胞进行染色，使用流式细胞仪(FACS)分离B细胞，通过RT-PCR方法从单个B细胞获得抗体的遗传信息，将该遗传信息插入表达载体，然后将表达载体转染进入动物细胞，从而产生大量的抗体。为了以更容易且快速的方式进行所述生产，可使用下面的技术。新技术“芯片上的免疫斑阵列测试” (ISAAC)使得能够在几个星期内通过筛选单个B细胞获得抗体基因，该B细胞分泌特异的单克隆抗体(Jin 等，2009Nat Med. 15，1088-1092)。非专利文件I. Reed L. J.和 Muench H(1938). A simple method of estimating fiftypercent endpoints. The American Journal of Hygiene,27(493-497)。
技术实现思路
技术问题 本专利技术的目的是提供一种人单克隆抗体，所述人单克隆抗体源自人B细胞，且具有抗甲型流感病毒的中和活性。本专利技术的另一个目的是提供一种编码所述单克隆抗体的分离的核酸分子。本专利技术的又一个目的是提供一种包含所述核酸分子的表达载体，所述核酸分子插在所述表达载体中。本专利技术的又一个目的是提供一种转染有所述表达载体的生成抗体的细胞系。本专利技术的又一个目的是提供一种用于筛选人单克隆抗体的方法。本专利技术的又一个目的是提供一种包括所述人单克隆抗体的组合物。本专利技术的又一个目的是提供一种使用所述人单克隆抗体治疗由甲型流感病毒引起的疾病的方法。本专利技术的又一个目的是提供一种使用所述人单克隆抗体预防由甲型流感病毒引起的疾病的方法。本专利技术的又一个目的是提供一种用于使用所述人单克隆抗体诊断甲型流感病毒的方法。本专利技术的再一个目的是提供一种用于甲型流感病毒诊断的试剂盒，所述试剂盒包括所述人单克隆抗体。技术方案为了达到上述目的，本专利技术提供了一种抗甲型流感病毒的单克隆抗体，所述单克隆抗体具有抗选自由甲型流感病毒HI、H2和H5亚型组成的组中的至少一种的中和活性。本专利技术还提供了一种编码所述单克隆抗体的分离的核酸分子。本专利技术还提供了一种包含所述分离的核酸分子的表达载体，所述核酸分子插在所述表达载体中。本专利技术还提供了一种转染有所述表达载体的生成抗体的细胞系。本专利技术还提供了一种用于筛选人单克隆抗体的方法。本专利技术还提供了一种包括所述人单克隆抗体的组合物。本专利技术还提供了一种用于预防和治疗由甲型流感病毒引起的疾病的组合物，所述组合物包括所述人单克隆抗体。本专利技术还提供了一种用于甲型流感病毒诊断的组合物，所述组合物包括所述人单克隆抗体。本专利技术还提供了一种使用所述人单克隆抗体治疗由甲型流感病毒引起的疾病的方法。本专利技术还提供了一种使用所述人单克隆抗体预防由甲型流感病毒引起的疾病的方法。本专利技术还提供了一种用于使用所述人单克隆抗体诊断甲型流感病毒感染的方法。本专利技术还提供了一种用于甲型流感病毒诊断的试剂盒，所述试剂盒包括所述人单克隆抗体。有益效果本专利技术的抗甲型流感病毒的单克隆抗体具有抗选自由甲型流感病毒HI、H2和H5亚型组成的组中的至少一种甲型流感病毒的结合和中和活性，因此对预防和治疗由甲型流感病毒引起的疾病是有用的，且还对诊断甲型流感病毒的感染是有用的。 附图说明图I为示出CT109、CTlll-I和CT14-2抗体对单体的血凝素(在下文中被称为“HA”)和三聚体的HA的结合亲和力的一组曲线图。图2为示出CT104、CT120和CT123抗体对单体的HA和三聚体的HA的结合亲和力的一组曲线图。图3为示出CT137、CT151和CT165抗体对单体的HA和三聚体的HA的结合亲和力的一组曲线图。图4示出了 pCT145 (A)和pCT147⑶的载体图谱A pCT145 载体；B pCT147 载体；pac :编码嘌呤霉素-N-乙酰基转移酶(PAC)的基因；及DS :二重对称(dyad symmetry) (EBNA1连接至EBV的质粒复制起点(oriP)中的二重对称(DS)元素)。图5为表达本专利技术抗甲型流感病毒的单克隆抗体的表达载体的图谱。图6示出了使用本专利技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：张宸在，金钟默，李癸淑，李炫周，
申请(专利权)人：赛特瑞恩股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。