与多种CC趋化因子结合的抗因子抗体制造技术

抗因子抗体(antikine?antibody)与2、3、4、5种或更多种CC趋化因子(例如RANTES/CCL5、MIP-1α/CCL3、MIP-1β/CCL4或MCP-1/CCL2)结合。还公开了抗因子抗体的亲和力成熟和人源化方法，以及通过序贯免疫得到产生抗因子抗体之杂交瘤细胞系的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抗因子抗体(antikine antibody)或者与2、3、4、5种或更多种CC趋化因子(CC趋化因子也被称为“ ￠-趋化因子”)相结合的抗体，特别是与选自RANTES/CCL5、MIP-I a /CCL3、MIP-I ^ /CCL4和MCP-1/CCL2之至少2种趋化因子相结合的那些抗体。与仅跟一种CC趋化因子结合的抗体不同，抗因子抗体通过一次结合、检测和/或中和多于一种CC趋化因子，从而在实践中解决了 CC趋化因子之间功能冗余的问题。本专利技术的另一些 方面包括抗因子抗体的诊断和治疗用途，包括治疗由CC趋化因子介导的病症、功能异常或疾病；产生抗因子抗体的杂交瘤细胞系以及通过序贯免疫产生杂交瘤的方法；使抗因子抗体人源化的方法；以及通过亲和力成熟来改善抗因子抗体的方法。相关技术描述趋化因子是炎症的关键介导物，并且参与自身免疫病的发生(Viola和Luster，Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 48 :171-197 (2008))。它们在炎症或感染部位产生，并诱导白细胞从循环迁移到组织中。长久以来一直在寻找对于由趋化因子介导之炎症或免疫过程进行调节的简单且有效的方法。大量不同的趋化因子及其受体在功能上的冗余和重叠使这些尝试变得复杂。例如，已在临床前动物模型中使用趋化因子抑制剂来治疗自身免疫性病症，但是尚未在临床上成功地用于治疗自身免疫性适应症。已提出，这种效力缺乏可能是由于趋化因子功能冗余所致。已鉴定出超过50种不同的趋化因子，每种都具有不同的结构和功能特性。一些趋化因子的特异性发生重叠，也就是说，它们与同一类型的受体结合或者作用于相似类型的细胞(Vergunst等人,Arthritis Rheum. 58 :1931-1939(2008))。特定的趋化因子可以与多于一种趋化因子受体类型结合，给定的趋化因子受体可以与多于一种趋化因子类型结合。因此，非常期望开发出能够结合趋化因子、阻断趋化因子与受体结合或者中和多于一种趋化因子之活性的单一试剂。趋化因子(由趋化性细胞因子而得名)是小的分泌型多肽，其调节免疫细胞向组织中的移动(Baggiolini 等人,Adv. Tmmuno1. 55 :97-179 (1994) ;0ppenheim等人,Ann. Rev.Immunol. 9 :617-648(1991))。所有趋化因子都具有由保守性半胱氨酸残基之间的二硫键稳定的希腊钥匙(Greek key)结构。然而，基于这些保守性半胱氨酸残基的数目和位置，趋化因子进一步分成4个不同的家族。a-和￠-趋化因子各自包含4个保守性半胱氨酸残基。a-趋化因子的前两个半胱氨酸被单个氨基酸分隔开，因而形成特征性的CXC氨基酸基序。￠-趋化因子的前两个保守性半胱氨酸是相邻的。因此，￠-趋化因子也被称为CC趋化因子。与之不同地，淋巴细胞趋化因子(Iymphotactin)是第三类XC趋化因子的唯一成员，其仅含有第二和第四个保守性半胱氨酸残基。第四类趋化因子(唯一成员是fractalkine)是CXXXC(或CX3C)类型，其中由3个氨基酸将前两个保守性半胱氨酸分隔开。在人类中，a-趋化因子主要由第4号染色体上的基因簇编码，￠-趋化因子主要由第17号染色体上的基因编码。淋巴细胞趋化因子编码于第I号染色体上，fractalkine编码于第16号染色体上。趋化因子形成梯度，其用作免疫细胞以及其它细胞(例如单核细胞、巨噬细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞和成纤维细胞)的化学引诱物和潜在增殖信号。CC趋化因子通过形成由趋化性细胞所识别的浓度梯度而表现出化学引诱物性质；CC趋化因子还是特定细胞类型包括成纤维细胞和免疫细胞(例如单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞)的增殖信号。趋化因子(包括CC趋化因子)的靶受体和革巴细胞由 Viola 等人,Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 48 171-197 (2008)描述(参见图 I)，该文献中关于CC趋化因子的化学引诱物和信号传导功能的教导通过引用并入本文。趋化因子共有与特定趋化因子功能(例如与趋化因子受体结合)相关的结构性征。共同的结构包括位于第一个半胱氨酸残基之前的延长的N末端区段(N末端结构域)， N环，31(|螺旋，P链(M、@2和3 3)，30’s、40’s、50s环；二硫键位置以及C-末端a-螺旋区段。这些以及其它CC趋化因子结构(包括不同CC趋化因子之间的保守性或同源性氨基酸残基，以及CC趋化因子中的溶剂可及的(solvent-accessible)、部分溶剂可及的和掩蔽的氨基酸)通过引用 Fernandez 等人，Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 42 :469-99 (2002)(参见图I和2)而并入。完整、未变性的趋化因子中的掩蔽氨基酸残基不太可能形成趋化因子与抗体接触的表位或抗原决定簇。相比之下，暴露于溶剂或表面的CC趋化因子残基更易于与抗体结合。与CCL3/MIP-1 a的趋化因子受体结合相关的CC趋化因子残基包括SEQID NO 71 的残基 11-15 (CCFSY),残基 17-24 (SRQIPQNF)、残基 34-35 (QC)和残基57-67(EffVQKYVSDLE)；与CCL4/MIP-1P的趋化因子受体结合相关的残基包括SEQ ID NO :72的残基11-15 (CCFSY)、残基 17-24 (ARKLPHNF)、残基 34-35 (LC)或残基 57-67 (SffVQEYVYDLE)；与CCL5/RANTES的结合相关的残基包括SEQ ID NO :73的残基10-14 (CCFAY)、残基 16-23 (ARPLPRAH)、残基 33-34 (KC)或残基 56-66 (KffVREYINSLE)；与CCL23/MPIF-1的结合相关的残基包括SEQ ID NO :81的残基9-13 (CCISY)、残基 15-22 (PRSIPCSL)、残基 32-33 (EC)或残基 55-65 (KQVQVCMRMLK)；以及与CCL15/HCC-2相关的残基包括SEQ ID NO 79的残基8-12 (CCTSY)、残基14-21 (SQSIPCSL)、残基 31-32 (EC)或残基 54-64 (PGVQDCMKKLK)。其它 CC 趋化因子的相应氨基酸残基由例如Fernandez等人,2002(同上)的图I所示。CC趋化因子的保守性结构域公开于http://www. ncbi. nlm. nih. rov/0该结构数据通过引用在2010年8月24日最后一次登录时上述网站上的蛋白质和保守性结构域数据库信息而并入。CC趋化因子类型中的趋化因子与称作“CC趋化因子受体”或“CCR”的七次跨膜G蛋白偶联受体相互作用(Rossi 和 Zlotnik, Ann. Rev. Immunol. 18 :217-242 (2002))。趋化因子与其受体的相互作用调节粘附分子的活化，并且影响免疫细胞从循环渗出和溢出进入组织中。已显示，趋化因子参与多种炎性和免疫学病症、功能异常和疾病的发生和维持。这些包括类风湿性关节炎、多发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.08.28 US 61/238,0151.分离的抗体或其抗原结合片段，其与至少3种不同的CC趋化因子结合，其中至少一种 CC 趋化因子是 CCL3/MIP-1 a、CCL4/MIP-1 β 或 CCL5/RANTES。2.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其与至少4种不同的CC趋化因子结口 ο3.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其不与MCP-l、MCP-2或MCP-3结合。4.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其与选自CCL2/MCP-1、CCL3/MIP-1α、CCL4/MIP-1 β、CCL5/RANTES、CCL14/HCC-1、CCL15/HCC-2、CCL18/PARC 和 CCL23/MPIF-1 的至少3种不同的CC趋化因子结合。5.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其与CCL2/MCP-1、CCL3/MIP-1α、CCL4/MIP-1 β、CCL5/RANTES、CCL14/HCC-1、CCL15/HCC-2、CCL18/PARC 和 CCL23/MPIF-1 的至少一个决定簇结合，其中所述决定簇位于所述CC趋化因子的CC残基与所述趋化因子的最后一个C残基之间。6.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其与CCL2/MCP-1、CCL3/MIP-1α、CCL4/MIP-1 β、CCL5/RANTES、CCL14/HCC-1、CCL15/HCC-2、CCL18/PARC 和 CCL23/MPIF-1 的至少一个决定簇结合，其中所述决定簇位于所述CC趋化因子的N环、30’s环或40’s环中。7.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其与CC趋化因子之CC受体结合残基内的至少一个决定簇结合。8.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其中和其所结合之CC趋化因子的趋化活性。9.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其由杂交瘤细胞系3C12F、7D1G、7D12A、18V4F或18P7E产生，或者其竞争性阻断由杂交瘤细胞系3C12F、7D1G、7D12A、18V4F或18P7E产生之抗体的结合。10.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其是人抗体、人源化抗体，或嵌合的人-鼠抗体，或其抗原结合片段。11.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其与选自CCL3/MIP-1α、CCL4/MIP-I β、CCL5/RANTES、CCL15/HCC-2 和 CCL23/MPIF-1 的至少 5 种 CC 趋化因子结合，并且其基本上不与CCL2/MCP-1结合。12.权利要求11的分离的抗体或其抗原结合片段，其与所述CC趋化因子中至少一种的N环、30’ s环或40’ s环中的决定簇结合。13.权利要求11的分离的抗体或其抗原结合片段， 其与CCL3/MIP-1 α的至少一个抗原决定簇结合，所述决定簇位于SEQ ID NO :71的残基 11-15 (CCFSY)、残基 17-24 (SRQIPQNF)、残基 34-35 (QC)或残基 57-67 (EWVQKYVSDLE)内； 其与CCL4/MIP-1 β的至少一个抗原决定簇结合，所述决定簇位于SEQ ID NO :72的残基 11-15 (CCFSY)、残基 17-24 (ARKLPHNF)、残基 34-35 (LC)或残基 57-67 (SffVQEYVYDLE)内； 其与CCL5/RANTES的至少一个抗原决定簇结合，所述决定簇位于SEQ ID NO 73的残基10-14 (CCFAY)、残基 16-23 (ARPLPRAH)、残基 33-34 (KC)或残基 56-66 (KffVREYINSLE)内。14.权利要求11的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含MAb3C12F的至少一个⑶R，所述 CDR 选自 SEQ ID NO :3、4、5、8、9、10、53、54、55、58、59 和 60。15.权利要求11的分离的抗体或其抗原结合片段，其由产生MAb3C12F的杂交瘤细胞系或其继代培养物产生，或者其竞争性阻断由杂交瘤细胞系3C12F产生之抗体的结合。16.权利要求11的分离的抗体或其抗原结合片段，其是人抗体、人源化抗体，或嵌合的人-鼠抗体，或其抗原结合片段。17.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其与选自CCL3/MIP-la、CCL4/MIP-I β、CCL5/RANTES、CCL14/HCC-1 和 CCL18/PARC 的至少 4 种 CC 趋化因子结合，并且其基本上不与CCL2/MCP-1结合。18.权利要求17的分离的抗体或其抗原结合片段，其与所述CC趋化因子中至少一种的N环、30’ s环或40’ s环中的决定簇结合。19.权利要求17的分离的抗体或其抗原结合片段， 其与CCL3/MIP-1 α的至少一个抗原决定簇结合，所述决定簇位于SEQ ID NO :71的残基 11-15 (CCFSY)、残基 17-24 (SRQIPQNF)、残基 34-35 (QC)或残基 57-67 (EffVQKYVSDLE)内； 其与CCL4/MIP-1 β的至少一个抗原决定簇结合，所述决定簇位于SEQ ID NO :72的残基 11-15 (CCFSY)、残基 17-24 (ARKLPHNF)、残基 34-35 (LC)或残基 57-67 (SffVQEYVYDLE)内； 其与CCL5/RANTES的至少一个抗原决定簇结合，所述决定簇位于SEQ ID NO 73的残基10-14 (CCFAY)、残基 16-23 (ARPLPRAH)、残基 33-34 (KC)或残基 56-66 (KffVREYINSLE)内。20.权利要求17的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含MAb7D1G的至少一个⑶R，所述 CDR 选自 SEQ ID NO :23、24、25、28、29 或 30。21.权利要求17的分离的抗体或其抗原结合片段，其由产生MAb7DlG的杂交瘤细胞系或其继代培养物产生，或者其竞争性阻断由杂交瘤细胞系7D1G产生之抗体的结合。22.权利要求17的分离的抗体或其抗原结合片段，其是人抗体、人源化抗体，或嵌合的人-小鼠抗体，或其抗原结合片段。23.权利要求I的分离的抗体或其抗原结合片段，其与选自CCL3/MIP-la、CCL4/MIP-I β、...

【专利技术属性】
技术研发人员：丹·阿莉森，卡罗尔·拉波特，
申请(专利权)人：VLST公司，
类型：发明
国别省市：