本发明专利技术公开了从大豆工艺流中回收的纯化的鲍曼-贝克蛋白酶抑制剂(BBI)蛋白，以及从大豆工艺流中回收和分离纯化的BBI蛋白的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】从大豆工艺流中分离的纯化的鲍曼-贝克蛋白酶抑制剂蛋白相关申请的交叉引用本专利申请要求提交于2009年12月30日的美国临时申请序列61/291，312的优先权，该临时申请全文以引用方式并入本文。
技术介绍
蛋白酶抑制剂，鲍曼-贝克(Bowman-BiriO蛋白酶抑制剂(BBI)，是从大豆分离的胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的低分子量蛋白(7-8kDa)双头抑制剂。它最早是在超过六十年前被发现的(Bowman, Proc. Soc. Exptl. Med.，1946，63，574 ;并随后还被 Birk，Y. Biochim.Biophys. Acta, 1961，54，378-381 和 Birk. Y.等人，Biochemical Preparations, 1968，第 12卷，第25-29页表征)，并且由于发现其在多种实验体系中有效的抗癌效应，已重新吸引了科学界的兴趣。除了抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶之外，BBI还具有抑制其它蛋白酶如组织蛋白酶G、弹性蛋白酶和糜酶的活性的能力(Birk Y.，Int J Pept Protein Res, 1985, 25 113-131 ；Larionova 等人，Biokhimiya，1993，58 :1437-1444 ；和 Ware 等人，Archives ofBiochemistry and Biophysicsl997，344 :133-138,以上每一文献均以引用方式并入本文)。BBI蛋白由大约65-77个氨基酸残基和大约七个二硫键组成。BBI是蛋白，其特征在于高的半胱氨酸氨基酸浓度( 20重量％)、高的水溶性、对热变性的抗性和具有在独立的抑制位点抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的能力。在培养物和实验动物中，粗制的或纯化的BBI阻止或减少多种类型的诱导的细胞恶性转化是普遍已知的(Kennedy，A. R，The Bowman-BirkInhibitor from soybeans as ananti carcinogenic agent，Am J of Clinical Nutr，1998 :68，1406S-1412S)。另参见例如(I)Kennedy，A. R. Chemopreventive agents protease inhibitors. Pharmacology &Therapeutics78 :167-209,1998 ； (2)Kennedy,A. R. Overview Anticarcinogenic activityof protease inhibitors. In Protease Inhibitors as Cancer ChemopreventiveAgents ； (3) Troll, W. , Kennedy, A. R.编辑；Plenum Publishing Corporation New York,9-64,1993 ； (4)Kennedy, A. R.，Szuhaj, B. F.，Newberne, P. M.，Billings，P. C. Preparation and production of a cancer chemopreventive agent, Bowman-BirkInhibitor Concentrate. Nutr. Cancer 19 :281-302,1993 ； (5)Kennedy, A. R. Preventionofcarcinogenesis by protease inhibitors. Cancer Res. (suppl.). 54 :1999s_2005s，1994 ； (6)Kennedy, A. R. In vitro studies of anticarcinogenic protease inhibitors.In Protease Inhibitors as Cancer Chemopreventive Agents ;Troll， W. ， Kennedy,A. R.编辑；Plenum Publishing Corporation New York，65-91，1993(7)Kennedy，A. R.，The Status of Human Trials Utilizing Bowman-Birk Inhibitor Concentrate fromSoybeans. In Soy in Health and Disease Prevention, Michihiro Sugano 编辑，CRCPress LLC, Boca Raton, Florida，第 12 章，第 207-223 页，2005 ； (8) Kennedy, A. R. Statusof current human trials utilizing Bowman Birk Inhibitor Concentrate. Proceedingsof a Symposium,“Soy & Health 2006 ；DieteticAppIications-Dietetic Applications”，2006年10月12日和13日在德国的Dusseldorf举办(在印刷)；(9) Bartsch和Gcrlliiliscvs Molecular Mechanisms of Cancer Induction and Chemoprevention.In Chemoprevention of Cancer and DNA Damage by Dietary Factors, SiegfriedKnasmulIer, Ian Johnson, David DeMarini 和 Clarissa Gerhauser, Wiley 编辑-VCHVerlag, GmbH&Co. , KGaA, Weinheim, 2009。富集了 BBI的大豆提取物，通常称为鲍曼-贝克抑制剂浓缩物(BBIC)，已于1992年4月取得了美国食品与药品管理局(FDA)的研究中新药(IND)地位。BBIC已显示在某些条件下表现出针对细胞恶性转化的抑制性活性，并且其施用已显示影响多种形式的癌症。参见例如美国专利7，404，973。又如，终生以I. 0%膳食BBIC维持生存的动物已显示不具有生长异常并且发现具有显著延长的寿命(Kennedy等人Nutr Cancer, 1993,19 :281-302)。BBIC也显示出在动物模型和人类临床试验中具有在治疗口腔癌、肌肉萎缩症 和预防肌肉消耗方面的活性、抗炎性活性、辐射防护活性。(参见例如Kennedy，A. R.，Soy and Health and Disease Prevention, 2005 和 Sweeney 等人的美国专利公布 US2008/0300179A1)。在小鼠中，BBIC还已显示能够在腹膜内注射之后在肺、肾和肝脏组织中抑制蛋白分解活性(Oreffo等人,Toxicology, 1991,69 :165-176) dBIC还已显示减轻了神经肌肉疾病的影响(美国专利申请公布20080300179，Morris等人，J Appl 本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.12.30 US 61/291,3121.鲍曼-贝克蛋白酶抑制剂(BBI)产品，所述产品具有至少约90重量％的总BBI蛋白浓度。2.权利要求I的BBI产品，其中所述BBI产品具有至少约95重量％的总BBI蛋白浓度。3.权利要求I的BBI产品，其中所述BBI产品具有至少约99重量％的总BBI蛋白浓度。4.权利要求I的BBI产品，其中所述BBI蛋白包含至少ー种与选自SEQID NO =USEQID NO 2, SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ IDNO :5、SEQ ID NO :6、以及它们的组合的氨基酸序列具有至少85%的同一性的氨基酸序列。5.权利要求I的BBI产品，其中所述BBI蛋白包含至少ー种与选自SEQID NO =USEQID NO 2, SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ IDNO :5、SEQ ID NO :6、以及它们的组合的氨基酸序列具有至少90%的同一性的氨基酸序列。6.权利要求I的BBI产品，其中所述BBI蛋白包含至少ー种与选自SEQID NO =USEQID NO 2, SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ IDNO :5、SEQ ID NO :6、以及它们的组合的氨基酸序列具有至少95%的同一性的氨基酸序列。7.权利要求I的BBI产品，其中所述产品还表现出至少约1200胰蛋白酶抑制単位/克蛋白的胰蛋白酶抑制剂活性。8.权利要求I的BBI产品，其中所述产品还表现出至少约1600胰凝乳蛋白酶抑制単位/克蛋白的胰凝乳蛋白酶抑制剂活性。9.权利要求I的BBI产品，其中所述产品还包含不超过约5内毒素単位/克蛋白的总内毒素含量。10.治疗病理状态的方法，其中所述方法包括将有效量的权利要求I的BBI产品施用于受试者。11.权利要求10的方法，其中所述病理状态是与肌肉功能障碍、细胞増殖失调、自身免疫疾病、或皮肤疾病相关的疾病。12.促进皮肤健康的方法，其中所述方法包括将有效量的权利要求I的BBI产品施用于受试者。13.鲍曼-贝克蛋白酶抑制剂(BBI)产品，其中所述BBI蛋白包含至少ー种与选自SEQID NO: I、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ IDNO :4、SEQ ID N0:5、SEQ ID NO :6、以及它们的任何组合的氨基酸序列具有至少80%的同一性的氨基酸序列。14.权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：CS沙斯蒂恩，D马什，K克勒，M梅克尔，J吴，B塔尔克，
申请(专利权)人：索莱有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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