一种降解多环芳烃污染物的混合菌剂制造技术

本发明专利技术涉及多环芳烃(PAHs)污染物的修复技术，具体地说是一种降解多环芳烃污染物的混合菌剂。由土著混合菌组成，所述土著混合菌为假单胞杆菌(Pseudomonas?sp.)B08、假单胞杆菌(Pseudomonas?sp.)BM、芽孢杆菌(Bacillus?sp.)BYB、芽孢杆菌(Bacillus?sp.)B07、苍白杆菌(Ochrobactrum?sp.)ZHL4、戈登氏菌(Gordonia?sp.)BGDS和分枝杆菌(Mycobacterium?sp.)BFZG；采用本发明专利技术菌剂可按5-10％的接种量投加，当PAHs初始浓度为180.67mgL-1时，处理9天后PAHs总量降解率可达91.21％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多环芳烃(PAHs)污染物的修复技术，具体地说是一种降解多环芳烃污染物的混合菌剂。
技术介绍
常规环境修复技术主要指化学修复法、物理修复法、生态修复法和生物修复法，后两者常被归为统一的技术，工程上一般采取原位方式。对于多环芳烃污染土壤生物修复技术已有很多研究，其优点是①费用省，其费用约为焚烧处理费用的1/4-1/3。②环境影响小，生物修复只是一个自然过程的强化，其最终产物是二氧化碳、水和脂肪酸等，不形成二次污染或导致污染物转移。③可以最大限度地降低污染物浓度等。且能改良土壤，提高地力，因此具有广泛的应用和发展前景。应用微生物来治理环境污染的研究越来越受到世界各国的重视，我国自20世纪90年代开始，针对石油及多环芳烃污染土壤生物修复技术开展了大量研究，从理论和应用均取得了显著的研究成果，但目前仍没有实用规模的成熟的生物处理技术。我国有大量污染农田土壤需要修复，特别急需农田PAHs污染土壤的生物修复技术。沈阳抚顺属于老工业化的城市，30-40年的石油污水灌溉使土壤积累了大量的PAHs，由于低环组分易于挥发、降解，而中高环部分的自然降解能力相对较低，因此土壤中更多地积累了 PAHs高环组分，其中PAHs含量按环数排列4环>5环>3环>6环>2环，4环、5环、6环占PAHs总量的79. 76%，属于老化的石油源污染土壤。对于这种大面积的污染土壤必须采用原位修复技术，而微生物的降解是去除PAHs的主要途径。如何筛选高效的降解菌，有效发挥微生物的活性是生物修复技术的关键
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种降解多环芳烃污染物的混合菌剂。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为一种降解多环芳烃污染物的混合菌剂由土著混合菌组成，所述土著混合菌为假单胞杆菌(Pseudomonas sp. )B08、假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)BM、芽抱杆菌(Bacillussp. )BYB、芽抱杆菌(Bacillus sp. )B07、苍白杆菌(Ochrobactrum sp. )ZHL4、戈登氏菌(Gordonia sp.) BGDS 和分枝杆菌(Mycobacterium sp.) BFZG ；上述菌株已于2011年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号分别为假单胞杆菌(Pseudomonas sp.) B08 (保藏编号CCTCC M 2011082)、假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)BM(保藏编号 CCTCC M 2011085)、芽孢杆菌(Bacillus sp.)BYB(保藏编号 CCTCC M 2011086)、芽孢杆菌(Bacillus sp.) B07 (保藏编号 CCTCC M 2011081)、苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)ZHL-4(保藏编号CCTCC M 2011087)、戈登氏菌(Gordonia sp.)B⑶S (保藏编号 CCTCC M 2011084)和分枝杆菌(Mycobacterium sp.) BFZG (保藏编号 CCTCCM 2011083)。将土壤样品经过含PAHs污染物的富集培养基的富集培养，再以PAHs污染物为唯一碳源的无机盐培养基驯化培养、筛选获得，即得到所述以PAHs污染物为唯一碳源的土著混合菌剂。所述富集培养基按重量百分比计为葡萄糖O. 1%、蛋白胨O. 1%、酵母膏O. 1%,NaCl O. 5%, NH4NO3 O. I %, K2HPO4 O. 5%, MgSO4 · 7Η200· 05 %、余量为自来水，ρΗ7· 2 ;所述的无机盐培养基按重量百分比计为=NaCl O. 01%,NH4NO3 O. 5%, K2HPO4 O. 5%,MgSO4 ·7Η20O.05%,ρΗ7. 2。所述富集培养基和无机盐培养基中菲、芘和苯并(a)芘3种污染物总量的浓度均为180 ZSOmgL'将混合菌剂按5_10 (质量)％的接种量投加到污染土壤或水体中。本专利技术所具有的优点 I本专利技术的混合菌剂经过含PAHs污染物的富集培养基的富集培养；再以PAHs污染物为唯一碳源的无机盐培养基驯化培养、筛选获得。其生长、繁殖能力及适应性较强。2本专利技术的菌剂是由土著混合菌组成，保持原微生物种群结构，有利于提高微生物的活性和生物量。3本专利技术的菌剂降解率高，采用本专利技术的菌剂当PAHs初始浓度为180. .时，培养9天后其降解率可达91.21%。附图说明图I为本专利技术实施例提供的菌剂中假单胞杆菌(Pseudomonassp. )B08革氏染色和鞭毛染色效果图。图2为本专利技术实施例提供的菌剂中假单胞杆菌(Pseudomonassp. )BM菌落形态图。图3为本专利技术实施例提供的菌剂中芽孢杆菌(Bacillus sp.)BYB的革氏染色和鞭毛染色效果图。图4为本专利技术实施例提供的菌剂中芽孢杆菌(Bacillus sp.)B07的革氏染色效果图。图5为本专利技术实施例提供的菌剂中苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)ZHL4的革氏染色和鞭毛染色的效果图。图6为本专利技术实施例提供的菌剂中戈登氏菌(Gordonia sp. )B⑶S的菌落形态图。图7为本专利技术实施例提供的菌剂中分枝杆菌(Mycobacteriumsp. )BFZG的菌落形态图。图8为本专利技术实施例提供的PAHs总量为180. 67mg/l时，混合菌剂对菲、芘和苯并(a)芘的降解效果图。图9为本专利技术实施例提供的PAHs总量为232. 88mg/l时，混合菌剂对菲、芘和苯并(a)芘的降解效果图。具体实施例方式实施例I7株高效降解菌的筛选菌液的制备在90ml含有PAHs污染物的富集培养基中，加入IOg污灌区(抚顺市三宝屯北后屯耕层土壤)老化的PAHs污染土壤,于120rpm/min恒温(30°C )摇床中振荡培养7d，待用。所述含有PAHs污染物的富集培养基为将2. 5ml PAHs溶液加入到无菌的500ml三角瓶中，使富集培养基中多环芳烃总量浓度为200mg/L ;待溶剂挥发完后，再将分装好的90ml无菌富集培养基倒入三角瓶中。所述富集培养基按重量百分比计为葡萄糖O. I %、蛋白胨 O. 1%、酵母膏 O. l%、NaCl O. 5%, NH4NO3 0.1%, K2HPO4 O. 5%,MgSO4 · 7H20 O. 05%,余量为自来水，pH7. 2。灭菌条件为0. IMpa湿热灭菌30min。而后按10%接种量将上述种液转接到30ml无机盐培养基的150ml三角瓶中，该培养基中PAHs总量浓度为200mg/L。于28°C，120rpm/min条件下进行驯化培养5d。以此重复三次上述富集培养和驯化培养，即得到以PAHs为唯一碳源的菌株作为微生物的混合菌剂。所述无机盐培养基按重量百分比计为NaCl O. 01 NH4NO3 0.5%, K2HPO40.5%,MgSO4 · 7H20 O. 05%、pH7. 2。灭菌条件为0. IMpa 湿热灭菌 30min。 所述菌株为高效降解菌，分别为假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)B08、假单胞杆菌(Pseudomonas sp. )BM、芽抱杆菌(Bacillus sp. )BYB、芽抱杆菌(Bacill本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种降解多环芳烃污染物的混合菌剂，其特征在于：由土著混合菌组成，所述土著混合菌为假单胞杆菌(Pseudomonas？sp.)B08、假单胞杆菌(Pseudomonas？sp.)BM、芽孢杆菌(Bacillus？sp.)BYB、芽孢杆菌(Bacillus？sp.)B07、苍白杆菌(Ochrobactrum？sp.)ZHL4、戈登氏菌(Gordonia？sp.)BGDS和分枝杆菌(Mycobacteriumsp.)BFZG；上述菌株已于2011年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号分别为假单胞杆菌(Pseudomonas？sp.)B08(保藏编号CCTCC？M？2011082)、假单胞杆菌(Pseudomonas？sp.)BM(保藏编号CCTCC？M？2011085)、芽孢杆菌(Bacillus？sp.)BYB(保藏编号CCTCC？M？2011086)、芽孢杆菌(Bacillus？sp.)B07(保藏编号CCTCC？M？2011081)、苍白杆菌(Ochrobactrum？sp.)ZHL？4(保藏编号CCTCC？M？2011087)、戈登氏菌(Gordonia？sp.)BGDS(保藏编号CCTCC？M？2011084)和分枝杆菌(Mycobacterium？sp.)BFZG(保藏编号CCTCC？M？2011083)。...

【技术特征摘要】
1.一种降解多环芳烃污染物的混合菌剂，其特征在干由土著混合菌组成，所述土著混合菌为假单胞杆菌(Pseudomonas sp. )B08、假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)BM、芽孢杆菌(Bacillus sp.)BYB、芽抱杆菌(Bacillus sp. )B07、苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)ZHL4、戈登氏菌(Gordonia sp.)BGDS 和分枝杆菌(Mycobacteriumsp.)BFZG ; 上述菌株已于2011年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号分别为假单胞杆菌(Pseudomonas sp.) B08 (保藏编号CCTCC M 2011082)、假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)BM(保藏编号 CCTCC M 2011085)、芽孢杆菌(Bacillus sp.)BYB(保藏编号 CCTCC M 2011086)、芽孢杆菌(Bacillus sp.)B07 (保藏编号 CCTCC M 2011081)、苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)ZHL-4(保藏编号 CCTCC M 2011087)、戈登氏菌(Gordonia sp.)B⑶S(保藏编号CCTCC M 20110...

【专利技术属性】
技术研发人员：台培东，巩宗强，李晓军，刘宛，张春桂，张海荣，
申请(专利权)人：中国科学院沈阳应用生态研究所，
类型：发明
国别省市：