使用NK细胞增效化合物提高治疗性抗体功效的方法和组合物技术

本发明专利技术总体上涉及用于增加治疗性抗体功效的方法和组合物。通过提高ADCC机制来增强它们的疗效。更具体而言，本发明专利技术涉及将治疗性抗体与阻断NK细胞的抑制性受体或刺激其活性受体的化合物联合使用，从而增加治疗性抗体在人类患者体内的治疗功效。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术总体上涉及提高治疗性抗体功效的方法和组合物。更具体而言，本专利技术涉及治疗性抗体与阻断自然杀伤细胞的抑制性受体或刺激自然杀伤细胞的活化受体的化合物的联合使用，从而使得哺乳动物患者的自然杀伤细胞的细胞毒性效用增强，尤其是通过提升ADCC机制以增强在人类患者中的治疗功效。
技术介绍
人类的许多治疗方案都是建立在使用治疗性抗体的基础之上。这些包括，例如使用已开发的治疗性抗体来使靶细胞衰竭，特别是病态细胞如病毒侵染的细胞、肿瘤细胞或其它病源细胞。这些抗体是典型的IgG类的单克隆抗体，典型的是具有人IgGl或IgG3 Fe部分。这些抗体可以是天然抗体或重组抗体，并且通常是人源化的小鼠抗体(即，包括 来自各种物种的功能域，典型的是人或非人灵长类的Fe部分、并带有小鼠源的可变区或互补决定区(CDR))。可选替代的是，该单克隆抗体可以在具有人Ig位点的转基因的小鼠中通过免疫作用而完全人源化，或通过由衍生自人类细胞的cDNA文库获得。该治疗性抗体的一个特殊的例子是利妥昔单抗(rituximab)(美罗华Mabthera3, Rituxan* )，它是一种由人Y I和K恒定区(因而带有人IgGl Fe部分)与带有CD20特异性的鼠可变区连接成的嵌合抗-CD20单克隆抗体。在过去的几年中，利妥昔单抗已经极大地改变了对B淋巴细胞增生性癌变，尤其是非霍奇金淋巴瘤(NHL)的治疗方案。人源化的IgGl抗体的其它例子包括用于治疗B细胞恶性肿瘤(癌变)的阿来组单抗(alemtuzumab) (Campath-1 H'A_)、和用于治疗乳腺癌的曲妥珠单抗(trastuzumab)(Herceptin1')。幵发中的治疗性抗体的其它例子正在本领域中出现。治疗性抗体的作用机制仍然是一个争论的话题。注入抗体，导致带有被该抗体特异性识别抗原的细胞的衰竭。该衰竭作用可以通过至少3种机制来介导抗体介导的细胞毒性(ADCC)、补体依赖型溶解、和通过作为抗体靶标的抗原给出的信号对肿瘤生长的直接抗肿瘤抑制。尽管这些抗体代表了一种人类治疗，尤其是对于治疗肿瘤，的全新和有效的方法，但是它们并不都具有很强的疗效。例如，尽管利妥昔单抗单独施用(给予)或与化疗药物联合施用(给予)显示出对于治疗中低度和高度NHL有效，但是30%至50%的低度NHL患者对于利妥昔单抗没有临床反应。有人提出淋巴细胞表面上的CD20表达水平、治疗期间存在的高肿瘤负荷、或血清中利妥昔单抗的低浓度可以解释为什么在一些患者中利妥昔单抗没有疗效。然而，治疗失败的实际原因在很大程度上仍然是未知的。另外，由于施用治疗性抗体的副作用，使得治疗性抗体的使用受到了限制。例如，在患者中出现的发热、头痛、恶心、低血压、哮喘、皮疹、感染和许多其它可能出现的副作用潜在地限制了施用抗体的可能剂量或频率。因此，提高治疗性抗体的疗效或者能够减少抗体的使用剂量来实现疗效从而尽量减少可能产生的副作用，是令人感兴趣的。本专利技术将着手解决这些问题及其它需要。
技术实现思路
本专利技术披露了增强治疗性抗体功效的新方法。无须受下述理论的限制，我们认为使用本专利技术方法所得到惊人的结果是由于当注入治疗性抗体时，它们在体内能够强化ADCC机制。实际上，本专利技术提供的全新的组合物和方法能够克服目前与治疗性抗体疗效相关的困难。在本专利技术中可以看到来自个体的NK细胞由于缺少NK细胞的活化，S卩通过在抑制NK细胞上的抑制受体，而具有很差的治疗性单克隆抗体(mAb)介导的ADCC。优选地，ADCC机制的提高是通过施用阻断在自然杀伤细胞上的抑制受体或刺激在自然杀伤细胞上的活化受体的化合物，从而促进哺乳动物患者增强自然杀伤细胞的细胞毒性作用来实现的。优选的化合物是抗体或其片段。所述抗体或其它化合物可以与NK细胞的抑制性受体(例如杀伤细胞抑制性受体 (KIR或NKG2A/C)分子进行反应，或与其活化受体(例如NK细胞上的NKp30、NKp44或NKp46这样的NCR)反应，从而中和细胞的抑制作用并且增加了其ADCC活性。更具体而言，本专利技术披露了治疗患者的方法，其中阻断NK细胞抑制性受体或刺激其活化受体的化合物，优选是抗体或其片段，与治疗性抗体联合施用于患者。本文中专利技术人证明了治疗性抗体通过如共注射方式与优选为抗体或其片段的这类化合物联合施用，通过例如阻断NK细胞的抑制性受体或刺激NK细胞的活化受体而克服了 NK细胞的抑制，从而可以极大地增强其治疗功效。 本专利技术还涉及包括治疗性抗体和阻断NK细胞的抑制性受体或刺激NK细胞活化受体的化合物的药物组合物，该化合物优选为抗体或其片段。本专利技术还涉及包括治疗性抗体和阻断NK细胞的抑制性受体或刺激NK细胞的活化受体的化合物的试剂盒，该化合物优选为抗体或其片段。本专利技术还涉及将阻断NK细胞的抑制性受体或刺激NK细胞的活化受体的化合物(优选为抗体或其片段)用于增加治疗性抗体的治疗功效，或用于提高用治疗性抗体进行治疗的患者体内的ADCC的应用。本专利技术还涉及阻断NK细胞的抑制性受体或刺激其活化受体的化合物(优选为抗体或其片段)和治疗性抗体用于制备治疗疾病的药物中的应用。更具体而言，该疾病的治疗需要消除(耗尽)靶细胞，优选为患病的细胞，如病毒感染的细胞、肿瘤细胞或其它病原细胞。优选地，该疾病是癌、传染性疾病或免疫疾病。更优选的是，该疾病选自包括癌症、自身免疫疾病、炎症、和病毒性的一组病症。该疾病还涉及移植排斥，更为具体的是同种异体移植排斥和移植物抗宿主疾病(GVHD)。本专利技术还包括用于减少治疗性抗体(例如通过Fe Y受体结合的抗体，优选为CD16 (Fe y RIIIa))剂量的方法。例如，治疗性抗体与阻断NK细胞上的抑制性受体或刺激NK细胞上的活性受体的化合物的联合施用可以允许使用低剂量的治疗性抗体。这类抗体可以以比没有该化合物时的推荐剂量少20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或更低的剂量使用。另外，本专利技术提供了用于测定治疗性抗体(例如由CD16结合的抗体)的有效治疗量和减小剂量的方法。该方法包括i)将第一浓度的治疗性抗体与靶细胞和NK细胞共同孵育，并且没有阻断NK细胞上的抑制性受体或刺激其上的活化受体的化合物存在；ii)将第二较低浓度的治疗性抗体与靶细胞和NK细胞共同孵育，并且存在阻断NK细胞上的抑制性受体或刺激其上的活化受体的化合物；iii)测定步骤ii)中所观察到的靶细胞的消除(耗竭)是否与步骤i)中所观察到的消除一样多。如果观察到步骤ii)与步骤i)同样有效，那么可以改变化合物和治疗性抗体的相对浓度，并且观察消除(耗竭)情况，从而确定适用于特定患者的不同条件，例如针对患者的不同需要最大程度地消除靶细胞，并尽量减少治疗性抗体的剂量或尽量减少化合物的剂量。 在一个特定方面，本专利技术提供了一种在有需要的人类患者体内治疗疾病的方法，包括a)对所述患者施用阻断NK细胞的抑制性受体或刺激其活化受体的化合物；以及b)对所述患者施用可以通过CD16进行结合的治疗性抗体。在一个实施例中，将该治疗性抗体和化合物同时施用于患者。在另一实施例中，在施用治疗性抗体I周内、4日内、3日内或同日内(即24小时内)将该化合物施用于该患者。在另一实施例中，该疾病是癌、传染性(感染性)疾病或免疫疾病。在一个实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种选择与治疗性抗体联合施用的化合物的方法，所述治疗性抗体能够经由所述治疗性抗体的Fc部分通过CD16结合且介导ADCC，所述方法包括：i)提供一种阻断NK细胞的选自NKG2A、KIR2DL1、KIR2DL2和KIR2DL3的抑制性受体的抗体；ii)在存在NK细胞、并在存在/不存在所述阻断NK细胞的抑制性受体的抗体的情况下，将所述治疗性抗体与可被所述治疗性抗体特异性识别的靶细胞一同孵育；iii)测定所述阻断NK细胞的抑制性受体的抗体对于所述NK细胞消除所述靶细胞能力的影响；其中测出所述阻断NK细胞的抑制性受体的抗体增强所述NK细胞消除所述靶细胞的能力时，表明所述阻断NK细胞的抑制性受体的抗体适用于所述方法。

【技术特征摘要】
2003.07.24 US 60/489,4891.一种选择与治疗性抗体联合施用的化合物的方法，所述治疗性抗体能够经由所述治疗性抗体的Fe部分通过⑶16结合且介导ADCC，所述方法包括 i)提供一种阻断NK细胞的选自NKG2A、KIR2DL1、KIR2DL2和KIR2DL3的抑制性受体的抗体； )在存在NK细胞、并在存在/不存在所述阻断NK细胞的抑制性受体的抗体的情况下，将所述治疗性抗体与可被所述治疗性抗体特异性识别的靶细胞一同孵育； iii)测定所述阻断NK细胞的抑制性受体的抗体对于所述NK细胞消除所述靶细胞能力的影响； 其中测出所述阻断NK细胞的抑制性...

【专利技术属性】
技术研发人员：安德烈亚·韦拉尔迪，弗朗索瓦·罗马涅，
申请(专利权)人：依奈特制药公司，佩鲁贾研究大学，
类型：发明
国别省市：