中华鳖伪雌鳖及全雄中华鳖的培育方法技术

本发明专利技术公开了中华鳖伪雌鳖及全雄中华鳖的培育方法，属于水产动物遗传育种技术领域。中华鳖伪雌鳖的培育方法，包括受精卵的孵化和稚鳖诱导，受精卵的孵化温度为25℃，刚孵化出的稚鳖用17β-雌二醇进行投喂诱导而得到中华鳖伪雌鳖，17β-雌二醇浓度为45mg/kg饲料。全雄中华鳖是由中华鳖伪雌鳖与表型和基因型均为雄性的中华鳖交配后获得。采用本发明专利技术的方法，可以得到较大数量的伪雌中华鳖，为培育全雄中华鳖提供足够数量的亲本群。采用本发明专利技术的方法，可以获得全雄中华鳖后代，免去了人工进行筛选所花费的时间和劳动力成本。

【技术实现步骤摘要】

本技术属于水产动物遗传育种
，特别涉及中华鳖伪雌鳖(即基因型为雄性表型为雌性)的诱导方法和全雄中华鳖的培育方法，应用于鳖类性别控制和全雄苗种培育。
技术介绍
中华鳘(Trionyx sinensis)其肉味鲜美、营养丰富、滋补力强,是我国名特水产养殖动物之一。目前中华鳖养殖业迅速发展，形成了规模较大、影响力较强的特种水产养殖产业。不同性别和个体间存在着明显的生长差异，雄性中华鳖生长显著快于雌性，其日增重率为雌性中华鳖的I. 09倍，因此全雄繁育技术是鳖产业需要解决的难题。目前，有关中华鳖性别分化的研究主要集中在环境因素的作用(聂刘旺等，2001 ;Ji et al. ,2003)以及性腺 发育和内分泌的研究(Lofts B. and Tsui H. W.，1997 ;朱道玉，2009)等。中华鳖在不同季节的由脑垂体与性腺共同调节性腺和附睾性腺功能(Tsui et al.，1977)。在中华鳖性腺自受精卵孵化至性成熟阶段中，胚胎发育至第5天形成生殖嵴；第16天原始生殖细胞开始分化，至第24-26天性腺分化结束形成精巢或卵巢(朱道玉，2009)。章龙珍等(1998)通过温室养殖对中华鳖性腺发育的影响研究发现，温室养殖可以使加快中华鳖性腺成熟，雌性性成熟只需21个月，雄性需10个月。在性别分化方面Ji et al. (2003)等的研究显示，中华鳖孵化温度由24°C升高到34°C，雄鳖的比例没有显著差异，表明中华鳖性别决定机制中存在GSD型。孵化温度由22°C升至35°C，雄性中华鳖的孵化比例由27. 27%提高到67. 57%,在一定范围内，温度升高会提高雄性中华鳖孵出的比例(巫旗生等，2011),与聂刘旺的研究结果类似。叶玉珍等(1999)通过甲基睾丸素对中华鳖外部性征诱导作用的研究发现，夕卜源雄性激素对稚鳖的外部性征及行为有较大的诱导作用。2007年，Kawai et al.通过基因组杂交技术发现中华鳖中存在ZZ/ZW型微小性别染色体。因此，迄今为止，通过温度的环境因素和雌性激素诱导因素来控制中华鳖的性别，国内外尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术是通过研究孵化温度和17 β_雌二醇对中华鳖进行性别控制，得出影响中华鳖高雌性率的孵化温度条件和17 β -雌二醇的投喂诱导浓度，建立诱导中华鳖性逆转的技术方法，用于中华鳖性别控制和全雄中华鳖培育。本专利技术的技术方案如下中华鳖伪雌鳖的培育方法，包括受精卵的孵化和稚鳖诱导，受精卵的孵化温度为250C，刚孵化出的稚鳖用17 β -雌二醇进行投喂诱导而得到中华鳖伪雌鳖，17 β -雌二醇投喂浓度为45mg/kg饲料(每公斤饲料中拌45mg的17 β -雌二醇),诱导时间为30天。所述的中华鳖伪雌鳖培育方法，对稚鳖用17 β -雌二醇按照45mg/kg饲料的浓度进行药物诱导30天。全雄中华鳖的培育方法，根据上述方法培育获得的中华鳖伪雌鳖，再和表型、基因型均为雄性的中华鳖交配受精、人工采卵孵化，最终获得的后代为全雄中华鳖。本专利技术创新之处在于结合了两种影响中华鳖性别发育的外界因素，在不同阶段对中华鳖进行性别控制或诱导，来提高基因型为雄性表型为雌性的伪雌中华鳖数量；并通过伪雌鳖与表型和基因型均为雄性的真雄鳖交配来得到全雄中华鳖后代。温控阶段本实验设置六个孵化温度，分别是22°C、25°C、28°C、30°C、32°C、35°C，每个指标设一个重复，每组100枚，设置一对照组，在孵化室内常温孵化。所有卵均为同一晚产出，均重为5. I克，受精率92%。孵化基质沙粒经阳光暴晒5小时，实验组放恒温培养箱内孵化，孵化期间每天喷洒与砂温度相近的水。孵化箱的相对湿度保持在85%左右，温度由恒温箱控制不变直至出壳。由于性别分化主要是在孵化前期进行，孵化后期最宜在正常温度下进行，以利于稚鳖出壳生长，判断出甲鱼改变性别的关键时期。因此，根据中华鳖卵 的孵化积温值，25天后对在35°C、32°C、30°C、28°C下的卵移出恒温箱至孵化室进行孵化出壳。50天后对在25°C、22°C下的卵移出恒温箱至孵化室进行孵化出壳。药物诱导阶段对25°C -35°c孵化出来的稚鳖用17β-雌二醇进行诱导，将17 β -雌二醇分别以30mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、65mg/kg浓度的添加量到饲料中进行投喂诱导，分别诱导30天。其余的养殖条件与稚鳖的正常培养方法一致。本专利技术具有以下有益效果I、采用本专利技术的方法，可以得到较大数量的雌性中华鳖，为培育全雄中华鳖提供足够数量的亲本群。2、采用本专利技术的方法，可以获得全雄中华鳖后代，免去了人工进行筛选所花费的时间和劳动力成本。3、本专利技术的方法给出了温度和药物对中华鳖性别分化及影响的关系，为进一步研究中华鳖性别分化机制及采用生物技术方法进行性别控制奠定基础。具体实施例方式以下结合具体实施例，对本专利技术进行详细说明。实施例一一、受精卵采集I、所有孵化用具都应进行消毒处理或暴晒杀菌；2、在集卵箱中放一层比较干的细沙；3、对人工产卵沙池全面翻砂采集，采集完后整理好沙池，以便亲鳖下次产卵；4、采集的鳖卵需在沙内暂放2-3天时间，以便在正式孵化前清除未受精卵；二、受精卵的鉴别经过暂放2-3天的鳖卵，已经明显分化出动植物极，分界清晰，卵壳光亮，白色的动物极占据鳖卵的大部分，到达卵壳中线稍偏下位置的为受精卵，否则为非受精卵。三、受精卵孵化方式“地层式”，孵化室内首先在地下铺一层厚黄土并压紧，摆受精卵前应放一层3厘米的干细沙，(黄土和沙都应消毒或暴晒处理)。孵化箱内孵化操作类似于孵化室，即在箱底铺层细沙。摆放时应动物极朝上，两层为宜。四、孵化期间管理I、温度的控制，将中华鳖卵埋在装满细沙的塑料盆中，分别放置于温度为22°C、25 V、28°C、32 V和35°C的恒温孵化箱中孵化；采用在恒温孵化箱内洒水和在孵化盆的细沙表面喷水的方法来维持孵化湿度，使其相对湿度保持约85%。先干后湿，前20天只需保持少许的湿度，出苗期间无需喷水；2、每天需保证孵化箱内(早、中、晚各一次)通风换气，以便卵的呼吸；3、观察孵化期间卵壳颜色的变化淡黄色-出现白色区-白色区扩大至中线偏下-暗黄色-淡紫红-紫红-乌黑色-乳白色，此时胚胎发育完成，稚鳖即将出壳。五、出壳后管理 稚鳖刚出壳时十分幼嫩，不宜立即入池，应放在光滑的陶瓷或塑料盆中用清水暂养(一个直径40厘米的盆可暂养稚鳖20只左右)，经常换水，及时清除脱落的脐带，12 24小时后，待稚鳖脐带完全脱落、收缩后，再放入暂养池或稚鳖池养殖；入池前应剔除脐带未收好、质量差的稚鳖；这个阶段无需投食。六、稚鳖放养I、放养前鳖体消毒用2%食盐水浸泡稚鳖10分钟，或15 20克/米3高锰酸钾溶液浸洗消毒15 20分钟，或聚维酮碘30克/米3，浸洗15分钟；2、放养时的注意事项鳖苗转运时每箱不要装得太多，以免相互挤压，过度撕咬、抓伤(每箱放适量切碎的水葫芦可减轻鳖苗间的撕咬、抓伤)；放养时沿池塘四周均匀投放，切不可只集中投放在几处，因为鳖苗体质弱，活动能力差，往往不会自行分散游走；3、放养后3小时内全塘均匀泼洒硫醚沙星O. 6mg/L或聚维酮碘I. 5mg/L,以促进鳖苗体表创伤的愈合，防止继发性感染白斑病；第二天再用同样剂量重复一次，下塘后一周内本文档来自技高网...

【技术保护点】
中华鳖伪雌鳖的培育方法，其特征在于，包括受精卵的孵化和稚鳖诱导，受精卵的孵化温度为25℃，刚孵化出的稚鳖用17β？雌二醇进行投喂诱导而得到中华鳖伪雌鳖，17β？雌二醇浓度为45mg/kg饲料。

【技术特征摘要】
1.中华鳖伪雌鳖的培育方法，其特征在于，包括受精卵的孵化和稚鳖诱导，受精卵的孵化温度为25°c，刚孵化出的稚鳖用17 β-雌二醇进行投喂诱导而得到中华鳖伪雌鳖，17 β -雌二醇浓度为45mg/kg饲料。2.根据权利要求I所述的中华鳖伪雌鳖培育...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓清，夏建海，熊钢，马晓，戴振炎，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：