本发明专利技术提供一种芍药胚培养的方法，包括如下步骤：通过对芍药种胚的启动培养、丛生芽诱导培养、丛生芽增殖培养、壮苗生根培养，得到完整的芍药组培苗植株。本发明专利技术所提供的芍药胚培养方法操作简单，成本廉价，能够广泛适用于多数芍药品种，有效解决了芍药传统分株繁殖不能满足产业化生产需求，芍药地下芽组培均存在困难的问题。本发明专利技术还提供所述芍药胚培养的方法在芍药繁育中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物的组织培养领域，具体涉及ー种芍药胚培养方法。
技术介绍
芍药(Peaonia lactiflora Pali.)为芍药科芍药属多年生宿根草本植物，是我国的传统名花，在中国已有3900多年的栽培历史。播种繁殖，方法简单，种子随采随播，繁殖系数大，但芍药播种繁殖存在如下问题I)由于经过几千年的人工栽培选育，芍药优良品种的雌蕊、雄蕊大部分瓣化，结实率低；2)芍药种子有上胚轴休眠现象，种子萌发对季节的依赖性强，繁殖周期长，播后发育良好的植株4-5年才可开花；3)芍药是异花授粉植物，播种繁殖无法保持母本的优良性状。目前，芍药常规繁殖方法以分株繁殖为主，3-5年分株一次，周期长，繁殖系数低，很难适应和满足产业化大生产和国内外市场的需求。芍药组织培养可以解决育种中远缘杂交不能正常发育、种子休眠、种子生活力地下和自然不育、育种周期过长、品质改良等方面的问题，且通过组织培养可以大大加快其繁殖速度，缩短育种年限，满足现代大規模生产的需要。但关于芍药属植物的离体培养研究多集中于牡丹，芍药的研究近年来虽已有进展，但仍显薄弱，目前国内外研究较少，用的最多的是地下芽的组培，但是其生根移栽困难，且在打破上胚轴休眠、胚苗的诱导、増殖、生根方面存在较大的难题。而芍药胚培养目前还未形成一套完整的体系，不能为芍药的育种和生长提供很好的帮助。
技术实现思路
针对芍药传统分株繁殖不能满足产业化生产需求，芍药地下芽组培均存在困难的现状，本专利技术的目的在于提供，包括如下步骤I)胚的启动培养获得经灭菌消毒的芍药胚，接种到以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0. 2-0. 5mg/L、萘こ酸的浓度为0-0. 05mg/L、赤霉素的浓度为0. lmg/L的培养基上，常规培养；2)将步骤I)中获得的胚苗，先后进行丛生芽诱导培养、丛生芽増殖培养、壮苗生根培养，获得芍药组培苗。其中，步骤I)所述胚的启动培养，所用培养基优选以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0. 2mg/L、萘こ酸的浓度为0. 05mg/L、赤霉素的浓度为0. lmg/L的培养基上，或者以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0. 5mg/L、萘こ酸的浓度为Omg/L、赤霉素的浓度为0. Img/L的培养基。其中，步骤I)所述获得经灭菌消毒的芍药胚，具体方法为将芍药种子剥除种皮后，用洗洁精清洗种子表面的污溃，用1-3% (重量百分比)的NaClO浸泡20-30min，流水冲洗30-40min，用75% (体积百分比)的酒精消毒30s，无菌水冲洗至少一次，再用0. 1% (重量百分比)的HgCl2消毒lOmin，无菌水冲洗至少一次，去除胚乳，获得经灭菌消毒的芍药胚。其中，步骤2)所述丛生芽诱导培养，所用培养基为以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤I. Omg/L、赤霉素0. 5mg/L的培养基。其中，步骤2)所述丛生芽増殖培养，所用培养基为以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤I. Omg/L、赤霉素0-1. Omg/L、激动素0-1. 5mg/L的培养基。优选以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为I. Omg/L、赤霉素的浓度为I. 0mg/L的培养基。其中，步骤2)所述壮苗生根培养，所用培养基为以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有吲哚こ酸2. Omg/L、活性炭质量百分含量0. 2%的培养基。 其中，所述胚的启动培养，培养时间为30天；所述丛生芽诱导培养，培养时间为30-40天；所述丛生芽增殖培养，培养时间为30-40天；所述壮苗生根培育，培养时间为30天。其中，芍药胚取材时间为9月上旬。其中，所述常规培养的培养条件为，温度25±2°C，光照时间14小吋/天，光照強度1500-20001x。其中，所述芍药，为芍药品种粉玉奴、粉莲绒或亳芍。本专利技术还提供所述的ー种芍药胚培养的方法在芍药繁育中的应用。本专利技术的有益效果在干(I)本专利技术通过组培可以解决芍药常规播种选育过程中远缘杂交种子不能正常发育、种子休眠、种子生活力低下和自然不育、育种周期过长、不能保持母本品质等方面的问题，为芍药的育种工作带来很大的方便，为芍药产业化生产奠定基础。(2)芍药组培一直是国内外的难题，用的最多的是地下芽的组培，但是其生根移栽困难，而通过愈伤的途径，其分化存在的问题目前也很难解決，而本专利技术通过芍药胚培养能很好的解决上述难题。(3)关于芍药胚培养的系统的方法未见报道，而本专利技术通过对芍药种胚的启动培养、丛生芽诱导培养、丛生芽増殖培养、壮苗生根培养，得到完整的芍药组培苗植株，提供了一种有效的芍药成熟胚离体培养方法。(4)本专利技术提供的芍药胚培养方法，操作简单，成本廉价，能够广泛适用于多数芍药品种。(5)本专利技术还研究了多效唑(PP333)对芍药胚培养的壮苗和生根的影响。具体实施例方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例I芍药品种粉玉奴的胚培养于9月初从北京市昌平区小汤山国家花卉工程中心采取3年生以上的芍药品种粉玉奴(可市售)的成熟种子作为外植体。I)胚的启动培养将采集的种子用自来水浸泡3d后用刀片剥除外层坚硬的种皮，用洗洁精清洗种子表面的污溃，用1%的NaClO浸泡30min，流水冲洗40min，用75%的酒精消毒30s，无菌水冲洗I次，再用0. 1%的HgCl2消毒lOmin，无菌水冲洗4次，去除胚乳后，将里面的小胚接种在胚的启动培养基上，启动培养采用不同的启动培养基分批次进行，采用L9(34)的正交设计。启动培养基配方为表I所列的a-i各组培养基配方，a[l/2MS(Ca2+加倍)+0. 2BA]为以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤0. 2mg/L的培养基，b [1/2MS (Ca2+加倍)+0. 2BA+0. 05NAA+0. IGA3]为以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤0. 2mg/L、萘こ酸0. 05mg/L、赤霉素0. lmg/L的培养基，其他各组类推。各组培养基除激素种类与浓度不同外，均添加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，其他添加物及pH (5. 6-6. O )均相同。温度25 ± 2 °C，光照时间14小吋/天，光照强度1500-2000Ix条件下，常规培养30天。去除了种皮和胚乳的种胚接种一周左右，子叶就逐渐的展开，30天后子叶已完全展开，由原先的白色或红色逐渐变成緑色，在两片子叶中间有茎挺抽出，很多胚也直接长出主根,但也有部分底部长出愈伤组织。培养30天后，统计种胚的发芽率、成苗率、生根率(表I)其中，b组培养基(发芽率70. 00%,成苗率30. 68%,生根率6. 67%)。和d组培养基(发芽率60. 00%,成苗率达到40. 00%,生根率13. 31%)经验证本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种芍药胚培养方法，其特征在于，包括如下步骤：1）胚的启动培养：获得经灭菌消毒的芍药胚，接种到以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6？苄氨基嘌呤的浓度为0.2？0.5mg/L、萘乙酸的浓度为0？0.05mg/L、赤霉素的浓度为0.1mg/L的培养基上，常规培养；2）将步骤1）中获得的胚苗，先后进行丛生芽诱导培养、丛生芽增殖培养、壮苗生根培养，获得芍药组培苗。
【技术特征摘要】
1.一种芍药胚培养方法，其特征在于，包括如下步骤 1)胚的启动培养获得经灭菌消毒的芍药胚，接种到以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0. 2-0. 5mg/L、萘こ酸的浓度为0-0. 05mg/し赤霉素的浓度为0. lmg/L的培养基上，常规培养； 2)将步骤I)中获得的胚苗，先后进行丛生芽诱导培养、丛生芽増殖培养、壮苗生根培养，获得芍药组培苗。2.如权利要求I所述ー种芍药胚培养的方法，其特征在于，步骤I)所述胚的启动培养，所用培养基为以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0. 2mg/L、萘こ酸的浓度为0. 05mg/L、赤霉素的浓度为0. lmg/L的培养基上，或者以Ca2+浓度加倍的1/2MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0. 5mg/L、萘こ酸的浓度为Omg/L、赤霉素的浓度为0. lmg/L的培养基。3.如权利要求I所述ー种芍药胚培养的方法，其特征在于，步骤I)所述获得经灭菌消毒的芍药胚，具体方法为将芍药种子剥除种皮后，用洗洁精清洗种子表面的污溃，用1-3%的NaClO浸泡20-30min，流水冲洗30_40min，用75%的酒精消毒30s，无菌水冲洗至少一次，再用0. 1%的HgCl2消毒lOmin，无菌水冲洗至少一次，去除胚乳，获得经灭菌消毒的芍药胚。4.如权利要求I所述ー种芍药胚培养的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：于晓南，沈苗苗，张启翔，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：
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