一种PA-MSHA菌株IgY及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种甘露糖敏感性绿脓杆菌（PA-MSHA）菌株IgY及其制备方法和应用，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(S1)制备PA-MSHA菌株的抗原；(S2)利用所述PA-MSHA抗原，对产蛋禽类进行注射免疫，检取免疫禽类所产的免疫蛋；(S3)取所述免疫蛋的蛋黄，提取PA-MSHA菌株IgY。本发明专利技术将甘露糖敏感性绿脓杆菌免疫产卵家禽，再从禽卵中提取PA-MSHA菌株IgY，可进一步制成保健品和生物制品，一方面可用于防治广谱的机会感染菌群，如大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎球菌、变形球菌、幽门螺旋杆菌等，另一方面还可以对多种癌症起到良好的辅助治疗效果，如乳腺癌、肝癌、淋巴癌、肺癌、膀胱癌、白血病等，尤其适用于肿瘤的主、被动免疫治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及甘露糖敏感性绿脓杆菌，更具体地说，涉及一种甘露糖敏感性绿脓杆菌(PA-MSHA)菌株IgY及其制备方法、相关保健品和生物制品以及应用。
技术介绍
I、肿瘤临床治疗中的局限性目前每年全球癌症死亡人数约为700万人，特别值得注意的是其中24%发生在中国，而缺乏积极有效的药物对恶性肿瘤进行针对性治疗是其主要原因。恶性肿瘤患者一般中晚期在体内会释放远高于正常水平的免疫抑制因子，抑制细胞活性并且直接抑制各种淋巴细胞因子的分泌，从而降低机体的细胞免疫和体液免疫作用。目前对恶性肿瘤的治疗依然是以手术和化疗为主。手术除了能有效地切除部分的肿瘤组织以外，另一方面也会对机 体产生新的伤口并再次对机体的免疫环境造成破坏。而临床上广为使用的化疗药物，在杀死癌细胞的同时，会部分杀死患者体内的正常细胞，包括数量已经有所减弱的免疫细胞，因此本已低下的免疫功能会再次遭到损害，从而导致一方面未杀死的癌细胞更易得以增殖，另一方面病人虚弱的免疫系统会极大加剧其他病毒或病菌感染的概率。因此，很大程度上来说对于手术或化疗后的患者而言，其体内因缺失足量有效的免疫抗体是其病情进一步恶化，同时引起各种病菌的机会性感染的根本原因。2、PA-MSHA菌苗的广谱抗菌特性以及对肿瘤的辅助治疗特性PA-MSHA菌株是牟希亚教授于1984年分离培育得到的一种特异性绿脓杆菌，保藏号为CGMCC0190，其专利号为CN 1090602A。该菌株的灭活菌苗已作为一种生物制品在1996年获得国家二级新药的认证。在临床上，该灭活菌苗作为一种广谱抗菌和肿瘤的辅助治疗产品已经得到广泛应用。3、产蛋禽类IgY被动免疫是直接应用特异抗体中和致病微生物及其产生的毒素，其来源主要包括人类免疫球蛋白、牛初乳、产蛋禽类卵黄免疫球蛋白(IgY)和单克隆抗体。相比较而言，产蛋禽类例如鸡卵黄免疫球蛋白具有制备简单、成本低廉以及无毒性的显著特点。在自然界状态下，IgY从母鸡血液转运到蛋黄中以保护未来的小鸡免受各种感染性疾病。用抗原来人工免疫后的蛋鸡是大规模生产多克隆抗体的主要来源。鸡IgY在结构和功能上与哺乳动物IgG相似，目前国内外已有不少利用鸡IgY来预防和治疗各种感染性疾病以及肿瘤的研究报道和专利申请，如小儿轮状病毒腹泻、消化道感染、呼吸道感染、胃癌、肝癌等。利用菌苗来免疫蛋鸡从而收获得到鸡IgY的专利已有申请，但能达到广谱性抗菌作用以及在肿瘤中能起到广谱免疫辅助治疗作用的鸡IgY尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于，针对现有产蛋禽类IgY未具有广谱性抗菌作用以及抗肿瘤辅助作用的缺陷，提供一种PA-MSHA菌株IgY及其制备方法和应用。为解决上述技术问题，本专利技术提供一种PA-MSHA菌株IgY的制备方法，其中包括以下步骤(SI)制备PA-MSHA菌株的抗原；(S2)利用所述PA-MSHA抗原，对产蛋禽类进行多点皮下注射免疫，检取免疫禽类所广的免疫蛋；(S3)取所述免疫蛋的蛋黄，提取PA-MSHA菌株IgY。在本专利技术所述的PA-MSHA菌株IgY的制备方法中，所述步骤(SI)包括将制备的保藏号为CGMCC0190的甘露糖敏感性绿脓杆菌进行活化后在LB固体培养基中培养18 20h，培养温度均为37°C，然后接种于大豆酶解液培养基内培养，收集培养液后即制备得到所述PA-MSHA菌株的抗原。 在本专利技术所述的PA-MSHA菌株IgY的制备方法中，所述步骤(S3)包括a)取免疫蛋去壳取黄，除去粘附于蛋黄膜上的蛋白组分，浙干后刺破蛋黄膜，收集蛋黄;b)将上述收集的蛋黄充分搅拌均匀后，加入蛋黄匀浆5倍体积O. lmol/LPH7. 2磷酸盐-海藻糖稀释液，制成稀释蛋黄液，在该稀释蛋黄液中海藻糖的重量百分比为25% ；c)将上述稀释蛋黄液置于-20°C冰冻3小时，然后取出于温室复融并以SOOr/min低速离心后浙出收集上清液，然后再向沉淀物中加入3倍体积的O. lmol/L PH7. 2磷酸盐-海藻糖稀释液，混匀溶解沉淀物，依上法再次冻融收集上清液，如此反复冻融3次，合并收集各次得到的上清液备用；d)向上述收集上清液中按比例加入硫酸铵、硫酸钠、PEG、硫酸葡聚糖、藻酸钠或辛酸沉淀剂中的任一种或其复合物，离心收集其沉淀物，该沉淀物中即含有IgY ；e)将上述沉淀物用蒸馏水复溶后透析或超滤浓缩或凝胶层析，进一步纯化得IgY。在本专利技术所述的PA-MSHA菌株IgY的制备方法中，所述产蛋禽类为母鸡。本专利技术还提供了一种PA-MSHA菌株IgY，采用如上所述的方法制备。本专利技术还提供了一种PA-MSHA菌株IgY保健品和生物制品，由如上所述的PA-MSHA菌株IgY组成。本专利技术还提供了一种PA-MSHA菌株I gY保健品和生物制品，包含如上所述的PA-MSHA 菌株 IgY。本专利技术还提供了一种如上所述的PA-MSHA菌株的应用，用于制备防治大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎球菌、变形球菌、幽门螺旋杆菌所引起的原发病的保健品或生物制品。本专利技术还提供了一种如上所述的PA-MSHA菌株IgY保健品和生物制品的应用，用于制备在乳腺癌、肝癌、淋巴癌、肺癌、膀胱癌、白血病治疗时提高机体免疫功能的辅助治疗的保健品或生物制品。实施本专利技术的PA-MSHA菌株IgY及其制备方法，具有以下有益效果本专利技术将甘露糖敏感性绿脓杆菌免疫产卵家禽，再从禽卵中提取提纯后可得到该PA-MSHA菌株IgY，可进一步制成保健品和生物制品，一方面可用于防治广谱的机会感染菌群，如大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎球菌、变形球菌、幽门螺旋杆菌等，另一方面还可以对多种癌症起到良好的辅助治疗效果，如乳腺癌、肝癌、淋巴癌、肺癌、膀胱癌、白血病等。本产品具有良好的活性和特异性，适用于广谱抗菌以及抗癌，尤其适用于肿瘤的主、被动免疫治疗。具体实施例方式本专利技术的目的在于以甘露糖敏感性绿脓杆菌(PA-MSHA)作为抗原免疫产蛋禽类例如母鸡后，在免疫蛋中提取纯化得到IgY产品，并应用该产品配制保健品和生物制品，用于广谱抗菌以及肿瘤治疗中的辅助治疗。本专利技术采用的甘露糖敏感性绿脓杆菌(PA-MSHA)菌株为牟希亚于1984年分离培育得到的一种特异性绿脓杆菌，保藏号为CGMCC0190，其专利号为CN 1090602A。本专利技术提供的PA-MSHA菌株IgY为具有广谱抗菌及抗癌的卵黄免疫球蛋白的产品，具体而言。是一种抗大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎球菌、变形球菌、幽门螺旋杆菌以及在乳腺癌、肝癌、淋巴癌、肺癌、膀胱癌、白血病等疾病治疗中起辅助作用的卵黄免疫球蛋白，可用于制备保健品和生物制品。该产品可通过以下步骤获得用保存的上述PA-MSHA菌株接种LB半固体培养基，37°C过夜培养，从而得到活化的PA-MSHA菌株。在LB固体培养基斜面接种活化的PA-MSHA菌株，37°C培养18 20h，然后接种于大豆酶解液培养基内培养，收集培养液后即制备得到 PA-MSHA菌株的抗原。将培养液注射给产蛋禽类，尤其是母鸡，使其产生大量抗体并被输送到蛋黄中储存。其中注射部位包括肌肉、皮下、皮内、血管和生殖腔囊。待5 20天后的免疫母鸡所产生的鸡蛋中即含有相应的IgY。下面结合实施例更为具体地描述本专利技术的详细内容，但本专利技术的内容不仅限于此。实施例I :具有广谱抗菌及抗癌的卵黄免疫球蛋白的产品的获本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：祁振强，卢超，
申请(专利权)人：深圳市宝舜泰生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：