从大豆工艺流中回收鲍曼-贝克抑制剂蛋白的方法技术

本发明专利技术描述了纯化具有指定的总BBI蛋白浓度和其它BBI特性(包括例如胰凝乳蛋白酶抑制剂活性和内毒素含量)的BBI产品的新方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开提供了从大豆工艺流中回收纯化的鲍曼-贝克抑制剂(BBI)蛋白的方法。具体地讲，本公开提供的方法包括层析分离，以及任选地，分离和移除BBI产品的一种或多种分离技术，所述BBI产品具有以总BBI蛋白浓度表示的至少90重量％的纯度。
技术介绍
大豆工艺流包含显著量的蛋白酶抑制剂。蛋白酶抑制剂已知至少抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶以及可能抑制调控一些关键代谢功能的多种其它关键跨膜蛋白酶。蛋白酶的局部给药对于例如特应性皮炎的病症是有用的，特应性皮炎是皮肤炎症的一种普通形式，其可以局限于少数区块或者涉及身体的大部分。蛋白酶抑制剂的褪色活性和它们防止紫外线导致的色素沉着的能力在体外和体内均已被证明(参见例如，Paine等人，J. Invest.Dermatol. ,116 :587-595)。蛋白酶抑制剂还被报道有利于创伤愈合。例如，分泌性白细胞蛋白酶抑制剂被证明当被局部施用时逆转了组织的破坏并加速了创伤愈合过程。此夕卜，丝氨酸蛋白酶抑制剂还能够有助于在红斑狼疮病人中降低疼痛(参见例如，美国专利6，537，968)。天然存在的蛋白酶抑制剂可见于多种食物中，例如粮谷类(燕麦、大麦和玉米)、芽甘蓝、洋葱、甜菜根、小麦、龙爪稷和花生。所关注的一个来源是大豆。大豆中存在的蛋白酶抑制剂的平均水平，两种对于库尼兹和鲍曼-贝克最重要的蛋白酶抑制剂分别是约I.4%和 0. 6%。称为鲍曼-贝克(Bowman-Birk)蛋白酶抑制剂(BBI)的蛋白酶抑制剂，是从大豆分离的胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的低分子量蛋白(7-8kDa)双头抑制剂。它最早是在超过六十年前被发现的(Bowman, Proc. Soc. Exptl. Med.，1946,63, 574 ;并随后还被 Birk, Y. Biochim. Biophys. Acta,1961,54,378-381 ；和 Birk Y.等人，BiochemicalPreparations, 1968,第12卷,第25-29页表征)，并且由于发现其在多种实验体系中有效的抗癌效应，已重新吸引了科学界的兴趣。除了抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶外，BBI还具有抑制其它蛋白酶活性的能力，例如组织蛋白酶G、弹性蛋白酶和类糜蛋白酶(Birk Y.，Int J Pept Protein Res, 1985, 25 113-131 ;Larionova 等人,Biokhimiya, 1993, 58 :1437-1444 ;和 Ware 等人,Archives ofBiochemistry and Biophysics 1997, 344 :133-138,它们每个均以引用方式并入本文)。BBI蛋白由大约65-77个氨基酸残基和大约七个二硫键组成。BBI是蛋白，其特征在于高的半胱氨酸氨基酸浓度( 20重量％ )、高的水溶性、对热变性的抗性和具有在独立的抑制位点抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的能力。在培养物和实验动物中，粗制的或纯化的BBI阻止或减少多种类型的诱导的细胞恶性转化是普遍已知的(Kennedy，A. R，The Bowman-Birk Inhibitorfrom soybeans as an anticarcinogenic agent， Am J of Clinical Nutr，1998 :68，1406S-1412S)。 也参见例如(I)Kennedy，A. R. Chemopreventive agents protease inhibitors.PharmacoIogy&Therapeutics78 167-209,1998 ； (2)Kennedy,A. R. Overview Anticarcinogenic activity of protease inhibitors. In ProteaseInhibitors as Cancer Chemopreventive Agents ； (3)Troll, W.，Kennedy, A.R (编辑);Plenum Publishing Corporation New York，9-64，1993 ; (4)Kennedy，A. R.，Szuhaj, B. F.，Newberne，P. M.，Billings，P. C. Preparation and production ofa cancer chemopreventive agent，Bowman-Birk Inhibitor Concentrate. Nutr.Cancerl9 :281-302,1993 ； (5)Kennedy, A. R. Prevention ofcarcinogenesis by proteaseinhibitors. Cancer Res. (suppl.). 54 :1999s_2005s，1994 ； (6)Kennedy, A. R. In vitrostudies of anticarcinogenic protease inhibitors. In Protease Inhibitors asCancer Chemopreventive Agents ;Troll，W.，Kennedy, A. R.(编辑)；Plenum PublishingCorporation New York，65-91，1993 (7)Kennedy，A. R.，The Status of Human Trials Utilizing Bowman-Birk Inhibitor Concentrate from Soybeans. In Soy in Health andDisease Prevention,Michihiro Sugano (编辑)，CRC Press LLC，Boca Raton，Florida，第12章，第 207-223 页，2005 ; (8) Kennedy，A. R. Status of current human trials utilizingBowman Birk Inhibitor Concentrate. Proceedings of a Symposium,Soy&Health 2006 ；Dietetic Applications-Dietetic Applications，，，在 2006 年 10 月 12 日和 13 日举行，Dusseldorf，Germany (已接受);(9)Bartsch 矛口Gerhauser5 Molecular Mechanisms ofCancer Induction and Chemoprevention. In Chemoprevention of Cancer and DNADamage by Dietary Factors， Siegfried KnasmulIer, Ian Johnson， David DeMarini 和Clarissa Gerhauser (编辑)，Wiley-VCH Verlag, GmbH&Co.，KGaA，Weinheim，2009。富集了 BBI的大豆提取物，通常称为鲍曼-贝克抑制剂浓缩物(BBIC)，已于1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：D马什，CS沙斯蒂恩，B塔尔克，K克勒，J吴，M梅克尔，
申请(专利权)人：索莱有限责任公司，
类型：发明
国别省市：