本发明专利技术提供表达特定细胞表面和基因表达标记物的类孢子细胞子群。在一个实施例中，所述细胞表达选自由以下各物组成的群组的至少一种细胞表面或基因表达标记物：Oct4、nanog、Zfp296、cripto、Gdf3、UtF1、Ecat1、Esg1、Sox2、Pax6、巢蛋白、SCA-1、CD29、CD34、CD90、B1整合素、cKit、SP-C、CC10、SF1、DAX1和SCG10。本发明专利技术还提供从类孢子细胞群中纯化出相关类孢子细胞子群的方法，以及诱导类孢子细胞分化成内胚层、中胚层或外胚层来源的细胞的方法。所述类孢子细胞可用于产生源自于全部三种胚层的细胞，并且可用于治疗在包括视网膜、肠、膀胱、肾脏、肝脏、肺、神经系统或内分泌系统在内的多种组织中的任一种中具有功能细胞缺陷的患者。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及类孢子细胞子群的鉴别、分离和使用。
技术介绍
多能细胞的使用已经在医药研究领域，尤其是提供用于治疗因遗传缺陷、损伤和/或疾病过程引起的组织损伤的试剂领域引起人们的关注。理想情况是，可将能够分化成受影响细胞类型的细胞移植到有需要的个体中，在个体体内，这些细胞将与器官微环境相互作用，并提供必要的细胞类型来修复损伤。胚胎干(Embryonic stem, ES)细胞是来源于胚泡的多能细胞，其可在体外以未分化状态无限增殖，可在体内分化成所有细胞谱系，并且可在体外经过诱导而分化成大多数细胞类型(马丁(Martin)，美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci USA.), 78 :7634-7638 (1981)) 尽管已经从人类中分离出 ES 细胞，但其在研究以及治疗学中的应用因伦理方面的约因而受到阻碍(弗兰克(Frankel)，科学(Science). 287 :1397(2000))。已经不断地尝试从包括造血细胞(美国专利第5，750，397号)、神经细胞(盖吉(Gage)，科学，287 :1433-1438(2000))、胃肠细胞(普腾(Potten)，伦敦皇家学会哲学汇刊 B 辑生物科学(Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci.) 353 :821-830 (1998))、表皮细胞(瓦特(Watt)，伦敦皇家学会哲学汇刊B辑生物科学，353 :831-837(1998))和间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)(美国专利第5，736，396号)在内的非胚胎 组织分离干细胞。也已经从骨髓中纯化出另一细胞群，即专能成体祖细胞(multipotentadult progenitor cell, MAPC)(雷耶斯(Reyes)等人，血液学(Blood), 98 (9)2615-2625(2001);雷耶斯和维特法雷(Vetfaillie)，纽约科学院年报(Ann NY Acad Sci)，938 :231-235(2001))。这些细胞能够在体外扩增以实现超过100代群体倍增，同时无端粒缩短或不会发生核型异常。经显示，MAPC也能在指定培养条件下分化成各种间充质细胞类型(例如成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和骨骼肌成肌细胞)、内皮、神经外胚层细胞，且更近来显示其分化成肝细胞(斯查沃兹(Schwartz)等人，临床研究(Clin Invest), 109 1291-1302(2000))。使用ES细胞或其它多能细胞用于个体的再生疗法的一个问题是控制这些细胞的生长和这些细胞成为个体治疗所需的特定细胞类型的分化。如斯查丁纳(Schuldiner)等人，美国国家科学院院刊，97 :11307-11312(2000)中所揭露，其中所用八种生长因子都不能仅定向分化成一种细胞类型。因此，仍需要用于产生适于多种应用(包括治疗各种器官和/或组织的损伤和/或疾病)的可移植专能和多能细胞群的新方法。此外，专能或多能细胞的来源因这些细胞必须从活体组织采集而受到限制。瓦坎提(Vacanti)等人的美国公开申请案第2004/0057942号和第2004/0033598号揭露了对缺氧具有特别高耐受性的小原始细胞。经证实，这些称为“类孢子”细胞的细胞可基本上耐受完全缺氧环境至少24小时(尽管缺氧4小时或24小时，细胞仍可存活)。类孢子细胞的增殖能力比从特化组织分离的终末分化细胞强。增殖能力是一种重要的特性，因为组织工程、细胞疗法和基于基因的疗法常常会因医师无法获得足够数量的细胞投予患者而受阻。因此，本专利技术一个目的是提供表达特定细胞表面或基因表达标记物的类孢子细胞子群。本专利技术另一目的是提供多能类孢子细胞子群，以及分离多能类孢子细胞子群的方法。
技术实现思路
已经鉴别出表达特定细胞表面受体和/或基因表达标记物的类孢子细胞子群。在一个实施例中，所述细胞表达至少一种细胞表面/基因表达标记物，例如0ct4、nanog、2邙296、《^ 仂、6(^3、仳卩1、￡。3衍、￡8§1、5( 2、？3叉6、巢蛋白、50六-1、0)29、0)34、0)90、81整合素、cKit、SP-C、CC10、S FUDAXl和SCGlO。在大多数实施例中，所述细胞表达标记物组合。本专利技术还提供可经过诱导而分化成内胚层、中胚层或外胚层来源的细胞的类孢子细胞子群。这些类孢子细胞子群不管来源的组织如何，都可用于产生来源于全部三种胚层的细胞。本专利技术描述用于鉴别和获得类孢子细胞子群的方法。所述方法包括培养分离的类孢子细胞一段足以表达细胞表面和/或基因表达标记物的时间，以及鉴别这些细胞表面和/或基因表达标记物。还描述用于从类孢子细胞群中纯化出相关类孢子细胞子群的方法。在一些实施例中，所述方法包括(a)提供类孢子细胞群；(b)鉴别表达例如0ct4、nanog、Zfp296、cripto、Gdf3, UtFU EcatU EsgU Sox2、Pax6、巢蛋白、SCA-1、CD29、CD34、CD90、BI 整合素、cKit、SP-C、CC10、SF1、DAX1和/或SCGlO等一种或一种以上标记物的类孢子细胞子群；和(c)纯化所述子群。在一些实施例中，使用细胞表面标记物特异性抗体分离所述细胞。患有病症(例如皮肤病)、肿瘤或疾病(例如糖尿病)的患者可例如通过将类孢子细胞子群投予损伤区域(例如患者皮肤的损伤区域、切除肿瘤的区域或胰脏)来进行治疗。全身投药也是可能的。所述方法可用于治疗在例如视网膜、肠、膀胱、肾脏、肝脏、肺、神经系统(包括脊髓或脑)或内分泌系统等多种组织中的任一种中具有功能细胞缺陷或病症的患者。附图说明图I显示从胰岛瘤(胰脏肿瘤)分离的类孢子细胞。具体实施例方式I.定义如本文中所用，多能类孢子细胞是一种能够产生来源于全部三种胚层(中胚层、内胚层和外胚层)的细胞的类孢子细胞。如在类孢子细胞的上下文中使用的术语“分离的”表示这种细胞与其天然环境分开。分离的细胞可完全与其它细胞类型分离，或者可在群体中以较多量存在。如本文中所用，富集类孢子细胞的群体是这样一种细胞群，其已经与在其天然环境中存在的其它细胞分离，以致细胞混合物中这种细胞的比例高于在其天然环境中所发现或刚分离后的比例。如本文中所用，“可检测标记”是指可添加到相关结合搭配物以允许检测所述结合搭配物的任何部分。II.类孢子细胞群类孢子细胞的来源类孢子细胞可从例如禽类、爬行动物、两栖动物或哺乳动物等动物供体获得。举例来说，可从啮齿动物、兔、母牛、猪、马、山羊、绵羊、狗、猫、非人类灵长类动物或人类分离出哺乳动物类孢子细胞。类孢子细胞可从成熟动物获得。由于类孢子细胞对于缺氧的耐受性优于分化的细胞，故也可从死亡的动物(包括已经死亡达24小时或更长时间的动物)分离 有活力的类孢子细胞。类孢子细胞是从在食品杂货店购买的鸡肝(禽类)分离。初始分离时，台盼蓝染料排除测试(trypan blue dye exclusion test)显示有活力的(染料排除的)类孢子细胞极少。分离后三天，可以看到大的漂浮的类孢子细胞团，数量太多无法计数(数据未显示)。在给定的供体内，类孢子细胞可从多种来源获得。举例来说,可从体液(例如血液、唾液或尿液)和大多数(如果本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·P·瓦森提，C·A·瓦森提，
申请(专利权)人：VBI技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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