本发明专利技术公开了一种融合人白细胞介素28B及其制备方法。本发明专利技术公开的融合蛋白是人血清白蛋白和λ干扰素连接而成的融合蛋白。实验证明，用本发明专利技术的重组菌制备HSA-opt-hIL28B，表达量高。且表达产物具有较强的活性。因此，本发明专利技术重组菌及本发明专利技术方法在长效人IL28B的制备领域中有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种融合人白细胞介素28B及其制备方法。
技术介绍
干扰素(interfeixm，IFN)是人类最早发现的细胞因子，早在20世纪30年代，人们已发现机体感染某一种病毒后，会对另一种抗原性毫无关系的病毒发生干扰现象。1957年，英国病毒生物学家Alick Isaacs和瑞士研究人员Jean Lindenmann,在利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感干扰现象时了解到，病毒感染的细胞能产生一种因子，后者作用于其他细胞，干扰病毒的复制，故将其命名为干扰素，并一直沿用至今。人类IFN蛋白家族基于它们的基因序列、染色体定位和受体特异性分为三型，即I型、II型和III型干扰素，其中I型IFN家族包括至少25种亚型的IFN- α非等位基因，I个IFN-β基因，lflFN-co基因，以及了解尚少的I个IFN-K和I个IFN-ε基因，所有I型INF基因均位于9号染色体，没有内含子，并且所编码蛋白全部使用同一种受体IFN- α β R0II型IFN家族仅有IFN-Y —个成员，又称为免疫干扰素，基因位于12号染色体。III型干扰素是干扰素的一个新家族，包括IFNX-l、IFN-X2和IFN-X3 3个成员，IFN-λ s基因位于19号染色体，基因中含有多个内含子，其基因结构与IL-10家族成员十分相似，而与IFN-α相差甚远，因此IFNX-l、IFN-X2和IFN-λ 3又分别被命名为IL29，IL28A和IL28B。2003 年，Stoppard P 等运用反向生物学原理，利用 Genscan、SIGNAI、4HB、WU_BLAST等生物信息学软件鉴定了一个干扰素新家族，首次报道了其编码产物具有干扰素样活性(Sheppard P,Kindsvogel W,Xu W, Henderson K,Schlutsmeyer S,Whitmore TE,KuestnerR, Garrigues U, Birks C, Roraback J, Ostrander C, Dong D, Shin J,Presnell S, Fox B,Haldeman B, Cooper E, Taft D, Gilbert T, Grant FJ, Tackett M, Krivan ff, McKnightG,Clegg C, Foster D, Klucher KM. IL-28, IL-29 and their class II cytokine receptorIL-28R. Nat Immunol. 2003 Jan ；4(1) :63-8. Epub 2002 Dec 2·)。Kotenko S V 等将它们命名为干扰素新家族——IFN- λ s (IFN- λ I、IFN- λ 2和IFN- λ 3)。人类基因组组织(HumanGeneomeOrganization, HUGO)暂时将它们命名为 IL29、IL28A 和 IL28B。III型干扰素具有多种生物学功能，其刺激细胞可产生数百种干扰素诱导基因(ISGs)。在体外IFN-As可保护人细胞系抵抗水泡口炎病毒(VSV)和心肌炎病毒引起的细胞病变；IFN-λ I可抑制HBV和HCV在肝细胞中的复制(Doyle SE, SchreckhiseH,Khuu-Duong K, Henderson K, Rosier R, Storey H, Yao L, Liu H, Barahmand—pour F,Sivakumar P,Chan C,Birks C,Foster D,Clegg CH,Wietzke-Braun P,Mihm S,KlucherKM.Interleukin-29 uses a type I interferon-like program to promote antiviralresponses inhuman hepatocytes. Hepatology. 2006 Oct ；44(4) :896-906.)。称猴接种HIV抗原后，IFN-λ s能降低Th2型细胞因子(IL-4和IL-5和IL-13和IL-14和IL-15)的产生，这可能有利于Thl免疫途径，增加调节性T细胞，提高CD8T细胞的细胞毒性和应答记忆(Dai J, Megjugorac NJ, Gallagher GE, Yu RY, Gallagher G. IFN-Iambdal (IL-29)inhibits GATA3expression and suppresses Th2 responses in human naive and memoryT cells. Blood. 2009Jun 4 ；113(23) :5829-38.)。近年来的研究表明，IL28B 基因多态性对于HCV感染者对IFN治疗的病毒学应答具有一定的影响，与细胞因子IL28B相关的单核苷酸多态性(SNPs)，不仅与慢性HCV患者聚乙二醇干扰素/利巴韦林治疗应答有强相关性，还与急性HCV感染后的自发性病毒清除高度相关，说明其在群体水平上，是决定HCV感染治疗结果的一个重要的宿主因素(Ge D, Fellay J, Thompson AJ, Simon JS, ShiannaKV,Urban TJ, Heinzen EL, Qiu P, Bertelsen AH, Muir AJ, Sulkowski M, McHutchison JG,Goldstein DB. Genetic variation in IL28B predicts hepatitis C treatment-inducedviralclearance. Nature. 2009 Sep 17 ;461 (7262) :399-401.)。目前，人们对 III 型干扰素的生物学研究主要集中在IL29和IL28A。美国zymogenetics公司与BMS联合研发的PEG-IL29细胞因子已经进入临床研究，并展示出良好的抗HCV前景。但是IL28B作为药物的研究目如仍是一片空白。干扰素是最早发现、研究最多、第一个克隆化、第一个用于临床治疗疾病的一类重要的家族性细胞因子。其首先被发现的生物活性是抵抗病毒感染，随着研究的深入，干扰素的免疫调控、抗增殖作用以及抗肿瘤作用才逐渐为人们所认识。自1986年，美国FDA首先 批准基因工程干扰素a -2a和a -2b投放市场之后，基因工程β、Y干扰素也相继于1990年、1993年获准投放市场。近20年以来，随着基因工程技术的发展，目前已有约60个国家批准干扰素上市，用于治疗病毒性肝炎、癌症及多发性硬化症等约30多种疾病。但是干扰素相对分子质量较小，易被肾小球滤过，体内不稳定，易被血清蛋白酶降解，血浆半衰期短而治疗周期长，需要频繁注射给药。因此，为了克服以上缺点，改善重组IFNs代谢动力学及药效学特征，近年来开发出了很多类型的长效干扰素，其设计原理主要基于以下几个方面(I)增大干扰素的分子量，减少肾小球滤过率；(2)减少异源蛋白的免疫原性，从而减少其体内清除率；(3)持续缓慢释放维持药物浓度，延长药物作用时间。主要技术手段有化学修饰技术、基因融合技术、定点突变技术以及缓释给药系统等。人血清白蛋白(HS本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种融合蛋白，是人血清白蛋白和λ干扰素连接而成的融合蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨威，司有辉，杨洋，程敏，
申请(专利权)人：中国医学科学院病原生物学研究所，
类型：发明
国别省市：
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