本发明专利技术可通过将抗Ku86的试剂抗体及可结合其自身抗体的物质作用于待测样品中的Ku86和其自身抗体的复合物，以及测定得到的复合物和试剂抗体及可结合物质的免疫复合物来测定该复合物，由此，可判断是原发性肝细胞癌、大肠癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌及食道癌等之任何的癌。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于测定Ku86和其自身抗体的复合物的免疫测定方法及免疫测定用试剂盒。Ku86和其自身抗体的复合物特别是在患癌患者的血中以高值出现，从而，本专利技术不仅提供简单测定Ku86和其自身抗体的复合物的方法，还可在癌的判断中利用。
技术介绍
Ku86是与双链DNA切断相关的蛋白质，与Ku70 —同，形成被称为Ku的异源二聚体，该Ku异源二聚体与DNA依赖性蛋白激酶等共同可修复双链DNA切断(非专利文献I)另一方面，由向琼脂糖2 维电泳适用 2D-DIGE 法(two-dimensional fluorescencedifference gel electrophrosis)的改良琼脂糖2维电泳法(非专利文献2),通过蛋白质 组解析进行原发性肝细胞癌的癌部及周边的非癌部组织的表达蛋白的量的比较，得知被称为Ku86的蛋白质在癌部多表达(非专利文献3)现有技术文献非专利文献非专利文献I Li et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 9，No. 2，832-837，2002非专利文献2:Takeshi Tomonaga et al. ,Clin. Cancer Res. 2004 ； 10:2007-2014非专利文献3 :Masanori Seimiya et al. , Hepatology 2008 ；48:519-30
技术实现思路
专利技术要解决的技术课题本专利技术人发现，通过测定疑似患癌的患者或癌患者来源的组织待测样品中存在的，Ku86的表达水平，可判别它们的组织的癌部和非癌部。本专利技术人再对血液待测样品中的Ku86的存在进行持续研究时，令人惊讶地发现，有在血液待测样品中存在Ku86和其自身抗体的复合物的情况，在癌患者的情况中，该复合物的量多。从而，本专利技术的目的是提供可应用于癌判断的，Ku86和其自身抗体的复合物的测定方法。解决课题的技术方案本专利技术人发现，可通过免疫测定待测样品中的Ku86和其自身抗体的复合物测定该复合物，由此使癌判断成为可能，从而完成本专利技术。从而，本专利技术涉及待测样品中的Ku86和其自身抗体的复合物的免疫测定方法，其特征在于，免疫测定待测样品中的Ku86和其自身抗体的复合物。再者，本专利技术涉及Ku86和其自身抗体的复合物的免疫测定用试剂盒，其含抗Ku86的试剂抗体及可结合其自身抗体的物质。再者，本专利技术涉及癌判断方法，其通过测定Ku86和其自身抗体的复合物判断是癌。再者，本专利技术涉及癌判断用标志物，其含Ku86和其自身抗体的复合物。专利技术效果在本专利技术中，可简单地测定待测样品中，特别是，血液来源待测样品中存在的Ku86和其自身抗体的复合物，对于原发性肝细胞癌、大肠癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌及食道癌等的癌患者的判断有效。附图说明图I是使用致敏抗Ku86抗体的ELISA板而测定健康人血清待测样品、C型肝炎患者血清待测样品、C型肝硬化患者血清待测样品、初发原发性肝细胞癌(以下，也称之为初发HCC)患者血清待测样品及再发原发性肝细胞癌(以下，也称之为再发HCC)患者血清待测样品中Ku86和其自身抗体的复合物结果。再有，图中，横轴示疾病名，纵轴示对波长450nm光的吸光度。另外，星号示，在进行与健康人血清待测样品组、C型肝炎患者待测样品组或C型肝硬化患者血清待测样品组的比较的全部的情况中，存在通过Wilcoxon的2标本检验 的显著差异(P < 0. 0001)的血清待测样品组。图2是使用致敏抗Ku86抗体的ELISA板而测定健康人血清待测样品、初发HCC患者血清待测样品、大肠癌患者血清待测样品、胃癌患者血清待测样品、胰腺癌患者血清待测样品、乳腺癌患者血清待测样品、肺癌患者血清待测样品及食道癌患者血清待测样品中Ku86和其自身抗体的复合物结果。再有，图中，横轴示疾病名，纵轴示对波长450nm光的吸光度。另外，星号示，进行与健康人血清待测样品组的比较的情况中，存在通过Wilcoxon的2标本检验的显著差异(p < 0. 0001)的血清待测样品组。实施方式本专利技术的Ku86和其自身抗体的复合物的免疫测定方法可直接，应用作为一般蛋白质和其抗体的免疫复合物的免疫测定方法已知的公知的方法。在本专利技术的免疫测定方法中，例如，可通过将抗Ku86的试剂抗体及可结合其自身抗体的物质作用于待测样品中的Ku86和其自身抗体的复合物，以及测定得到的复合物和试剂抗体及可结合物质的免疫复合物来测定该复合物。在本专利技术中，作为待测样品，以活体来源的样品为适宜，特别是，血液来源待测样品为适宜，作为血液待测样品，可例示全血、血浆、血清。本专利技术的免疫测定方法的测定对象是Ku86和其自身抗体的复合物。如上所述，Ku86是与双链DNA切断相关的蛋白质，其正式名是ATP-依赖性DNA解链酶2亚基2(ATP-dependent DNA helicase 2subunit 2)，作为别名，也称之为 XRCC5。另外，Ku86 是在美国的国立生物工程学信息中心(NCBI)的登录号(accession No)是gi_10863945的，由732个的氨基酸组成的82kDa的蛋白质。在本专利技术中，Ku86和其自身抗体的复合物，是指Ku86和抗Ku86自身抗体的免疫复合物，在本说明书中简单记作复合物。在本专利技术中，自身抗体是指针对自身的身体中存在的物质而由自身的身体产生的抗体，自身的身体中存在的物质是Ku86，则是指针对该Ku86的抗体。在本专利技术中，抗Ku86的试剂抗体是指与作为试剂使用的Ku86特异性地结合的抗体，在本说明书也简单记作试剂抗体。该试剂抗体，作为其产生动物种，有人、小鼠、大鼠、兔、山羊、马等，各自有指定范围的免疫球蛋白。该试剂抗体是IgG、IgM、IgA、IgE、IgD之任何也可。另外，试剂抗体是单克隆抗体、多克隆抗体、及这些的片段(是与抗原有结合能力的，例如，H链、L链、Fab、F (ab’)2等)之任何也可。这样的试剂抗体可以Ku86全长蛋白质或其片段肽作为抗原，给上述的产生动物种免疫，从该免疫动物作为抗血清获得，另 外，可将从免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞融合，从融合细胞，筛选产生抗Ku86抗体的融合细胞，从得到的杂交瘤作为单克隆抗体获得。另外，抗Ku86的试剂抗体已作为抗Ku86抗体市售，使用它们的市售品也可。在本专利技术中，可结合其自身抗体的物质只要是可结合抗Ku86自身抗体的物质，就不特别限定，在本说明书中，可简单记作可结合物质。作为这样的可结合物质，可使用抗IgG抗体、蛋白A、蛋白G、作为试剂的Ku86抗原，其中，优选为抗IgG抗体。使用作为试剂的Ku86抗原时，只要是可与抗Ku86自身抗体发生抗原抗体反应的抗原，就不特别限定，作为Ku86全长蛋白质、Ku86全长蛋白质的变体，可例示有可和与该蛋白质同样的抗Ku86自身抗体发生抗原抗体反应的功能，并且与该氨基酸序列有90%以上的相同性的蛋白质，或有在Ku86全长蛋白质的氨基酸序列中I个至数个的氨基酸残基缺失、取代或附加的氨基酸序列的蛋白质的变体，作为Ku86的片段肽，可例示可与Ku86的自身抗体发生抗原抗体反应的肽。Ku86全长蛋白质可从Abnova公司得到,但由于全氨基酸序 列是已知的，所以Ku86全长蛋白质或其变体通过基因重组技本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：小岛良，野田健太，清宫正德，曾川一幸，野村文夫，
申请(专利权)人：日东纺绩株式会社，
类型：发明
国别省市：
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