涉及使用磁性颗粒的测定方法和装置制造方法及图纸

本文提供使用能够与分析物结合的第一俘获分子和也能够与分析物结合的第二俘获分子的测定装置和进行测定的方法，以测定分析物的存在情况和任选分析物的量，其中第一俘获分子携带不是磁性标记的第一标记，而第二俘获分子与磁性颗粒连接。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及诊断测定领域，具体地讲涉及其中待检测分析物存在于复杂生物样品中的开放式或至少部分开放式侧向流动测定(lateral flow assay)。本专利技术根据使用磁性颗粒作为携带俘获分子的固相可供获得改进处理样品的装置和方法；例如改进反应动力学，从而改进测定的灵敏度。
技术介绍
现今，诊断测定对于许多疾病的诊断、治疗和管理极为普及并十分重要。为了简化对例如血液、血清、血浆、尿液、唾液、组织活检、粪便、痰和皮肤或咽拭子等临床样品中各种分析物的检测，多年来已开发出不同类型的诊断测定。通常预期这些测定给出快速可靠的结果，同时又容易使用，而且制造成本低廉。可以理解的是，在一种测定和相同测定中难以满足所有的这些要求。在实践中，许多测定受限于其速度。另一个重要参数是灵敏度。测定技术 的最新发展导致越来越灵敏的测试，允许检测痕量的分析物，并且以尽可能最短的时间检测样品的疾病标志物。一次性测定装置的最普通类型由接受样品的区或区域、反应区和任选分别连接接受区和反应区的运输区或温育区组成。这些测定装置称为层析测定装置或简称为测试条(test strip)。它们采用多孔材料例如过滤材料，多孔材料限定能够支持毛细流动的液体流动路径。样品接受区常由能够吸收样品的更多孔的材料组成，当需要分离血细胞时，还有效地捕集红细胞。这类材料的实例为纤维材料，例如纸、羊毛状物、凝胶或织物(tissue)，其包含例如纤维素、羊毛、玻璃纤维、石棉、人造纤维、聚合物或其混合物。运输区或温育区通常由相同或类似的材料组成，常具有不同于样品接受区的孔隙率。同样地，反应区通常由类似的吸收纤维材料或任何上文列出的材料组成，反应区可与温育区整合，或构成其最远端的组成部分。在测定装置或测试条(strip test)中，一种或多种多孔材料被装配在载体上，例如热塑材料、纸、硬纸板等的条带上。此外，可提供覆盖物，所述覆盖物具有至少一个接受样品的口和一个允许读取测定结果的口或透明区。硝化纤维材料常用作构成运输区或反应区、连接接受区和反应区的基质。用硝化纤维的一个重大缺点是其对蛋白质和其它生物分子的高的非特异性结合。然而，目前的测试条常处理众多样品，减少了这种结合的影响。然而，需要使样品体积减至最小，符合使整个测试小型化的趋势，包括在不损害准确性和可靠性的情况下使试剂的量最小化。一种具体的测定装置类型是无孔测定，例如WO 03/103835、WO 2005/089082、WO2005/118139和WO 2006/137785中公开的开放式侧向流动装置。WO 03/103835简单提到在具有毛细结构以促进或驱动液体沿所述结构进行毛细流动的测定装置中并入“加工区室、元件和/或装置”。这些“加工区室、元件和/或装置”包括“捕集所述液体的磁性组分”的磁性部件。此外，WO 2003/103835教导了“还可在流动路径中或在流动路径附近安置用于检测磁性物质的磁体或部件。因此，磁性颗粒可被捕集并保留在结构中需要的位置上，颗粒的磁性因此可用作成功运输到系统特定点上的标志物或指示物。此外，磁性颗粒可用具有生物亲和力的物质包覆，并且用于不同类型的测定”。WO2003/103835的教导集中在利用磁性能作为另一种标志物。虽然提出磁性颗粒还可用作载体，例如用具有生物亲和力的物质包覆，但是WO 2003/103835未表明如何将之付诸实践。WO 2005/089082提到在无孔测定中使用磁性颗粒，其中利用磁性部件分离出样品的不需要的组分。WO 2006/134546涉及在包括至少一个敏感表面的敏感装置中使用磁性标记，敏感表面包含至少一类结合部位，其能够与连接磁性标记的至少一类生物实体特异性连接。敏感装置还包含至少一个磁性传感器元件，敏感装置还包含区分部件，用于以时间分辨的方式将特异性连接结合部位的磁性标记与非特异性连接的标记区分开来。WO 2007/110779公开了一种测定方法和装置，其中样品与磁性敏感性颗粒混合，且其中可通过施加的磁场操作所述颗粒。WO 2007/129275描述了一种系统，其中磁性颗粒在反应室内越过传感器表面移 动，其中分析物特异性探针或分析物类似物与传感器表面结合。US 2008160630公开了一种用于检测样品中的分析物的装置，所述装置包括具有样品区、清洁区和检测区的流体网络。分析物与利用微线圈阵列或机械可移动的永磁体在流体网络内移动的磁性颗粒相互作用。WO 2009/009408涉及用于检测分析物(例如致病细胞)的系统和方法。该方法允许直接测量分析物(例如致病生物)而无需样品制备和/或PCR。该方法包括使用具有包含大量配体的外表面的磁珠，所述配体与靶分析物特异性结合。依赖于使用磁性颗粒的生物传感器趋于在传统夹心测定中构建，其中第一俘获分子或俘获元件与磁珠结合，第二俘获分子或俘获元件与固相结合，且主要集中在利用磁性能以准确检测直到单珠粒灵敏度(Janssen等,载于Biosensors and Bioelectronics, 23(2008) 833-838)。有需要进一步改进动力学、提高用于生物化学和生物分子测定、特别是用于其中对灵敏度和准确性的要求非常高的诊断测定的方法和装置中的灵敏度和特异性。专利技术概述 本专利技术人提供使用侧向流动测定装置、优选开放式侧向流动测定装置检测液体样品中的分析物的方法，所述装置包括表面上的至少一个加样区、至少一个反应区和至少一个槽，所述各区在所述表面上形成所述样品的毛细流动路径；能够与所述分析物结合的第一俘获分子和也能够与所述分析物结合的第二俘获分子，其中所述第一俘获分子携带不是磁性标记的第一标记，所述第二俘获分子与磁性颗粒连接。按照本专利技术实施方案的方法中，所述磁性颗粒大小的范围优选为5 nm-约5000nm、更优选约50 nm-约500 nm。所述第二俘获分子和/或所述磁性颗粒还可携带可区别于所述第一标记的第二标记。在一个实施方案中，与磁性颗粒结合形成俘获缀合物的所述第二俘获分子预沉积在所述测定装置上，在加入所述样品之前或同时加入与非磁性标记结合形成检测缀合物的所述第二俘获分子。或者，所述第一俘获分子预沉积在所述测定装置上，在加入所述样品之后或同时加入所述第二俘获分子。优选所述第一俘获分子和第二俘获分子两者预沉积在所述测定装置上。按照另一个可与先描述的实施方案任意组合的实施方案，所述第一俘获分子和第二俘获分子两者沉积在所述加样区中，并且能够在样品加入所述加样区后沿所述流动路径运输，并与分析物反应，从而形成由所述分析物、第一俘获分子和第二俘获分子以及一种或多种所述标记和磁性颗粒组成的检测复合物。在上述实施方案中，所述第一俘获分子和第二俘获分子通过毛细作用力的影响随样品运输至所述反应区，形成所述检测复合物。按照可与上述实施方案任意组合的另一个实施方案，施加磁力使所述第二俘获分子与其连接的磁性颗粒一起在所述反应区内移动。在该实施方案中，检测复合物在反应区内移动，例如减缓或加速、振动或来回移动，优选利用磁力最终富集在分立位置(discretelocation)上后，定性或定量检测所述第一和/或第二标记。所述样品可以是任何生物、环境或临床样品，但是优选为取自哺乳动物的样品，仅以一些非限制性实例为例，样品选自血液、血清、血浆、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：I门德尔哈特维希，
申请(专利权)人：阿米克股份公司，
类型：发明
国别省市：