本发明专利技术涉及检测哺乳动物受试者中疾病状态或疾病易感性的方法，包括检测包含所述哺乳动物受试者体液的测试样品中的抗体，其中所述抗体是疾病状态或疾病易感性的生物标志物，该方法包括：(a)使所述测试样品接触多种不同量的所述抗体特异性抗原，(b)检测所述抗体与所述抗原之间特异性结合的量，(c)对步骤(a)中所用的每个抗原量，绘制或计算所述特异性结合量对抗原量的曲线，以及(d)基于每个所用的不同抗原浓度下所述抗体与所述抗原之间的特异性结合量，确定该疾病状态或疾病易感性是否存在。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术一般涉及诊断或预后测定领域，特别涉及优化用于在包含患者体液的样品中检测抗体的测定，其中这样的抗体用作疾病状态或疾病易感性的生物标志物。
技术介绍
许多诊断、预后和/或监测测定依赖于检测特定疾病状态或疾病易感性的生物标 志物。这样的生物标志物一般是作为特定疾病特征的或与疾病易感性相关的蛋白质或多肽。抗体特别是自身抗体也能作为疾病或疾病易感性的生物标志物,这一点在近年来开始愈专利技术显。自身抗体是天然存在的抗体，其针对被个体免疫系统识别为外源的抗原，尽管该抗原实际上源自该个体。它们可以作为循环的游离自身抗体存在于循环中，或者以由与其靶标志物蛋白结合的自身抗体组成的循环免疫复合物的形式存在。在一些情况下，正常细胞表达的野生型蛋白质与由疾病细胞产生或在疾病过程中产生的该蛋白质的改变形式之间的差异可能导致个体的免疫系统将所述改变的蛋白质识别为“非自身”，并因而在该个体中引发免疫应答。这可以是体液(即B细胞介导的)免疫应答，其引起产生对该改变的蛋白质具有免疫特异性的自身抗体。W099/58978描述了用于检测/诊断癌症的方法，该方法基于评估个体对两种或更多不同肿瘤标志物的免疫应答。这些方法通常包括使采自个体的体液样品接触具有两种或更多不同肿瘤标志物抗原的板，每种抗原来自一种单独的肿瘤标志物蛋白，并且检测该肿瘤标志物抗原与对该肿瘤标志物蛋白具有免疫特异性的循环自身抗体结合的复合物的形成。将存在这样的循环自身抗体作为存在癌症的指示。测量个体在自身抗体产生方面对存在肿瘤标志物蛋白的免疫应答的测定提供了直接测量或检测体液中肿瘤标志物蛋白的替代方案。这样的测定实质上构成了对肿瘤标志物蛋白存在情况的间接检测。由于免疫应答的性质，很可能极少量的循环肿瘤标志物蛋白即可引发自身抗体，因此依赖于检测对肿瘤标志物的免疫应答的间接方法将比直接测量体液中肿瘤标志物的方法更灵敏。因此，基于检测自身抗体的测定可能在疾病过程的早期特别具有价值，并且可能在无症状患者的筛选方面也是如此，例如进行筛选以在无症状个体的群体中鉴定具有发生疾病“风险”的个体、在无症状个体的群体中鉴定已发生疾病的个体。另外，基于检测自身抗体的方法可能在疾病过程的早期特别具有价值，并且也可能被用于在无症状群体中鉴定已发生疾病的个体。此外，它们还可能用于复发性疾病的早期检测。该测定方法在选择或监测疾病的治疗方案方面也具有价值。抗体和自身抗体也可作为其他疾病状态或疾病易感性的生物学标志物，例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、自身免疫性甲状腺炎(例如桥本甲状腺炎))、自身免疫性胃炎(例如恶性贫血)、自身免疫性肾上腺炎(例如艾迪生病)、自身免疫性甲状旁腺功能减退、自身免疫性糖尿病(例如I型糖尿病)、重症肌无力坐寸O本专利技术人认识到，当基于抗体检测的测定在诊断或预后上用于评价群体中个体的疾病状态、疾病进程或疾病易感性时，会在设计适用于整个待筛选群体的标准化测定法方面遇到困难，因为个体之间抗体的绝对量存在显著的变化。这会使假阴性结果的发生率很高，例如在抗体量低的个体中。类似地，对真阳性结果的评分也存在困难，因为个体间抗体绝对量的变化意味着难以为阳性测定结果设定适合于筛选群体中所有个体的阈值。本专利技术人现在确定，可以通过包括抗原滴定步骤来显著改善基于检测作为疾病生物标志物的抗体特别是自身抗体的测定方法的性能、更具体地为临床效用以及可靠性。通过对怀疑含有抗体的样本针对一系列不同的抗原量进行测试并创建滴定曲线，有可能独立 于样品中存在的抗体绝对量而可靠鉴定真阳性筛选结果。这样的方法与现有技术中的方法相反，在这些现有技术的方法中，滴定抗原仅用于创建校准曲线，以鉴定最适用于在实际患者样品中检测抗体的抗原浓度。在这些方法中，仅将单点测量用于实际诊断。因此，这些方法不容许个体间检测的抗体量的变化，导致发生所说的假阳性和假阴性。本专利技术人已经发现，本专利技术的抗原滴定法的特异性和灵敏度高于在单个抗原浓度下测定自身抗体的反应性以及滴定血清样品而不是抗原的方法。
技术实现思路
本专利技术的第一个方面提供在哺乳动物受试者中检测疾病状态或疾病易感性的方法，其包括在包含来自该哺乳动物受试者的体液的测试样品中检测抗体，其中所述抗体是疾病状态或疾病易感性的生物标志物，该方法包括(a)使所述测试样品与多个不同量的所述抗体特异性的抗原接触，(b)检测所述抗体与所述抗原之间特异性结合的量，(c)对步骤(a)中所用的每个抗原量，绘制或计算该特异性结合量对该抗原量的曲线，以及(d)基于每个所用的不同抗原浓度下该抗体与该抗原之间特异性结合的量，确定该疾病状态或疾病易感性的存在与否。本专利技术的第二个方面提供在包含来自哺乳动物受试者的体液的测试样品中检测抗体的方法，其中所述抗体针对引入该哺乳动物受试者的外源物质，该方法包括(a)使所述测试样品与多个不同量的所述抗体特异性的抗原接触，(b)检测所述抗体与所述抗原之间特异性结合的量，以及(c)对步骤(a)中所用的每个抗原量，绘制或计算该特异性结合量对该抗原量的曲线。本专利技术的第三个方面提供在包含来自哺乳动物受试者的体液的测试样品中检测抗体的方法，其中该抗体是疾病状态或疾病易感性的生物标志物，该方法包括(a)使所述测试样品与多个不同量的所述抗体特异性的抗原接触，(b)检测所述抗体与所述抗原之间特异性结合的量，以及(c)对步骤(a)中所用的每个抗原量，绘制或计算该特异性结合量对该抗原量的曲线。在本专利技术的所有方面中，所述哺乳动物受试者优选为人。在本专利技术的所有方面中，该方法优选在体外在包含从该哺乳动物受试者获得或制备的体液的测试样品上进行。在所有方面中，本专利技术的一个特别特征是，对测试样品中是否存在相关抗体的判断是基于每个不同测试抗原浓度下观察到的特异性结合的量(换言之，集合值)，而不是仅仅在单个浓度下的读数。因此，可以直接基于这些集合值确定患者样品中是否存在疾病状态或疾病易感性或针对外源物质的抗体。优选地，基于以特异性结合量对抗原量作图时呈现的总体为S形或反S型的曲线作出该判断。从本文实施例中显而易见地，本专利技术人观察到本专利技术的抗原滴定法与基于单个读数的诊断或检测方法相比具有更高的特异性和灵敏度，并且减少了假阳性和假阴性鉴定的发生率。附图说明 图I :使用抗原滴定曲线测量血清中的自身抗体。癌症患者血清17766(C)与测试抗原强烈结合，具有特征性反S型曲线()，但是不与阴性对照结合，VOL ( ■)。作为对比，来自正常个体的血清18052 (N)不与测试抗原或阴性对照结合。图2 :使用抗原滴定测定衡量的正常个体与原发性乳腺癌(PBC)患者中p53自身抗体水平的比较。自身抗体水平表示为由于结合测试抗原(P53)产生的OD65tl减去由于结合阴性对照产生的0D65(i。正常截止值(——)计算为正常群体的平均值加2倍标准差。图3显示使用抗原滴定测定衡量的正常个体与肺癌患者中p53和NY-ESO自身抗体水平的比较。自身抗体水平表示为由于结合测试抗原(P53或NY-ES0)产生的OD65tl减去由于结合阴性对照产生的0D65(i。正常截止值(——)计算为正常群体的平均值加2倍标准差。图4显示用于在来自乳腺癌患者的腹水样品中检测针对p53和NY-ESO的自身抗体的滴定曲线。本文档来自技高网...
【技术保护点】
多种不同量的抗原在制备用于在包含哺乳动物受试者体液的测试样品中检测抗体谱之药剂中的用途，其中所述抗体为疾病状态或疾病易感性的生物标志物，其中所述检测包括：(a)使该测试样品接触所述多种不同量的该抗体特异性抗原，(b)检测该抗体与该抗原之间特异性结合的量，以及(c)对步骤(a)中所用的每一个抗原量，绘制或计算该特异性结合量对该抗原量的曲线，从而建立疾病发作前或整个疾病过程中所述受试者的抗体产生谱，其中重复该检测以建立抗体产生谱。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：约翰·福赛思·鲁塞尔·罗伯特森，托尼·巴尔内斯，安德烈亚·默里，卡罗琳·查普曼，
申请(专利权)人：昂西免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：
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